Krāsas pēc maija Grünwald-Giemsa fonda, tehnikas un izmantošanas



The Maijs Grünwald-Giemsa traipu o Pappenheim ir diferenciāla krāsošanas tehnika, kas sajauc Giemsa un May Grünwald reaģentus. To lieto, lai diferencētu normālas un patoloģiskas asins šūnas perifērās asins un kaulu smadzeņu uztriepes, kā arī histoloģisko sekciju un citoloģisko paraugu krāsošanai..

Abi reaģenti - Gemsa un May Grünwald - ir iegūti no Romanowsky tipa krāsošanas, kas balstās uz skābes un bāzes krāsvielu kombināciju..

Giemsa metodi uzlaboja, stabilizējot eozīna, metilēnzilā un tā atvasinājumu maisījumu ar glicerīnu. Turpretī Grünwald izmanto eozīnu un metilēnzilu, izmantojot šķīdinātāju kā metanolu. Šī stratēģiskā kombinācija ir devusi lieliskus rezultātus.

Lai gan attiecībā uz šūnu morfoloģijas novērošanu, līdzīgi kā Giemsa un Wright krāsām, šī metode uzlabo iepriekšējos, koriģējot parazītu, kas izraisa malāriju, Chagas slimību, leishmaniasis un trichomonozi, krāsu..

Turklāt tā ir izrādījusies ļoti noderīga spermas šķidruma citoloģiskās izpētes metode. Tas ir uzsvērts ne tikai, parādot spermas morfoloģiskās īpašības, bet arī ļauj atšķirt ar lieliem efektivitātes leukocītiem, epitēlija šūnām un spermatogenizācijas šūnām..

Indekss

  • 1 Fonds
    • 1.1 Krāsu daudzveidība
  • 2 Metode
    • 2.1 Materiāli
    • 2.2 Koncentrēts krāsu šķīdums maijs Grünwald
    • 2.3 Koncentrēta Giemsa krāsa
    • 2.4 Buferšķīduma sagatavošana pie pH 7,2
    • 2.5 Asins uztriepes vai kaulu smadzeņu krāsošanas procedūra
    • 2.6 Spermas šķidruma paplašinātā krāsošanas tehnika
    • 2.7 Svarīgas specifikācijas
  • 3 Lietojumi
    • 3.1. Maksts citoloģija
    • 3.2. Spermas paraugs
  • 4 Atsauces

Fonds

Šī metode seko Romanowsky traipiem, kuros skābajām krāsvielām ir selektīva afinitāte pret šūnu pamatkomponentiem, un skābās sastāvdaļas piesaista pamata krāsvielas.

Citādi izskaidrots, ka gan šūnu struktūrām, gan krāsvielām ir pozitīva vai negatīva elektriskā lādiņa; vienlīdzīgas izmaksas atbaidās un tiek piesaistītas dažādas maksas.

Piemēram, bāzes krāsvielas, piemēram, metilēnzils, ir pozitīvi uzlādētas un tās piesaista negatīvi uzlādētas struktūras. Tāpēc šī krāsviela iekrāso kodolus, kas ir bagāti ar DNS un RNS, kam ir negatīvi lādētas fosfātu grupas.

Arī RNS saturošo mononukleāro balto asins šūnu segmentēto basofilu un citoplazmu granulas ir iekrāsotas..

Tāpat, skābes krāsviela ir negatīva lādiņa, tāpēc tā pievienojas pozitīvi uzlādētām struktūrām, piemēram, eritrocītiem un segmentēto eozinofilu granulām. Attiecībā uz segmentēto neitrofilu granulām tās fiksē abas krāsvielas.

Krāsvielu daudzveidība

Šajā metodē pastāv kombinācija starp ortochromatiskām krāsvielām un metakromatiku. Ortochromatics (eozīns un metilēnzils) saistās ar šūnu struktūru, kurai tie ir saistīti, un nodrošina stabilu krāsu, kas nemainās.

No otras puses, metahromatiskie produkti (metilēnzilā azūras A un debeszila B atvasinājumi) mainās to sākotnējā krāsa, kad tie ir piesaistīti specifiskajai struktūrai, un var būt pat dažādi toņi.

Visbeidzot, May Grünwald risinājuma solis prasa ūdens klātbūtni, jo bez tā krāsviela iekļausies konstrukcijās, bet netiks fiksēta. Lai tas notiktu, krāsvielai ir jākļūst polārai vai jonizētai, un tādējādi tā var nogulsnēt un pievienot saistītām struktūrām.

Tehnika

Materiāli

- Slaidu slaidi.

- Krāsošanas tilti.

- May-Grünwald risinājums.

- Giemsa traipi.

- Destilēts ūdens.

Koncentrēts krāsu šķīdums maijs Grünwald

Mums jāsver 0,25 g eozīna-metilēnzilā (krāsviela pēc May Grünwald) un izšķīdina 100 ml metanola. Tad maisījumu sajauc 1 stundu un atstāj uz 24 stundām. Beigās laiks, tas filtrē.

Lai izmantotu šo metodi, May Grünwald krāsviela jāatšķaida šādi: 200 ml atšķaidītas krāsvielas tiek mērīts 30 ml koncentrēta šķīduma, pievieno 20 ml buferšķīduma un 150 ml destilēta ūdens, kas noregulēts līdz pH 7,2-7,3. . Pēc tam to sajauc un filtrē.

Koncentrēta Giemsa krāsa

Nosver 0,5 g azur-eozīna metilēnzilā (krāsviela saskaņā ar Giemsa), izšķīdina 50 ml metanola un maisījumā ievieto 50 ml glicerīna..

Lai veiktu metodi, atšķaidiet 1:10 ar buferšķīdumu un ļaujiet tai atpūsties 10 minūtes. To var filtrēt, ja nepieciešams.

Buferšķīduma sagatavošana pie pH 7,2

Tie ir jānosver:

- 40 mg kālija di-hidrogēnfosfāta (KH2PO4).

- 151 mg di nātrija hidrogēnfosfāta 12-hidrāts (Na2HPO4).

Abus savienojumus izšķīdina 100 ml ūdens.

Asins uztriepes vai kaulu smadzeņu krāsošanas procedūra

Ir divi veidi: klasisks un ātrs.

Klasiskais režīms

  1. Uzklājiet uztriepes 2 vai 3 minūtes ar atšķaidītu May-Grünwald šķīdumu.
  2. Lai novērstu iepriekšējo šķīdumu, nomazgājiet ar buferētu destilētu ūdeni.
  3. Pārklāj ar to pašu buferšķīduma šķīdumu un atstāj uz 1 minūti. Ideja ir tāda, ka iepriekšējā krāsviela ir piestiprināta pie konstrukcijām un vienlaicīgi šūnas ir hidratētas.
  4. Pievienojiet 12 pilienus atšķaidīta Giemsa tinktūra uz buferētā ūdens un trieciet, lai samaisītu un homogenizētu. Ļaujiet stāvēt 15 vai 20 minūtes.
  5. Mazgājiet uztriepes ar buferētu destilētu ūdeni un novieto to nožūt.
  6. Fokusējiet un novērojiet optiskā mikroskopā asins šūnas, kas iekrāsotas, izmantojot 40X mērķi. Ja nepieciešams, var izmantot 100X.

Ātrais režīms

  1. Pārklājiet uztriepes ar May Grünwald krāsu, kas atšķaidīta 1 minūtes.
  2. Mazgāt ar buferētu destilētu ūdeni.
  3. Pārklāj ar buferētu ūdeni un ļaujiet nostāvēties 1 minūtes.
  4. Atšķaidīto Giemsa krāsu ievieto un atstāj uz 5 minūtēm.
  5. Mazgājiet ar buferētu destilētu ūdeni un ļaujiet tai nožūt.

Šeit aprakstītās metodes ir vadošais ceļvedis, bet jāņem vērā, ka procedūras un krāsošanas laiki atšķiras atkarībā no komerciālās ēkas, kas piegādā reaģentus. Ieteicams ievērot katras komerciālās mājas noteiktās darbības.

Spermas šķidruma paplašinātā krāsošanas tehnika

1 - Uzklājiet izkliedēšanu ar plāno May Grünwald šķīduma slāni 4 minūtes.

2- Izņemiet krāsu un nomazgājiet ar destilētu ūdeni.

3 - Novietojiet atšķaidīta Giemsa (1:10) slāni destilētā ūdenī 15 minūtes.

4- Izņemiet krāsu un nomazgājiet ar destilētu ūdeni.

5- Ļaujiet nožūt un novērot zem mikroskopa.

Svarīgas specifikācijas

Metode prasa, lai reaģentu un mazgāšanas šķīdumu pH būtu noregulēts līdz 7,2-7,3, lai šūnu struktūru krāsvielu afinitāte neizkropļotu un nemainītu gaidāmo krāsu..

Lietojumi

Šo paņēmienu izmanto klīniskās laboratorijas, lai notīrītu perifērās asins un kaulu smadzeņu, audu sekciju un citoloģiju uztriepes.

Hematoloģiskajā jomā šī metode ir ļoti svarīga šūnu patoloģiju izpētei pēc formas, lieluma un skaita. Tas ir ļoti vērtīgs līdzeklis noteiktu slimību, piemēram, leikēmijas un anēmijas, diagnosticēšanai.

Turklāt tas rada izcilu lietderību, meklējot parazītus hematoloģiskos laukos (Plasmodium sp un Trypanosoma cruzi) vai histoloģiski (Leishmanias sp).

Maksts citoloģija

Attiecībā uz vaginālo citoloģiju šī metode ir īpaši izdevīga novērošanai Trichomonas vaginalis. Tas ir svarīgs secinājums, jo tā klātbūtne imitē karcinomas attēlus in situ kas pēc tam izzūd, kad parazīts tiek izvadīts.

Spermas paraugs

Tas ir ideāls līdzeklis spermas paraugu izpētei, jo tas sniedz vērtīgu informāciju par spermas kvalitāti.

Dati, ko tas piedāvā, galvenokārt ir atkarīgi no skaitļa un morfoloģijas, kā arī ar vienlaicīgi esošajām šūnām, kas var būt būtiskas, piemēram, dzimumšūnām, leikocītiem un epitēlija šūnām..

Ar šo analīzi ir iespējams aprakstīt novirzes, kas novērotas spermas galvā, kaklā, vidējā gabalā un galvenajā gabalā.

Turklāt tie var arī palīdzēt parādīt hemospermijas gadījumus (sarkano asinsķermenīšu klātbūtni spermā) un leukospermiju vai pirospermiju (leikocītu skaita palielināšanās spermā)..

Atsauces

  1. Costamagna S, Prado M. Svaigā testa, May Grünwald-Giemsa un gramatisko krāsu un kultūras mediju apstiprināšana, lai diagnosticētu Trichomonas vaginalis. Parazīts. 2001; 25 (1-2): 60-64. Pieejams: scielo.
  2. Merck KGaA laboratorija. Maijs Grünwald eozīns metilēnzilā mikroskopijai.
  3. "May-Grünwald-Giemsa traipi." Vikipēdija, brīvā enciklopēdija. 2018. gada 15. novembris, 14:37 UTC. 2019. gada 8. janvāra 04:29: en.wikipedia.org
  4. Laboratorijas stikla ķīmiskās vielas. Reaģenti histoloģiskām metodēm, hematoloģijai un mikrobioloģijai. Pieejams: glasschemicals.com
  5. Retamales E, Manzo V. Ieteikums iekrāsot asinis, lai nolasītu asins daudzumu. Valsts un references biomedicīnas laboratorija. Čīles Sabiedrības veselības institūts.
  6. Sarabia L. Spermiogramma saskaņā ar PVO kritērijiem. Attīstības anatomijas un bioloģijas programma. Medicīnas fakultāte Čīles Universitāte Pieejams vietnē: pp.centramerica.com