Kinyoun krāsošanas pamati un paņēmieni



The Kinyoun krāsošana Tas ir krāsošanas paņēmiens, ko izmanto, lai uzklātu baktērijas un skābes parazītus. Tas ir dzimis no Ziehl-Neelsen krāsas maiņas; Abas metodes tiek interpretētas vienādi, bet tās atšķiras divos elementos: galvenā reaģenta sagatavošanā un tā, ka Kinyoun tehnika neizmanto siltumu.

Šī iemesla dēļ tā ir pazīstama arī kā auksti modificēta Ziehl-Neelsen vai Kinyoun aukstā krāsošana. Tas ir paredzēts krāsošanai Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium leprae, netipiskas mikobaktērijas, Nocardias sp, Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium meleagridis, Cryptosporidium felis, Cryptosporidium muris un Cyclosporas cayetanensis.

Ir vērts pieminēt, ka Nocardias ar šo tehniku ​​trāpīgi traipi, jo tie ir daļēji skābi rezistenti alkoholi, tāpēc šajā žanrā ir mainīta metodoloģija..

Savukārt Kinyoun aukstā tehnika tika apvienota ar trīskrāsu metodi, ko Didier modificēja, lai atklātu kokcīdus (Cryptosporidium parvum e Isospora belli) un mikrosporīdu sporas (Enterocytozoon bieneusi un Encephalitozoon intestinalis).

Indekss

  • 1 Fonds
  • 2 Metode
    • 2.1 Materiāli
    • 2.2 Kinyoun fenicated fuchsin sagatavošana
    • 2.3. Alkoholskābes sagatavošana
    • 2.4. Metilēnzilā kontrastkrāsas sagatavošana
    • 2.5 Kinyoun traipu tehnika
    • 2.6. Īpaša kininyona metode Nocardias
    • 2.7. Kombinētais fenola un trihromiskā fuksīna paņēmiens, ko modificēja Didjē
    • 2.8 Kvalitātes kontrole
  • 3 Kinyoun tehnika salīdzinājumā ar Ziehl tehniku ​​-Neelsen
  • 4 Atsauce

Fonds

Galvenais krāsošanas reaģents ir karbola fuksīns vai fuksīns fenicada, kam piemīt saistība ar vaskveida šūnu sieniņā esošajām karbolskābēm, kas bagāta ar mikobaktēriju un dažu parazītu lipīdiem (mikolskābes)..

Šo savienojumu neietekmē skābes krāsas samazināšana; tāpēc mikroorganismi ir definēti kā skābes izturīgs alkohols.

Atšķirībā no Ziehl-Neelsen tehnikas - kas fiksē krāsu cauri siltumam - Kinyoun tehnikā šis solis nav vajadzīgs, jo šai metodei sagatavots fenola fuksīna šķīdums satur lielu fenola koncentrāciju..

Fenols izšķīdina šūnu sienas lipīdu materiālu, kas ļauj ievadīt karbola fuksīna krāsu. Pēc tam, kad krāsa iekļūst, tā paliek nemainīga, neskatoties uz mazgāšanu ar spirtu.

Tādā veidā skābes izturīgi mikroorganismi uzņem raksturīgo sarkano krāsu, bet viss, kas nav skābes izturīgs, kļūst krāsains un krāsots zilā krāsā..

Tehnika

Materiāli

- Modificēts fenola fuksīns.

- Alkoholskābe.

- Metilēnzilā krāsā.

Kinyoun fenicated fuchsin sagatavošana

- Pamata fuksīns: 4 gr.

- Fenols: 8 ml.

- Alkohols (95%): 20 ml.

- Destilēts ūdens: 100 ml.

Pamata fuksīns alkoholī ir jāizšķīdina lēni, nepārtraukti sajaucot. Pēc tam kristalizētais fenols tiek izkausēts ūdens vannā 56 ° C temperatūrā. Pēc izšķīdināšanas pievieno 8 ml iepriekš sagatavotam fuksīna šķīdumam.

Alkoholskābes sagatavošana

- Koncentrēta sālsskābe: 3 ml.

- Etanols (95%): 97 ml.

Tas ir jāmēra, jāapvieno un jāsamaisa.

Metilēnzilā kontrastkrāsas sagatavošana

- Metilēnzils: 0,3 g.

- Destilēts ūdens: 100 ml.

To nosver un izšķīdina.

Kinyoun traipu tehnika

1. Sagatavot uztriepes tieši no parauga, kas var būt krēpas, plaušu šķidrums, urīna nogulsnes, cerebrospinālais šķidrums vai izkārnījumi; vai no mikroorganismu suspensijas, kas iegūta no tīrām kolonijām, kas izveidotas primārās kultūras vidē.

2. Piestipriniet uztriepes ar karstumu.

3. Novietojiet uztriepi uz krāsošanas tilta un pārklājiet ar sagatavoto Kinyoun fenola fuksīna reaģentu. Ļaujiet tai sēdēt 3 vai 5 minūtes.

4 - Mazgāt ar destilētu ūdeni.

5 - Balināt ar skābes spirtu 3 minūtes un mazgāt vēlreiz ar destilētu ūdeni.

6 - Balināt vēlreiz ar skābes spirtu 1 vai 2 minūtes, līdz vairs netiek vilkta krāsviela.

7- Nomazgāt ar destilētu ūdeni un ļaujiet notecēt, novietojot slaidu vertikālā stāvoklī.

8. Pārklājiet preparātu ar metilēnzilu un atstājiet uz 4 minūtēm.

9- Nomazgāt ar destilētu ūdeni un ļaujiet tai nožūt.

10 - Pārbaudiet 40X un tad 100X.

Ja vēlaties uzlabot un paātrināt skābes ātru mikroorganismu iekrāsošanu, pievieno 1 pilienu mitrinoša līdzekļa (piemēram, tergitola Nr. 7) 30 vai 40 ml Kininouna fenola fuksīna..

Dažas laboratorijas maina zilās vai pikīnskābes metilēnzilā kontrastvielu; pirmais dod zaļo krāsu fonam un otrais rada dzeltenu krāsu.

Kinyoun tehnika īpaša Nocardias

Lai uzlabotu Nocardia baktēriju iekrāsošanu, tiek izmantota Kinyoun krāsošanas modifikācija. Šī metode ir šāda:

1. Aptiniet uztriepes ar Kinyoun fenicated fuchsin 3 minūtēm.

2 - Nomazgāt ar destilētu ūdeni.

3 - īsi balināt ar 3% sagatavotu skābes spirtu, līdz vairs netiek iekrāsota krāsviela.

4- Vēlreiz nomazgāt ar destilētu ūdeni.

5- Uzklājiet preparātu ar metilēnzilu un atstājiet 30 sekundes.

6 - Nomazgāt ar destilētu ūdeni un ļaujiet tai nožūt.

Didiera modificētā fenola un trihromiskā fuksīna kombinētā tehnika

Šī metode ir ieteicama izkārnījumu paraugu analīzei, meklējot kokcīdijas un sporas Microsporidium sp vienlaicīgi Veicamā procedūra ir šāda:

1 - Aptiniet uztriepes ar Kinyoun fenola fuksīnu 10 minūtes.

2- Izņemiet krāsu un nomazgājiet ar destilētu ūdeni.

3 - Balinātājs 30 sekundes ar spirta sālsskābi.

4- Vēlreiz nomazgāt ar destilētu ūdeni.

5 - Trīsmetru šķīdumu uzklāt 30 minūtes 37 ° C temperatūrā.

6- Mazgāt ar destilētu ūdeni.

7 - 10 sekundes iztukšot ar spirta etiķskābi.

8- Izmazgājiet uztriepi 30 sekundes, izmantojot 95% etanolu.

Kvalitātes kontrole

Kā pozitīvu kontroli uztriepes tiek gatavotas ar Mycobacterium tuberculosis un krāso ar sagatavotajiem reaģentiem, lai pārliecinātos, ka baktērijas ir pareizā krāsā (sarkanā fuksija).

Negatīvās kontroles var izmantot arī, sagatavojot uztriepes ar jebkuru celmu, kas nav skābes izturīgs alkohols, tādējādi pārliecinoties, ka viss paraugs ņem kontrastu..

Kinyoun tehnika salīdzinājumā ar Ziehl tehniku ​​-Neelsen

Kinyoun tehnika ir vienkāršāka, jo tā novērš apkures soli, bet tās galvenā priekšrocība ir tā, ka tas ilgtermiņā novērš tvaiku emisiju, kas ir ļoti toksiska un izraisa vēzi. Tāpēc Kinyoun krāsošana ir drošāka personāla krāsošanai.

Ir svarīgi ņemt vērā, ka ir jārūpējas par to, lai reaģenti nenonāktu tiešā saskarē ar ādu, jo tie ir kodīgi, un balinātājs ir uzliesmojošs..

Attiecībā uz trūkumiem negatīva uztriepe ne vienmēr norāda, ka mikroorganisms nav klāt. Turklāt šūnu detritusa klātbūtne var izraisīt viltus pozitīvus, kas izraisa neskaidrības diagnozē.

Atsauce

  1. Lietišķā klīniskā ķīmija (2016). BK Kinyoun Kit Pieejams: cromakit.es
  2. Orozco-Rico Miguel. Kinyoun traipi un divi Coccidia HIV. Medicīnas žurnāls MD. 2011; 3 (2): 137
  3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A (2009). Bailey & Scott mikrobioloģiskā diagnoze. 12 ed. Argentīna Panamericana S.A Redaktors.
  4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobioloģiskā diagnoze. (5. izdevums). Argentīna, Redakcijas Panamericana S.A..
  5. Wikipedia dalībnieki. "Kinyoun traipi." Vikipēdija, brīvā enciklopēdija. Wikipedia, The Free Encyclopedia, 2018. gada 8. februāris. 2019. gada 5. janvāris.
  6. Combol A, Fernández N, Figueredo E, Acuña A, Zanetta E. Krāsošanas tehnikas ieviešana vienlaicīgai Coccidia un Microsporidia diagnostikai. Republikas Universitātes Higiēnas institūts. Montevideo. Urugvaja Pieejams: higiene.edu.uy