Selenīta buljona pamats, sagatavošana un izmantošana



The selenīta buljonu Tā ir selektīva šķidra barotne. To izstrādāja Leifson, lai bagātinātu paraugus, ja ir aizdomas par Salmonella ģints enteropatogēnu baktēriju klātbūtni..

Šis medijs atbilst Amerikas Sabiedrības veselības asociācijas (APHA) prasībām un tāpēc ir pieņemts, lai izpētītu Salmonella klātbūtni izkārnījumos, urīnā, šķidrā vai cietā pārtikā, ūdenī..

Ķīmiskais sastāvs, kas tam piemīt, dod priekšroku šo mikroorganismu atveseļošanai un savukārt kavē citu augšanu. Tas galvenokārt ir toksisks vairumam baktēriju, kas pieder pie Enterobacteriaceae ģimenes. Tomēr tas arī ļauj atgūt Shigella celmus un neietekmē Pseudomonas un Proteus augšanu..

Tas sastāv no bezūdens nātrija hidrogēn selenīta, bezūdens nātrija fosfāta, peptoniem un laktozes. Ir arī variants, kuram pievieno cistīnu, tāpēc tā nosaukums ir selenīts-cistīns buljons.

Pašlaik ir vēlams izmantot selenīta-cistīna buljonu, jo tiek iegūts augstāks salmonellas reģenerācijas procentuālais daudzums, kas ir līdzvērtīgs tam, kas novērots ar citiem selektīviem medijiem ar tādu pašu mērķi, piemēram, nātrija buljonu Tetrathionate..

Indekss

  • 1 Fonds
  • 2 Sagatavošana
    • 2.1 - Selena
    • 2.2. Tirdzniecības vides sagatavošana
    • 2.3. Selenīta-cistīna buljona variants
  • 3 Lietojumi
  • 4 Sēž
  • 5 Kvalitātes kontrole
  • 6 Ierobežojumi
  • 7 Atsauces

Fonds

Sālījumā esošie peptoni kalpo kā barības vielas mikroorganismu pareizai attīstībai. Salmonellas celmi izmanto peptonus kā slāpekļa, vitamīnu un aminoskābju avotu.

Laktoze ir fermentējams ogļhidrāts, bet nātrija selenīts ir inhibējošā viela, kas palēnina Gram pozitīvo baktēriju un lielāko baktēriju augšanu zarnu florā, īpaši Enterobacteriaceae ģimenē. Nātrija fosfāts ir buferis, kas stabilizē barotnes pH.

Selenīta buljona varianta, kas satur L-cistīnu, gadījumā šis papildu savienojums ir reducējošs līdzeklis, kas samazina selenīta toksicitāti, palielinot salmonellas reģenerāciju..

Sagatavošana

-Selenīta buljons

Ja jums ir maisījuma sastāvdaļas, varat nosvērt:

4 g bezūdens nātrija hidrogēn selenīta.

10 g bezūdens nātrija fosfāta.

5 g peptonu.

4 g laktozes.

Izšķīdiniet savienojumus 1 litrā sterila destilēta ūdens. To var nedaudz uzsildīt, lai pilnībā izšķīdinātu.

Dažas laboratorijas barotni 10 minūtes pakļauj brīvai tvaikai, lai to sterilizētu, jo autoklāvu nevajadzētu lietot. Ja barotne ir sterilizēta, to var uzglabāt ledusskapī, līdz to izmanto.

To var arī pagatavot bez sterilizēšanas un tieši 10 līdz 15 ml uz sterilām mēģenēm.

Tādā gadījumā tas ir jāatstāj atpūtai un jāizmanto nekavējoties. Tā kā vide nav sterila, to nevar uzglabāt ledusskapī vēlākai lietošanai.

-Tirdzniecības vides sagatavošana

Ja ir pieejams komerciāls barotne, 23 g dehidrētas barotnes nosver un izšķīdina vienu litru sterila destilēta ūdens. Īsi uzsildiet, lai pabeigtu šķīdināšanu. Ne sterilizējiet autoklāvā. Sniedziet aseptiski 10 vai 15 ml sterilās mēģenēs.

Vidējā pH jābūt 7,0 ± 0,2.

Jāatzīmē, ka dehidrētās vides krāsa ir bēša un preparāts ir dzidrs un caurspīdīgs dzintars.

Selenīta-cistīna buljona variants

Tas satur tādus pašus selenīta buljona savienojumus, bet pievieno 10 mg cistīna. Pārējā procedūra ir tieši tā pati, kā aprakstīts iepriekš.

Lietojumi

Šis barotnes ir īpašs, lai to izmantotu epidemioloģiskos pētījumos gadījumos, kad slimība nav akūta stadija, asimptomātiski pacienti vai veseli nesēji..

Salmonellas ģints izolācija parasti ir sarežģīta, jo parasti tiek konstatēts, ka tie piesārņo paraugus ierobežotā veidā. Nelielos daudzumos to var viegli pārklāties ar citu baktēriju ģints augšanu, kas atrodamas lielākos daudzumos.

No otras puses, izejvielas, ar kurām pārstrādā pārtiku, bieži ir pakļautas siltumam, dehidratācijas procesiem, dezinfekcijas līdzekļu, starojuma un konservantu izmantošanai..

Līdz ar to izejmateriālā esošās salmonellas tiek nepareizi izturētas, iesniedzot produktu iepriekšminētajiem rūpnieciskajiem procesiem. Tāpat klīnisko paraugu, piemēram, izkārnījumu gadījumā, celmi var būt vāji, ja tie nāk no pacientiem, kas ārstēti ar antibiotikām..

Tāpēc jebkuram paraugam, kurā ir aizdomas par Salmonella klātbūtni, jābūt iepriekš bagātinātam ar laktozes buljonu un pēc tam bagātināts ar selenīta buljonu, lai optimizētu tā atgūšanu selektīvos barotnēs, piemēram, SS agarā, ksilozes agarā, lizīna dezoksikolātā (XLD). ), cita starpā, enterālais Hektoen agars (HE) un zaļš spilgts agars.

Sēta

Izmēru paraugiem ņem 1 g parauga un suspendē mēģenē ar 10 līdz 15 ml selenīta buljona. Ja izkārnījumi ir šķidrumi, ņem 1 ml un suspendē buljonā. Attiecībā uz taisnās zarnas tamponiem iztīriet tamponu materiālu buljonā.

Cietu pārtikas produktu paraugos ņem 1 gr un suspendē selenīta buljonā.

Šķidrā pārtikā sajauciet vienādās daļās ar selenīta buljonu ar dubultu koncentrāciju.

Urīna paraugiem centrifugē, supernatantu izmet, izņem visus sedimentus un suspendē to selenīta buljonā..

Buljonus inkubē 37 ° C temperatūrā 24 stundas inkubācijas laikā. Baktēriju augšanu apliecina duļķainība. Papildus inkubācijai 42 ° C temperatūrā var iekļaut arī papildu mēģeni uz paraugu. Pēc tam izvelciet selektīvos cietos materiālus no selenīta buljona.

Kvalitātes kontrole

Lai kontrolētu sterilitāti, selenīta buljonu no katras partijas bez inokulācijas inkubē 37 ° C temperatūrā 24 stundas. Paredzams, ka netiks radīta duļķainība vai mainās barotnes krāsa.

Lai kontrolētu barotnes labu darbību, var izmantot zināmus celmus, piemēram:

Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028,  Salmonella choleraesuis ATCC 12011, Escherichia coli ATCC 25922 un Proteus mirabilis ATCC 43071.

Gaidāmie rezultāti ir:

  • Pirmajiem trim baktēriju celmiem augumam jābūt apmierinošam.
  • Uz Escherichia coli daļēja inhibīcija.
  • Par Proteus mērenu augšanu.

Ierobežojumi

Vidēja selenīta buljona ir toksiska cilvēka ādai, tāpēc jāizvairās no tieša kontakta.

Atsauces

  1. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Salīdzinājums starp nātrija selenīta un nātrija tetrationāta barotnēm, gan inkubējot 37 ° C un 42 ° C temperatūrā izolācija Salmonella pārvadātāju izkārnījumi izkārnījumos. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220
  2. Laboratories Britania. Selenito Caldo. 2015. Pieejams: britanialab.com
  3. Neogen Laboratories Selenito buljons Pieejams: foodsafety.neogen.com
  4. González-Pedraza J, Pereira-Sanandres N, Soto -Valela Z, Hernándeza-Airirre E, Villarreal- Camacho J. Salmonella spp. un molekulārie instrumenti tās atklāšanai. Veselība, Barankilja 2014; 30 (1): 73-94. Pieejams: http://www.scielo.org.
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobioloģiskā diagnoze. 12 ed. Redakcijas Panamericana S.A. Argentīna.