Sojas buljona tripticaseína pamats, sagatavošana un izmantošana

The sojas buljona tripticaseína Tā ir šķidra barotne, kas ir ļoti barojoša un neselektīva. Pateicoties lielajai daudzpusībai, tā ir viena no visplašāk izmantotajām šķidrās kultūras barotnēm mikrobioloģijas laboratorijā.

Tas ir pazīstams arī kā buljona tripticasa sojas vai šķelta kazeīna sojas, kuru saīsinājums ir TSB akronīmam angļu valodā Tryptic es esmu Broth vai CST par akronīmu spāņu valodā. Tās lietojums ir ļoti atšķirīgs, ņemot vērā tā sastāvu. To veido tripteīns, sojas peptons, nātrija hlorīds, dikālija fosfāts un glikoze.

Tā spēj reproducēt klīniski nozīmīgas patogēnas baktērijas, tostarp tās, kas ir uzturvērtīgi un anaerobās baktērijas. Šajā vidē var attīstīties arī dažas oportūnistiskās sēnītes un piesārņotāji.

Pateicoties augstajai barības iedarbībai, tas ir ļoti jutīgs, lai noteiktu mikrobioloģisko piesārņojumu, tāpēc to izvēlējās USDA Dzīvnieku un augu veselības inspekcija vakcīnu mikrobioloģiskai analīzei..

Tāpat arī tripticase sojas zupa atbilst dažādām farmakopejām (Eiropas EP, Japānas JP un Ziemeļamerikas USP), lai veiktu produktu mikrobioloģisko izpēti rūpnieciskā līmenī, piemēram, kosmētikā un pārtikā..

No otras puses, ir vērts pieminēt, ka, neskatoties uz lielo lietderību, šis medijs ir salīdzinoši lēts, tāpēc tas ir pieņemams vairumam mikrobioloģijas laboratoriju. Tas ir arī ļoti viegli sagatavoties.

Indekss

• 1 Fonds
• 2 Sagatavošana
  • 2.1. Trypticamine sojas pupas
  • 2.2. Tripticasein sojas buljona iedzīvotāji
• 3 Lietošana
• 4 Sēž
• 5 Kvalitātes kontrole
• 6 Ierobežojumi
• 7 Atsauces

Fonds

Tripteína, peptons un glikoze nodrošina viņam būtiskas barojošas īpašības, lai to pārveidotu par ideālu vidi ātrai mikrobu attīstībai..

Apmēram 6 līdz 8 stundu inkubācijas laiks jau ir redzams vairumā mikroorganismu. Tomēr ir lēni augoši celmi, kas var ilgt dienas, lai augtu.

Nātrija hlorīds un dikālija fosfāts darbojas attiecīgi kā osmotiskais līdzsvars un pH regulators. Augšanas esamību apliecina duļķainuma parādīšanās vidē; ja nav augšanas, barotne paliek caurspīdīga.

Ņemot vērā to gaišo krāsu, ir iespējams novērot pigmentu veidošanos, piemēram, tādu, kas parādīts attēlā, kas atrodas izstrādājuma sākumā, kas atbilst pigmentam, ko rada Pseudomonas aeruginosa. 

Sagatavošana

-Tryptisks sojas buljons

Lai sagatavotu tripticase sojas buljonu, nosver 30 gramus dehidrētas komerciālas vides digitālā mērogā. Tad tas izšķīst litrā destilēta ūdens, kas atrodas fiolā.

Maisījumam ļauj nostāvēties 5 minūtes un pēc tam nonāk siltuma avotā, lai palīdzētu izšķīdināt barotni. Vārīšanas laikā 1 minūšu laikā tas ir jākrata.

Pēc izšķīdināšanas tas pēc vajadzības tiek sadalīts atbilstoša izmēra mēģenēs. Var izmantot caurules ar kokvilnas spraudni vai bakelīta vāciņiem. Pēc tam caurules sterilizē ar barotni autoklāvā 121 ° C temperatūrā 15 minūtes.

Barotnes pH jābūt 7,3 ± 0,2

Jāņem vērā, ka dehidrētās barotnes krāsa ir gaiši bēša, un tā jāuzglabā sausā vietā 10 līdz 35 ° C temperatūrā. Sagatavotais buljons ir gaiši dzintars, un tas jāuzglabā ledusskapī (2 līdz 8 ° C)..

-Tripticasein sojas buljona variācijas

Trypticamīnu modificētu sojas buljonu var pagatavot, pievienojot žults sāļus un novobiocīnu, lai padarītu to selektīvu izolācijai. E. coli. Vēl viena iespēja tam pašam nolūkam ir sagatavot tripticase sojas buljonu, ko papildina vankomicīns, cefiksīms un tellurs (2,5 μg / ml)..

No otras puses, vairāki glikozes daudzumi (0,25%) var tikt pievienoti trypticasein sojas buljonam, ja mērķis ir stimulēt bioplēves veidošanos..

Izmantot

Tas ir pietiekami barojošs, lai ļautu augt prasīgas vai kaitinošas baktērijas, piemēram, Streptococcus pneumoniae, Streptococcus sp un Brucella sp, nav nepieciešams papildināt ar asinīm vai serumu.

Tāpat šajā sēnītē var attīstīties dažas sēnes, piemēram, Candida albicans komplekss, Aspergillus sp e Histoplasma capsulatum.

Turklāt šī barotne anaerobos apstākļos ir ideāla, lai atgūtu Clostridium ģints piederīgās baktērijas, kā arī klīniski nozīmīgas anaerobās neororētās baktērijas..

Ja pievieno 6,5% nātrija hlorīda, var izmantot Enterococcus un citu D grupas Streptococcus augšanu.

Pētniecības līmenī tas ir bijis ļoti noderīgs dažādos protokolos, īpaši pētot baktērijas, kas veido biofilmas vai biofilmas. To izmanto arī, lai sagatavotu baktēriju suspensiju 0,5% Mac Farland, kas nepieciešams, lai veiktu antibiotiku, izmantojot Kirby un Bauer metodi..

Šajā gadījumā tiek ņemtas 3 līdz 5 kolonijas ar līdzīgu izskatu un emulģētas 4-5 ml trypticasein sojas buljonā. Pēc tam to inkubē 2 līdz 6 stundas 35-37 ° C temperatūrā un pēc tam noregulē līdz vēlamajai koncentrācijai, izmantojot sterilu fizioloģisko šķīdumu. Tryptikāzes sojas buljonus nedrīkst lietot 18 līdz 24 stundu inkubācijas laikā.

Sēta

Paraugu var sēt tieši vai subkulturētām tīrām kolonijām, kas ņemtas no selektīviem barotnēm. Inokulātam jābūt mazam, lai pirms inkubācijas netiktu mākoņi.

Parasti inkubē 37 ° C temperatūrā aerobiozi 24 stundas, bet šie apstākļi var atšķirties atkarībā no meklējamā mikroorganisma. Ja nepieciešams, to var inkubēt arī anaerobos apstākļos 37 ° C temperatūrā. Piemēram, prasīgiem vai lēni augošiem mikroorganismiem var inkubēt līdz 7 dienām.

Farmaceitisko vielu mikrobioloģiskajā analīzē, piemēram, vakcīnās, protokoli ir stingrāki. Šādos gadījumos buljons bez augšanas netiek izmests, kamēr tas nesasniedz 14 dienas nepārtrauktas inkubācijas.

Kvalitātes kontrole

Katrai sagatavotajai partijai 1 vai 2 mēģenes inkubē bez inokulācijas, lai parādītu sterilitāti. Tam ir jāpaliek nemainīgam.

Jūs varat arī stādīt zināmus celmus, lai novērtētu viņu uzvedību. Starp celmiem, kurus var izmantot, ir:

Aspergillus brasiliensis ATCC 1604, Candida albicans ATCC 10231, Bacillus subtilis ATCC 6633, Staphylococcus aureus ATCC 6538 vai 25923, Escherichia coli ATCC 8739,  Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

Visos gadījumos augšanai jābūt apmierinošai atmosfēras un temperatūras apstākļos, kas piemēroti katram mikroorganismam.

Ierobežojumi

-Glikozes fermentācija izraisa barotnes pH samazināšanos, veidojot skābes. Tas var būt nelabvēlīgs dažu mikroorganismu izdzīvošanai, kas ir jutīgi pret skābumu.

-Tas nav ieteicams celmu uzturēšanai, jo papildus skābumam baktērijas pēc dažām dienām noārdīs barības vielas ar sekojošu toksisku vielu uzkrāšanos, kas padara vidi nevēlamu.

-Jārūpējas par visiem sterilitātes protokoliem, jo ​​buljoni ir viegli piesārņojami.

-Pēc tripticasein sagatavošanas sojas buljoni nemēģina pārvietot buljonu uz citu sterilu cauruli, jo šāda veida manevri ir ļoti jutīgi pret piesārņojumu.

Atsauces

1. Cona E. Nosacījumi labas jutības pētījumam ar agara difūzijas testu. Rev. infektols 2002; 19 (2): 77-81. Pieejams: scielo.org
2. Britu laboratorija Tryteīna sojas buljons. 2015. Pieejams: britanialab.com
3. MCD laboratorija. Trytica sojas buljons. Pieejams: electronic-systems.com
4. Neogēnu laboratorija. Sojas buljona triptihs. Pieejams: foodsafety.neogen.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobioloģiskā diagnoze. 12 ed. Redakcijas Panamericana S.A. Argentīna.
6. Rojas T, Vásquez Y, Reyes D, Martínez C, Medina L. Novērtējums par magnētiskās imunitātes atdalīšanas metodi Escherichia coli O157: H7 piena krēmos. ALAN. 2006. gads; 56 (3): 257-264. Pieejams: scielo.org.ve
7. Gil M, Merchán K, Quevedo G, Sánchez A, Nicita G, Rojas T, Sánchez J, Finol M. Biofilm veidošanās izolētos Staphylococcus aureus saskaņā ar pretmikrobu jutību un klīnisko izcelsmi. Vitae 2015. gads; 62 (1): 1-8. Pieejams: saber.ucv.ve
8. Narváez-Bravo C, Carruyo-Núñez G, Moreno M, Rodas-González A, Hoet A, Wittum T. Escherichia coli O157: H7 dubultā mērķa liellopu liellopu paraugos no Mirandas novada, Zulijas štata, Venecuēla. Cient. (Marakaibo), 2007. gads; 17 (3): 239-245. Pieejams: scielo.org