Tetrathionāta buljona pamats, sagatavošana un izmantošana



The tetrationāta buljonu vai TT buljons ir selektīva šķidra barotne Salmonella celmu bagātināšanai un reģenerācijai. To izveidoja Müeller un vēlāk modificēja Kauffmann, tādēļ ir tie, kas to sauc par Müeller-Kauffmann buljonu.

Sākotnējā vidē bija proteozes peptoni, kalcija karbonāts un nātrija tiosulfāts. Kauffmann pievienoja žults sāļus un radīja vēl vienu modalitāti ar spilgti zaļu. Šīs vielas kavē koliformu augšanu, atstājot brīvu barotni patogēnu baktēriju attīstībai, šajā gadījumā Salmonella..

Modifikācija bija ļoti veiksmīga, jo tā ievērojami palielināja vides jutību. Tāpēc tas pašlaik ir noderīgs, lai meklētu Salmonellas jebkurā parauga veidā, bet īpaši cietiem vai šķidriem izkārnījumiem un pārtikai..

Tās sagatavošana sastāv no divām fāzēm; komerciālā barotne ir pamats tetrationāta buljona pagatavošanai, un pēc tam tetrationāta veidošanai pievieno jodētu joda šķīdumu, lai pabeigtu barotni..

Amerikas Sabiedrības veselības asociācija (APHA) iesaka izmantot tetrionāta buljonu, ko papildina spilgti zaļš, lai bagātinātu Salmonella paraugus, jo tas ir selektīvāks par tetrationāta buljonu un selenīta buljonu..

Kopumā tetrationāta buljons ir ideāls, ja ir aizdomas par Salmonella ģints baktērijām mazos daudzumos vai arī tos izmanto ļaunprātīgi, iedarbojoties ar inhibējošām vielām vai rūpnieciskiem procesiem, kas samazina to dzīvotspēju..

Indekss

  • 1 Fonds
  • 2 Sagatavošana
    • 2.1. Tetrationāts
    • 2.2. Tetrationāta buljons ar spilgti zaļu
  • 3 Lietošana
  • 4 Kvalitātes kontrole
  • 5 ieteikumi
  • 6 Atsauces

Fonds

Pašreizējie peptoni atbilst kazeīna aizkuņģa dziedzera digestiem un dzīvnieku audu peptiskai sagremošanai. Tie nodrošina oglekļa, slāpekļa un barības vielu avotu kopumā baktēriju augšanai.

Savukārt nātrija tiosulfāts reaģē ar jodēto šķīdumu, veidojot tetrationātu. Tas kavē koliformu augšanu un dod priekšroku tādu baktēriju attīstībai, kas satur tetrationa reduktāzes fermentu, tostarp Salmonella ģints, bet arī Proteus..

Žults sāļi darbojas arī kā vairums grampozitīvu baktēriju un dažu gramnegatīvu baktēriju (koliformu) inhibējošā viela..

Kalcija karbonāts absorbē toksiskās vielas, ko rada tetrationāta sadalīšanās, kas veido sērskābi. Šajā ziņā kalcija karbonāts neitralizē skābumu, saglabājot stabila barotnes pH.

Spilgti zaļas modalitātes gadījumā šī viela palielina tetrationāta buljona selektīvo jaudu, inhibējot citus mikroorganismus, kas nav Salmonella ģints..

Sagatavošana

-Tetratingate buljonu

Joda joda šķīdums

Nosveriet:

  • 6 g joda.
  • 5 g kālija jodīda.

Kālija jodīds tiek izšķīdināts aptuveni 5 ml sterila destilētā ūdenī, tad jodu nedaudz pievieno, kamēr maisījums tiek sakarsēts. Pēc tam, kad tas ir pilnībā izšķīdis, to piepilda ar sterilu destilētu ūdeni, līdz tas sasniedz galīgo tilpumu 20 ml.

Pusi bāze tetrationāta buljonam

Nosver 46 gramus dehidrētas vides un suspendē 1 litrā sterilā destilētā ūdenī. Sajauc un sakarsē, līdz pilnībā izšķīst, tā var vārīties tikai dažas minūtes. Ne sterilizējiet autoklāvā. Barotnes pamatnei ļauj atdzist līdz apmēram 45 ° C un tajā laikā pievieno 20 ml jodēta šķīduma..

Pēc šķīduma pievienošanas vidē iodurada jāizlieto nekavējoties. Ja nevēlaties izmantot visu maisījumu, rīkojieties šādi:

10 ml bāzes barotnes izplata caurulēs, un tikai 0,2 ml jodēta šķīduma pievieno paraugiem, kas jāapsver ar paraugiem..

Tie, kas netiks izmantoti, joprojām var tikt uzglabāti ledusskapī, tomēr, tā kā nesējs nav sterilizēts, ideāls ir sagatavot precīzu nepieciešamo daudzumu..

Barotnes krāsa pirms jodētā joda šķīduma pievienošanas ir piena baltā krāsā ar baltu nogulsni, un pēc pievienošanas tas ir brūns ar blīvu nogulsnēm. Novērotā nogulsne ir normāla un atbilst kalcija karbonātam, kas neizšķīst. Vidēja pH ir 8,4 ± 0,2.

-Tetrationāta buljona variants ar spilgti zaļu

Lai pagatavotu tetrationāta buljonu ar spilgti zaļu, tiek veikti visi iepriekš aprakstītie soļi, bet papildus pievieno 10 ml gaiši zaļā šķīduma, kas sagatavots 0,1%..

Spilgti zaļa

Šis risinājums ir sagatavots šādi:

Nosver 0,1 g spilgti zaļas un suspendē 100 ml destilēta ūdens. Karsē līdz vārīšanai, lai sasniegtu pilnīgu izšķīdināšanu. Saglabāt dzintara pudeli.

Izmantot

Attiecībā uz izkārnījumu paraugiem (izkārnījumu kultūra) protokols ir šāds:

Ievietojiet 1 g cieta izkārnījuma vai 1 ml šķidruma izkārnījuma mēģenē ar 10 ml lietošanai gatavas tetrationāta buljona. Enerģiski sakratiet un inkubējiet aerobiozi 43 ° C temperatūrā 6-24 stundas.

Pēc tam ņem 10 līdz 20 μl alikvotu daļu un subkultūru to vidē selektīvai salmonellai, piemēram, SS agaru, XLD agaru, spilgti zaļu agaru, Hektoen enterālo agaru..

Līdztekus selektīvai barībai salmonellai jāpārklāj tiešais paraugs (izkārnījumi) bez bagātināšanas. Taisnās zarnas paraugu paraugiem lejupielādējiet mēģenē savākto materiālu un turpiniet to, kā aprakstīts iepriekš.

Pārtikas paraugiem sver 10 g cietā pārtikas vai 10 ml šķidrā pārtikas un inokulē pudeli ar 100 ml lietošanai gatavas tetrationāta buljona. Rīkoties tādā pašā veidā, kā aprakstīts iepriekš, bet inkubējiet 37 ° C temperatūrā.

Kā redzams, attiecības starp paraugu un buljonu vienmēr būs 1:10.

Kvalitātes kontrole

Lai pārbaudītu barotni, var izmantot zināmus kontroles celmus. Visbiežāk izmanto ATCC sertificētos celmus.

Izmantojamie celmi ir Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella abony DSM 4224, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 un Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Salmonellas celmiem ir sagaidāma lieliska attīstība Escherichia coli var būt vāja vai regulāra attīstība, un Gram-pozitīvie celmi (Enterococcus un Staphylococcus) ir daļēji vai pilnīgi \ t.

Ieteikumi

-Tā kā šī barotne neierobežo Proteus augšanu, dažas laboratorijas izmanto 40 mg / l novobiocīna, lai novērstu šī mikrobu celmu attīstību. Pirms jodētā joda šķīduma pievieno antibiotiku.

-Pēc barotnes, tostarp joda joda šķīduma, pagatavošanas tas nedrīkst pārsniegt 2 stundas pēc inokulācijas.

-Laikā, kad barotne tiek sadalīta caurulēs, maisījums ir nepārtraukti homogenizēts, lai atkārtoti suspendētu izveidotās nogulsnes.

-Mazāk piesārņotos paraugos tetrationāta buljonu inkubē 35-37 ° C temperatūrā un ļoti piesārņotos paraugos ieteicams inkubēt 43 ° C temperatūrā..

Atsauces

  1. Conda Pronadisa laboratorija. 2010. Tetrationāta buljona bāze pēc Müeller-Kauffmann. Pieejams:
  2. BD laboratorijas 2003. Tetrationāta buljona bāze. Pieejams:
  3. Laboratories Britania. 2015. Tetionāta buljona bāze. Pieejams:
  4. Media BBL. 2005. gads. Cauruļu preparāti Salmonella sugu audzēšanai.
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobioloģiskā diagnoze. 12 ed. Redakcijas Panamericana S.A. Argentīna.
  6. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Salīdzinājums starp nātrija selenīta un nātrija tetrationāta barotnēm, gan inkubējot 37 ° C un 42 ° C temperatūrā izolācija Salmonella spp nesēja izkārnījumi. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220