Urīnvielas buljona pamats, sagatavošana un izmantošana

The urīnvielas buljons ir šķidra barotne, ko izmanto, lai pierādītu fermenta urāzes klātbūtni noteiktos mikroorganismos. Ureaze ir mikrobiāls enzīms, kas tiek ražots konstitutīvi, tas ir, tas tiek sintezēts neatkarīgi no tā, vai ir substrāts, uz kura tas darbojas..

Ureāzes funkcija ir saistīta ar organisko savienojumu sadalīšanos. Ne visi mikroorganismi spēj sintezēt šo fermentu, tāpēc tā noteikšana laboratorijā ļauj noteikt noteiktas baktēriju celmus un pat atšķirt tās pašas ģints sugas..

Ir divu veidu urīnvielas tests: Stuart un Christensen. Tie atšķiras pēc to sastāva un jutīguma. Pirmais ir īpašs, lai parādītu lielu urāzes daudzumu, kas saražots ar Proteus ģints sugām.

Otrais ir jutīgāks un var noteikt nelielu ureaze daudzumu, ko radījušas citas baktēriju ģints, piemēram, Klebsiella, Enterobacter, Staphylococcus, Brucella, Bordetella, Bacillus, Micrococcus, Helicobacter un Mycobacterium.

Stuart urīnvielas buljonu veido urīnviela, nātrija hlorīds, dikālija fosfāts, monokālija fosfāts, rauga ekstrakts, fenola sarkans un destilēts ūdens..

Savukārt Christensen buljons vai agara urīnviela sastāv no peptoniem, nātrija hlorīda, monokālija fosfāta, glikozes, urīnvielas, fenola sarkanā, destilēta ūdens un agara agara. Pēdējais tikai tad, ja tas ir cietais materiāls.

Indekss

• 1 Fonds
  • 1.1. Stuart urīnvielas buljons
  • 1.2. Christensen buljons vai agara urīnviela
  • 1.3. Abu mediju interpretācija (Stuart un Christensen)
• 2 Sagatavošana
  • 2.1. Stuart urīnvielas buljons
  • 2.2. Kristensena buljons vai agara urīnviela
• 3 Lietojumi
• 4 Uztura urīnvielas pārbaude
• 5 Kvalitātes kontrole
• 6 Atsauces

Fonds

Enzīms ureaze hidrolizē urīnvielu, veidojot oglekļa dioksīdu, ūdeni un divas amonjaka molekulas. Šie savienojumi reaģē, veidojot galaproduktu, ko sauc par amonija karbonātu.

Stuart urīnvielas buljons

Stuart urīnvielas buljons ir vairāk buferēts ar pH 6,8. Tāpēc mikroorganismam jāspēj veidot lielu amonija daudzumu, lai kļūtu sarkans līdz fenolam. PH jābūt augstākam par 8.

Tāpēc Stuart urīnvielas buljons ir selektīvs pret Proteus sugām, dodot pozitīvus rezultātus 24 līdz 48 stundu laikā pēc inkubācijas, un tas nav efektīvs baktērijām, kas rada nelielu ureaziņu daudzumu vai lēni hidrolizē urīnvielu..

Tas ir tāpēc, ka Proteus sugas var izmantot urīnvielu kā slāpekļa avotu. Turpretim citām urāzi ražojošām baktērijām ir nepieciešams papildu avots.

Tomēr Pérez et al. (2002) noteica, ka Stuart urīnvielas buljons bija tikpat efektīvs kā Christensen urīnvielas agars, lai noteiktu urāzi Candida, Cryptococcus, Rhodotorula, Trichosporon un Saccharomyces ģints rauga celmos..

Pētījuma autori apgalvo, ka ir sasnieguši 100% sakritību ar abiem medijiem (Stuart un Christensen), inkubējot 24 un 48 stundas; paredzot, ka viņi izturēja pozitīvus celmus, kas spēja mediju pārveidot par spēcīgu rozā-fuksija krāsu.

Šis precizējums ir vajadzīgs, jo Lodder (1970) apstiprināja, ka gandrīz visi raugi spēj novietot Christensen urīnvielas agara slīpumu gaiši rozā krāsā. Tas ir tāpēc, ka tie var hidrolizēt urīnvielu minimālā daudzumā un veidot amīnus ar oksidatīvo dekarboksilāciju aminoskābēs uz virsmas. To nevajadzētu interpretēt kā pozitīvu.

Bulens vai urīnvielas agars no Christensen

Christensen urīnvielas buljons vai agars ir mazāk buferēts, jo spēj noteikt nelielu amonija daudzumu. Turklāt šī barotne ir bagātināta ar peptoniem un glikozi. Šie savienojumi izraisa citus urāzi ražojošus mikroorganismus, kas nepaliek Stuart buljonā.

Tāpat arī Christensen urīnvielas tests nodrošina ātrākus rezultātus, jo īpaši attiecībā uz Proteus, kas spēj dot ļoti pozitīvu rezultātu tik maz kā 30 minūšu laikā kā minimālais laiks un līdz 6 stundām kā maksimālais laiks.

Pārējie urāzi ražojošie mikroorganismi pēc 6 stundām spēs nedaudz izmainīt barotnes krāsu un pēc 24, 48, 72 vai vairāk stundām, un pat daži celmi var izraisīt vājas reakcijas pēc 5 vai 6 dienām..

Abu mediju interpretācija (Stuart un Christensen)

Vidēja krāsa ir oranžā krāsā, un pozitīva reakcija padara vidēja krāsas krāsu rozā fuksija. Krāsas intensitāte ir tieši proporcionāla saražotā amonija daudzumam.

Negatīva reakcija atstās sākotnējās krāsas vidi, izņemot raugus, kas var dot gaiši rozā ar Christensen urīnvielas agaru..

Sagatavošana

Stuart urīnvielas buljons

Nosveriet nepieciešamos gramus atbilstoši tirdzniecības nama norādēm. Izšķīdina vēlamā sterilā destilētā ūdenī. Neizmantojiet siltumu, lai izšķīdinātu, jo urīnviela ir jutīga pret karstumu.

Lai sterilizētu membrānas filtrēšanas metodi. Šim nolūkam tiek izmantots Millipore filtrs, kura diametrs ir 0,45 μ. Nelietojiet autoklāvu. Kad šķīdums ir filtrēts, tas tiek sadalīts sterilās caurulēs. Lai iegūtu ticamus rezultātus, tas jāpārvieto no 1,5 ml līdz minimālajam daudzumam līdz 3 ml kā maksimālais daudzums caurulē..

Pirms lietošanas uzglabāt ledusskapī un atdzesējiet.

Ja filtrēšanas metode nav pieejama, vidē ir jāizmanto nekavējoties, lai iegūtu ticamus rezultātus.

Vēl viens veids, kā sagatavot urīnvielas Stuart buljonu, ir šāds:

Dažas komerciālas mājas pārdod pusi bāzes urīnvielas testam, neiekļaujot urīnvielu.

Nosver komercmājas norādītās summas. To izšķīdina destilētā ūdenī un sterilizē autoklāvā 121 ° C temperatūrā 15 minūtes. Ļaujiet tai nedaudz palikt un tad, kad barotne ir silta, pievienojiet 100 ml urīnvielas šķīduma, kas sagatavots 20% un sterilizēts filtrējot..

To sadala sterilās caurulēs, kā aprakstīts iepriekš.

Bulens vai urīnvielas agars no Christensen

-Karbamīda šķīduma sagatavošana

Nosver 29 gramus dehidrētas urīnvielas un izšķīdina 100 ml destilēta ūdens. Lai sterilizētu, izmantojiet filtrēšanas metodi. Nelietojiet autoklāvu.

-Urīnvielas bāzes agars

24 g dehidrētā bāzes agara izšķīdina 950 ml destilēta ūdens. Sterilizē autoklāvā 121 ° C temperatūrā 15 minūtes. Ļauj nostāvēties līdz 50 ° C temperatūrai un pievieno iepriekš sagatavoto urīnvielu aseptiski.

Ielejiet 4 līdz 5 ml sterilās caurulēs un nolieciet, līdz tas ir sacietējis. Ir jābūt garam flautas pīķim.

Šo barotni var arī pagatavot šķidrā veidā.

Lietojumi

Urīnvielas tests ir ļoti efektīvs, lai atšķirtu Proteus ģints no citām Enterobacteriaceae ģints ģintīm, ņemot vērā Proteus ātru reakciju..

Ja izmanto Christensen sastāvu, tests palīdz atšķirt tās pašas ģints sugas. Piemēram,, S. haemolyticus un S. warneri sieslēgts Staphylococcus koagulāzes negatīvs un betahemolītiskais, bet tie atšķiras S. haemolyticus tas ir negatīvs urīnviela un S. warneri tas ir pozitīvs urīnviela.

No otras puses, McNulty veiksmīgi izmantoja 2% Christensen urīnvielas buljonu, lai izpētītu klātbūtni Helicobacter pylori biopsiju paraugos, kas ņemti no kuņģa gļotādas (antrālais reģions).

Klātbūtne H. pylori to apliecina pozitīvs urīnvielas tests. Rezultātu novērošanas ilgums ir tieši proporcionāls klātbūtnes mikroorganismu daudzumam.

Kā redzams, tā ir vienkārša metode diagnosticēšanai Helicobacter pylori kuņģa biopsijās.

Visbeidzot, šis tests ir noderīgs arī sugu Brucella, Bordetella, Bacillus, Micrococcus un Mycobacteria diferencēšanai..

Uzsūc urīnvielas testu

Lai optimizētu rezultātus, abām metodēm ir nepieciešams spēcīgs mikrobu inokulāts. Baktēriju kolonijas ieteicams ņemt no asins agara un Sabouraud agara raugiem, ar dažiem izņēmumiem. Inokulāts tiek emulģēts šķidrā vidē.

Stuart urīnvielas buljonam inkubē 37 ° C temperatūrā 24 līdz 48 stundas, zinot, ka meklē tikai Proteus ģints celmus, kad celms ir baktērija. Raugiem to var inkubēt 37 ° C temperatūrā vai istabas temperatūrā 24 līdz 48 stundu inkubācijas laikā.

Christensen urīnvielas buljona gadījumā inkubē 37 ° C temperatūrā 24 stundas. Ja tests ir negatīvs, to var inkubēt līdz 6 dienām. Ja tests ir pozitīvs pirms 6 stundām, tas norāda, ka tas ir Proteus ģints celms.

Christensen urīnvielas agara gadījumā agara slīpums ir spēcīgi inokulēts, bez caurduršanas. Buljons tiek inkubēts un interpretēts tādā pašā veidā.

Kvalitātes kontrole

Kontroles celmus var izmantot, lai pārbaudītu barotni, piemēram, Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae  ATCC 7006003, Escherichia coli ATCC 25922 un Salmonella typhimurium.  Pirmajiem diviem jāsniedz pozitīvi rezultāti un pēdējie divi negatīvi rezultāti.

Atsauces

1. Pérez C, Goitía K., Mata S, Hartung C, Colella M, Reyes H. et al. Stuart urīnvielas buljona izmantošana ureazes testam kā tests raugu diagnostikā. Soc. Ven. Mikrobiol. 2002; 22 (2): 136-140. Pieejams: Scielo.org.
2. Mac Faddin J. (2003). Biochemiskie testi klīniski nozīmīgu baktēriju identificēšanai. 3. ed. Redakcijas Panamericana. Buenosairesa Argentīna.
3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobioloģiskā diagnoze. 12 ed. Redakcijas Panamericana S.A. Argentīna.
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobioloģiskā diagnoze. 5. izdevums Redakcijas Panamericana S.A. Argentīna.
5. Laboratories Britania. Christensen Medio (Urīnvielas agara bāze) 2015. Pieejams: britanialab.com