Negatīvs krāsošanas pamats, tehnika, priekšrocības un trūkumi

The negatīva krāsošana Tā ir īpaša krāsošanas metode, lai izceltu kapsulas klātbūtni dažos mikroorganismos - galvenokārt Streptococcus pneumoniae, Klebsiella pneumoniae un Cryptococcus neoformans-, no klīniskajiem paraugiem vai tīrajām kultūrām.

Tiešais paraugs, ko parasti izmanto negatīvas krāsošanas veikšanai, ir cerebrospinālais šķidrums. Šī metode ir ātra alternatīva meningīta iespējamai diagnozei, īpaši Cryptococcus neoformans.

Tāpat šo traipu var uzklāt uz krēpām un steriliem šķidrumiem kopumā, kā arī uz celmiem, kas iegūti no jaunām tīrajām kultūrām. Šī metode izmanto nigrosīnu vai ķīniešu tinti tā izpildei; tāpēc ir ļoti vienkārša un ekonomiska metodoloģija, kas īsā laikā sniedz lielu diagnostisko vērtību.

Šajā ziņā jebkura laboratorija spēj veikt šo krāsu. Protams, laboratorijai jābūt kompetentam personālam, kas spēj atpazīt rauga raugus Cryptococcus neoformans izolēti vai novecojuši un atšķir tos no leikocītiem un artefaktiem, ko paraugs var saturēt.

Indekss

• 1 Fonds
• 2 Metode
  • 2.1 Materiāli
  • 2.2 Paraugu ņemšanas specifikācijas
  • 2.3 Tehnoloģijas izpilde ar tiešiem paraugiem
  • 2.4. Tehnoloģijas īstenošana ar kultūras celmiem
  • 2.5 Novērošana mikroskopā
• 3 Priekšrocības
• 4 Trūkumi
• 5 Audu krāsošana ar Indijas tinti
• 6 Atsauces

Fonds

Nigrozīns un Indijas tinte darbojas līdzīgi; tādēļ jebkura no šīm divām vielām var tikt izmantota aizvietojamā veidā.

Šo metodi sauc par negatīvu krāsošanu, jo tā darbojas pretēji pārējām krāsošanas metodēm. Tas, kas paliek neapdomāts, ir struktūra, kas tiek meklēta vai kuru vēlaties redzēt; tas ir, mikroorganismi.

Tāpēc krāsojums ir balstīts uz smērvielu apakšējās daļas krāsošanu tumšā krāsā. Šajā scenārijā ierobežotās struktūras tiks izceltas gaišā vai bezkrāsaina krāsā.

Parasti raugi tiek novēroti atturoši, ko ieskauj skaidra halo, kas atbilst kapsulai. Tas notiek tāpēc, ka ķīniešu tinte un nigrosīns ir vielas, kas nespēj iekļūt polisaharīdā, kas veido dzīvu mikroorganismu kapsulu..

Ir vērts atzīmēt, ka citas struktūras, kas var būt tiešā paraugā, piemēram, leikocīti vai sarkanās asins šūnas, neietekmē.

Tagad, ja mikroorganismi ir miruši, tinktūra var iekļūt to iekšpusē tādā veidā, ka šī krāsošana ir noderīga arī mikroorganismu dzīvotspējas novērtēšanai..

Tehnika

Materiāli

Nigrosīns

Nigrosīna nosaukums ir melnā krāsā. Tā ir sintētiska viela, ko iegūst, karsējot organisko savienojumu maisījumu, piemēram, nitrobenzīnu, anilīnu un anilīna hidrohlorīdu, izmantojot katalizatoru (dzelzi vai varu) minētajā reakcijā..

Ķīniešu tinte

Ķīniešu tinte ir viela, ko galvenokārt izmanto aziāti rakstīšanai, mākslas darbu izgatavošanai un monohromatiskai krāsošanai. Tas ir ļoti populārs ķīniešu kultūrā.

To iegūst no kalmāra tintes, kas sajaukta ar pulverizētu ogli, mazu sveķu koku degšanas produkts.

Ir arī iespējams to pagatavot no ogļūdeņražu (augu eļļu) sadedzināšanas kvēpi, kā arī ar proteīna želatīnu, kas dod tam pareizu konsistenci, lai novērstu oglekļa daļiņu nokrišanu.

Paraugu ņemšanas specifikācijas

- Nav nepieciešama badošanās.

- CSF, krēpu vai sterila šķidruma paraugam jābūt vismaz 1 ml tilpuma un nekavējoties jāpārnes uz istabas temperatūru laboratorijā..

- CSF un sterili šķidrie paraugi jāieņem specializētam ārstam.

- Tas var būt arī tīras kultūras aizdomās turētais celms, kas saistīts ar iepriekš minētajiem patogēniem.

Tehnikas izpilde ar tiešiem paraugiem

- Paraugus centrifugē, tad supernatants tiek izmests un nogulsnes ņem.

- Uz tīra slaida tiek ievietots centrifugēta materiāla piliens (sedimenti) un ķīniešu tinte vai nigrosīns..

- Tas labi jāsamaisa un jāpārklāj ar vāciņu, ļaujot pilienam izkliedēties kā plānas plēves, nepārkāpjot malas.

- Pēc tam preparāts ir uzstādīts mikroskopā.

- Ja preparāts ir pārāk tumšs, to var atšķaidīt ar ūdeni.

Tehnoloģijas izpilde, izmantojot kultūru celmus

- Ļoti neliela daļa jaunās kultūras tiek ņemta ar sēšanas adatu un izšķīdināta pilī ķīniešu tintes, kas iepriekš novietota uz tīra slaida.

- Uz augšu ir ievietots pārsegs.

- To novēro mikroskopā pie 10X un tad 40X.

Jūs varat arī izšķīdināt daļu kolonijas destilētā ūdenī, un no turienes paņemiet pilienu un sajauciet ar tinti. Šādā veidā preparāts nebūs tik biezs, kas ļaus novērot struktūras izolēti; Ja ir aglomerācijas, tas netiks ievērots labi.

Vēl viena metodoloģija ir šāda:

- Ievietojiet suspensijas suspensijas pilienu vienā slaida galā.

- Novietojiet nigrosīna pilienu vienā un tajā pašā galā un samaisiet.

- Ar cita slaida palīdzību pagariniet paraugu tā, it kā jūs darītu hematoloģisku uztriepes.

- Ļaujiet nožūt un novērot zem mikroskopa.

Novērošana mikroskopā

Vispirms jums ir jākoncentrējas ar 10X mērķi, lai būtu plašs skats uz lauku. Pēc tam jums vajadzētu meklēt, ja ir skaidras telpas; ja ir, fokusējiet ar 40X, lai redzētu detaļas.

Priekšrocības

- To ir viegli izpildīt.

- Tā ir ekonomiskā metode.

- Šī metode neprasa, lai uztriepes tiktu piestiprinātas pie karstuma vai ķimikālijām; tādēļ mikroorganismi tiek novēroti bez traucējumiem.

- Svaigu preparātu nav nepieciešams žāvēt, tāpēc to var nekavējoties novērot, ātri radot rezultātus.

Trūkumi

Pēc montāžas svaigi preparāti jāievēro nekavējoties; ja viņiem ir atļauts nožūt, vairs nav iespējams tos novērot un jaunu.

Audu krāsošana ar Indijas tinti

Vēl viena ķīniešu tintes funkcija var būt patoloģijas laboratorijās. Tas attiecas uz audu paraugiem, kas ķirurģiski noņemti, lai atzīmētu audzēja rezekcijas robežas.

Atzīmēto audu izsmidzina ar etiķskābi. Tas darbojas kā neskaidrs un novērš tintes nokļūšanu, kad audiem tiek veikta parastā biopsijas sagatavošanas apstrāde..

Procedūra sastāv no audu peldēšanas alkohola un ksilola, un pēc tam iegremdējot parafīnu. Šis marķējums ved patologu, novērojot audus, norādot, kur ir ķirurģiskās rezekcijas robeža vai cits interesējošais punkts.

Atsauces

1. "Nigrosina". Vikipēdija, brīvā enciklopēdija. 11 jūlijs 2017, 22:46 UTC. 2019. gada 16. janvāris, 16:56: en.wikipedia.org
2. "Ķīniešu tinte". Vikipēdija, brīvā enciklopēdija. 1. oktobris 2018, 03:08 UTC. 2019. gada 6. janvāris, 18:20: en.wikipedia.org/
3. Silva L, Silva C, Fernández N, Bueno C, Torres J, Rico M, Macías J un līdzstrādnieki. (2006). Ekstremaduras autonomā apgabala darbaspēks. Īpašā programma IV sējums. Redakcijas MAD. Sevilja – Spānija, 211. – 21. Lpp.
4. Silva M, Garsija M, Corrales J, Ponce E. (2006. g.). Galīsijas veselības dienesta (SERGAS) speciālistu laboratorijas tehniķis. Priekšmeta specifiskais apjoms 2. Redakcijas MAD. Sevilja - Spānija, 79. – 80. Lpp.
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott mikrobioloģiskā diagnoze. 12 ed. Argentīna Panamericana S.A Redaktors