Wright traipu pamats, materiāli, tehnika un pielietojumi



The Wrigth traipi ir krāsošanas tehnika, ko 1902. gadā radīja amerikāņu patologs Džeimss Homers Vrits, no Romanovska traipiem. Kā Romanowsky traipu bija nestabils, Wrigth iekļāva metanolu kā šķīdinātāju un fiksatoru.

Šī krāsa ir polihromatiska, kas nozīmē, ka tā rada vairākas krāsas atkarībā no struktūras, ko krāsviela absorbē. Šī krāsošanas metode ir plaši izmantota, lai veiktu diferenciālo balto asins šūnu skaitu un pētītu sarkano asins šūnu, trombocītu un leikocītu morfoloģiju perifēriskajā asinīs un kaulu smadzenēs..

Tās lietošana ir ļoti svarīga, jo atšķirīgas asins šūnu līnijas var novērot anomālijas, kas atvieglo tādu slimību diagnozi kā leikēmija vai bakteriālas vai parazitāras infekcijas..

Iespējams, tie ir visizplatītākie lietojumi, kuros tiek izmantota šī metode, tomēr tie nav vienīgie. Tas ir noderīgs arī citos paraugos, kas nav asinis un kaulu smadzenes, piemēram, deguna izdalīšanās paraugi, fekāliju gļotas, krēpas, āda..

Indekss

  • 1 Wright traipu fonds
  • 2 Materiāli
    • 2.1. Sagatavošana
    • 2.2. Buferētais buferšķīdums
    • 2.3. Papildu materiāli, kas nepieciešami krāsošanai
  • 3 Wright traipu komponenti
    • 3.1. Metanols
    • 3.2 Amortizators
    • 3.3. Eozīns (Y)
    • 3.4. Metilēnzilā krāsā
  • 4 Tehnika
  • 5 Lietderība
    • 5.1 Hematoloģija
    • 5.2. Deguna sekrēcija
    • 5.3. Parazitoloģija
    • 5.4 Elpceļu infekcijas
    • 5.5. Bakterioloģija
    • 5.6 Mikoloģija
  • 6 Kā ar Wright traipu tiek novērotas asins parauga struktūras??
  • 7 Ieteikumi par labu krāsošanu
  • 8 Bieži pieļautas kļūdas Wrigth krāsā
    • 8.1 Ļoti gaiša krāsošana
    • 8.2. Krāsvielas nogulsnes
    • 8.3 Smērēt ar ļoti sarkanīgu vai zilu krāsu
  • 9 Uzglabāšanas režīms
  • 10 Atsauces

Wright traipu pamats

Wrighta traipu piedzima no Romanowsky traipiem, kas sastāv no metilspirta šķīduma no skābes krāsas (eozīns Y) un bāzes (metilēnzilā) un tā oksidācijas produktiem..

Krāsu, ko izmanto Wright traipiem, maisījums izraisa Romanowsky pazīstamo efektu, tas ir, ka tas nodrošina skaistu purpura krāsu leukocītu kodoliem un neitrofilajām granulām, bet sarkanās asins šūnas ir krāsotas rozā krāsā..

Komponenti, kas ir atbildīgi par Wright tipiskajam krāsu diapazonam, ir zils B un eozīns Y. Novērotā ietekme būs atkarīga no krāsvielu saistīšanās ar ķīmiskajām struktūrām un zilā B un eozīna Y mijiedarbību..

Skābes struktūras, piemēram, nukleīnskābes, kodolproteīni un dažu šūnu tipu reaktīva nenobriedusi citoplazma, nosaka zilo B (pamata krāsu).

Kaut arī pamata struktūras, piemēram, hemoglobīns, segmentēto eozinofilu granulas, starp citām šūnu struktūrām, fiksē eozīna Y (skābes krāsu).

Krāsošanas rezultātu var ietekmēt dažādi faktori, piemēram, Wright krāsvielas pH, buferšķīdums un mazgāšanas šķīdums; kā arī krāsošanas un fiksēšanas laiku.

Tādēļ katrs reaģentu sagatavošanas posms ir izšķirošs, un tas jādara, rūpējoties par katru detaļu.

Materiāli

Wright krāsošana. 100 ml ir nepieciešams:

Nosver 0,3 g Wright krāsu, izmēra 97 ml metanola un 3 ml glicerīna.

Sagatavošana

Cepeškrāsnī ievietojiet lielo Wright krāsu un lēnām pievienojiet glicerīnu, līdz pulveris ir pilnībā izšķīdis..

Tad pievieno metanolu, sajauc un ielej dzintarkrāsas pudelē.

Pirms šķīduma lietošanas sakrata ar maigām kustībām un filtru.

Buferēts buferis

Litrā destilēta ūdens, 3,76 g dinātrija hidrofosfāta (Na2HPO4   2H20) plus 2,1 g kālija dihidrogēnfosfāta (KH)2PO4).

Ļoti labi samaisa, līdz visi izlietotie reaģenti ir izšķīduši. Noregulējiet pH līdz 7.2. Ielej stikla burkā un turiet istabas temperatūrā.

Papildu materiāli, kas nepieciešami krāsošanai

Bez tam, krāsošanas tehnikas veikšanai ir vajadzīgi citi materiāli, tie ir: loksnes, kas satur priekšmetus vai aptver priekšmetus, krāsojuma tiltu, pisetas ar ūdeni vai mazgāšanas buferi, hronometrs, lai uzņemtu krāsošanas laikus, un daži žāvēšanas materiāli (absorbējošais papīrs, marle vai kokvilna).

Wright traipu komponenti

Metanols

Alkohols (metanols) kalpo kā asins uztvērēja fiksators.

Būtībā tas ir reducējošs reaģents, dehidrators un koagulantu fiksators. Tāpēc tās funkcija ir proteīnu koagulācija un to nešķīstamība, bet nesamazinot tos.

Metanols ir visplašāk izmantotais reaģents, ar kuru nosaka labojumus visās laboratorijās, jo tas nodrošina labākus rezultātus nekā tie, kas iegūti ar etanolu. Ideāla koncentrācija ir 99%.

Amortizators

Buferšķīdumam (buferētajam šķīdumam) ir funkcija krāsvielas pH regulēšana vai saglabāšana, jo pH, kas pielāgots 7,2, ir būtisks, lai šūnu struktūras absorbētu krāsvielas pareizi.

No otras puses, metanola fiksācijas pāreja dehidratē šūnas un buferis palīdz tos hidratēt.

Eozīns (Y)

Eozīnam ir afinitāte pret pamata komponentiem, jo ​​tā ir skāba krāsa. Divi eozīna veidi ir ļoti līdzīgi viens otram, tāpēc var izmantot vienu no diviem no tiem, iegūstot tādu pašu rezultātu.

Vienu sauc par eozīnu Y, dzelteno eozīnu vai tetrabromofluoresceīnu un otru eozīnu B, zilganu eritrozīnu B vai dibromodinitrofluoresceīnu. Tomēr visbiežāk tiek izmantots eozīns Y.

Šīs krāsvielas svarīgākā īpašība ir tās negatīvā polaritāte, tāpēc to piesaista šūnu struktūras ar pozitīvu uzlādi.

Metilēnzilā krāsā

Tā ir pamata krāsviela. Tās galvenā īpašība ir metachromasia, tas ir, ne visas struktūras tiks krāsotas vienā krāsā, tas ir atkarīgs no struktūru ķīmiskās sastāva..

Daži kļūs gaiši vai tumši zili un citi tumši violeti vai gaiši violeti.

Tehnika

1-Veikt parauga izplatīšanos tā, lai plāksnīte vai pārsegs paliktu plāna plēve.

2-Ļaujiet gaisam sauss apmēram 2 stundas.

3-Novietojiet sauso uztriepi uz krāsošanas tilta vai krāsošanas paplātes ar paraugu uz augšu.

4-Novietojiet loksni ar Wright krāsu uz pilienu, līdz tas aptver visu virsmu. Atstājiet uz 5 - 8 minūtēm.

5 - Krāsai ir pilnībā jāaizklāj slaidu, nepārplūstot virs malām. Ja krāsošanas laikā tas sāk iztvaikot, jānovieto papildu pilieni.

6-Pēc tam pievienojiet vienādu daudzumu amortizatora, nedaudz izsitiet, līdz parādās raksturīgais metāliskais spīdums. Veikt 10 līdz 15 minūtes.

7-Nomazgājiet ar krāna ūdeni, ievietojot mīkstu strūklu, līdz loksne izskatās rozā.

8-Ar spirtu, kas piesūcināts ar spirtu, noņemiet krāsu, kas pievienota slaida aizmugurē.

9 - Ļaujiet smērvielai ļoti labi nožūt, pirms iegremdēšanas eļļu ievietojat mikroskopā.

Lietderība

Hematoloģija

Tas ir ideāli piemērots perifēro asiņu smērēšanai, biezu asins uztriepju pārbaudei un kaulu smadzeņu paraugu šūnu pētīšanai.

Šīs krāsvielu kombinācijas ķīmisko īpašību dēļ šūnu struktūras var viegli atpazīt, jo tās spēj atšķirt dažādus klātesošos šūnu veidus..

Deguna sekrēcija

Šī metode ir ļoti noderīga, lai noteiktu deguna sekrēcijas šūnas (epitēlija šūnas, segmentētas eozinofīles, polimorfonukleozi) alerģiskā rinīta diagnosticēšanā..

Parazitoloģija

Šajā ziņā tā ir bijusi noderīga pētījumam Leishmania sp zemādas šūnu audu histiocītos. Tāpat to lieto, lai identificētu leikocītus izkārnījumu paraugos (fekāliju leucogrammā)..

Šajā gadījumā ārsts ir ieinteresēts zināt, vai izkārnījumos esošā leikocitoze ir polimorfonukleāra vai mononukleāra. Šis konstatējums izkārnījumu leopogrammā palīdzēs, ja tā ir attiecīgi bakteriāla vai vīrusu infekcija.

No otras puses, asinīs cirkulējošie parazīti var atrasties eritrocītu iekšienē vai brīvi plazmā. Vēlamie parazīti ir Plasmodium spp, Trypanosoma cruzii un veterinārmedicīnā tas ir noderīgs, meklējot Theileria equi un Babesia caballi, zīdaiņu izraisītāji, īpaši zirgiem.

Wright un Giemsa traipi var diferencēt hemoparazītus no normāliem šūnu komponentiem. Lai to izdarītu, varat izmantot divu veidu izplatīšanas veidus:

Smalkas stiepjas

Asinis izlīdzinās kā plāna plēve uz slaida. Krāsots ar Wright traipu, atklājot kodola un citoplazmas īpašības.

Biezs kritums

Šo metodiku izmanto, lai pētītu parazītu klātbūtni lielā asins daudzumā.

Šim nolūkam uz slaida tiek ievietots liels asins piliens. Kad esat tur, jums vajadzētu defibrinēt, padarot lielākus un lielākus lokus no centra uz āru, izmantojot citas slaida malas.

Visbeidzot, lai varētu novērot parazītus biezajā uztriepē, eritrocīti jāšķīdina ar ūdeni.

Elpošanas ceļu infekcijas

Elpošanas līmenī šī metode ir noderīga arī tāpēc, ka šūnu klātbūtne krēpu paraugos, bronhu vai bronhu-alveolārā skalošana ir svarīga diagnozes noteikšanai..

Tāpat var atšķirt polimorfonukleārās šūnas un mononukleārās šūnas.

Bakterioloģija

Šīs metodes izmantošana bakterioloģijā ir ierobežota, jo tā nav laba baktēriju krāsošanai, tāpēc to krāsošanai tiek izmantotas citas specializētas krāsošanas metodes..

Tomēr tā tika izmantota, lai meklētu epitēlija šūnas ar Chlamydia trachomatis urīnizvadkanāla vai endocervikālā gļotādas uztriepes, lai gan ir jāatzīst, ka tā nav labākā metode.

Ir arī iespējams novērot spirālveida baktērijas sarkano asins šūnu vidū Borrelia burgdorferi inficētiem pacientiem, kā arī morulām vai inkubācijas ķermeņiem Ehrlichia sp limfocītu, monocītu vai neitrofilu citoplazmā.

Mikoloģija

The Histoplasma capsulatum ir patogēns sēne, ko bieži diagnosticē dažādu audu paraugu mikroskopisks novērojums, kas iekrāsots ar Wright traipu.

Kā ar Wright traipu tiek novērotas asins parauga struktūras?

Ieteikumi par labu krāsošanu

Asins paraugu pagarinājumi ir jāmazgā spontāni. Smērvielām jābūt pēc iespējas plānākām, lai iegūtu labāku krāsojuma fiksāciju un izvairītos no pārmērīgas iekrāsošanas.

Augstas kvalitātes krāsošanai ieteicams krāsot divas stundas pēc uztriepes sagatavošanas. No otras puses, ideāls paraugs ir kapilāru asinis bez antikoagulanta.

Tomēr, ja lieto vēnu asinis, tas jāizmanto kā EDTA antikoagulants, nevis heparīns, jo pēdējais var deformēt šūnu struktūras.

Lai izvairītos no bojājuma, sagatavotā krāsviela jāuzglabā sausās vietās.

Mazgāšanas laikā ieteicams izmantot neitrālu pH līmeni.

Visbeidzot, ir ieteicams pārbaudīt krāsošanas metodes, ko laboratorijā izmanto tik bieži.

To veic, krāsojot paraugus vai paplašinātus modeļus kā kvalitātes kontroli. Šis solis ir svarīgs, jo tas nodrošina, ka krāsošana ir pienācīgi sagatavota un krāsošanas laiki ir labi standartizēti.

Ja rakstu lapa ir slikti krāsaina, tad ir problēmas, kas jārisina.

Bieži pieļautas kļūdas Wrigth krāsā

Ļoti gaiša krāsošana

Ļoti gaišas uztriepes, parasti sakarā ar ļoti īsu krāsošanas laiku vai ļoti pārspīlētu mazgāšanu. To koriģē, pagarinot kontakta laiku ar krāsu vai samazinot mazgāšanas laiku.

Krāsas nogulsnējas

Krāsu nokrišņu klātbūtne uztriepēs var izraisīt vairākus iemeslus, tomēr visbiežāk sastopamie cēloņi ir: nefiltrētu krāsu izmantošana, krāsošana uz nelīdzenām krāsošanas tiltiem, netīrās loksnes ar putekļiem vai taukiem, neizmantojot labu mazgāšanu. Pabeigt krāsošanu.

Smērēt ar ļoti sarkanīgu vai zilu krāsu

Buferis ir atbildīgs par krāsvielas pH. Krāsvielas, kuru pH ir zemāks par norādīto (skābi), radīs ļoti sarkanas uztriepes.

Ja krāsvielas pH ir augstāks (sārmains), tiks iegūts ļoti zilganais uztriepes.

Uzglabāšanas režīms

Reaģents jāuzglabā istabas temperatūrā.

Atsauces

  1. Gutiérrez V. Salīdzinošs pētījums starp Wright krāsošanas metodi un Elisa testu Ehrlichiosis canina diagnosticēšanai San Pedro Sula pilsētā Hondurasā. 2008. Diplomdarbs, lai pieteiktos veterinārārsta nosaukumam. San Carlos de Guatemala universitāte.
  2. López-Jácome L, Hernández-Durán M, Colín-Castro C, Ortega-Peña S, Cerón-González G, Franco-Cendejas F. Pamata krāsošana mikrobioloģijas laboratorijā. Invaliditātes pētījumi. 2014; 3 (1): 10-18.
  3. "Wright traipi." Vikipēdija, brīvā enciklopēdija. 18. maijs 2018, 12:05 UTC. 2018. gada 8. decembris, 20:37
  4. Calderón A, Cardona J, Vergara Ó. Biežums Babesia spp. Montería, Córdoba (Kolumbija) zirgiem. Rev.  2013. gads; 16 (2): 451-458.
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A (2009). Bailey & Scott mikrobioloģiskā diagnoze. 12 ed. Argentīna Panamericana S.A Redaktors.
  6. Retamales E, Mazo V. Sabiedrības veselības institūts Čīles valdība. Ieteikumi asins uztriepju krāsošanai asins analīzes lasīšanai.