Sastāvs laktosado buljonam, sagatavošana un izmantošana



The laktozes buljonu ir šķidra, neselektīva barotne, ko galvenokārt izmanto kā bagātināšanas barotni Salmonella celmu izolēšanai no mikrobioloģiskās analīzes, kas veikta ar apstrādātiem pārtikas produktiem, piena produktiem vai ūdeni. To iesaka Starptautiskā pārtikas produktu mikrobioloģisko specifikāciju komisija (ICMPF)..

Vidēja viela satur fermentu želatīnu, gaļas ekstraktu un laktozi, baktēriju augšanai nepieciešamās vielas. Turklāt laktoze ir fermentējams ogļhidrāts, tāpēc dažas koliformas spēj sadalīt to ar gāzes ražošanu.

Šī iemesla dēļ Amerikas Sabiedrības veselības asociācija (APHA) iesaka laktozes buljonu, lai veiktu vispārēju un fekāliju koliformu baktēriju iespējamu izpēti, kvalificējot to kā lielisku alternatīvu laurilsulfāta triptozes buljona aizstāšanai ar visticamāko numuru (NMP) standarta tehniku. ), ko izmanto pārtikas, piena un virszemes ūdeņu, pazemes, atpūtas, sadzīves un rūpniecisko atkritumu paraugu mikrobioloģiskai analīzei.

Indekss

  • 1 Fonds
  • 2 Sagatavošana
  • 3 Lietojumi
    • 3.1. Iepriekšēja bagātināšana
    • 3.2. Kopējo un fekālo koliformu analīze
  • 4 Vidēja kvalitātes kontrole
  • 5 Atsauces

Fonds

Dažu paraugu mikrobioloģiskajai analīzei būtiska ir iepriekšējas bagātināšanas pakāpe, lai varētu atgūt konkrētu mikroorganismu, kas var būt ļoti mazā daudzumā vai nelabvēlīgos apstākļos, kas pārkāpj vai samazina tā dzīvotspēju.

Tas attiecas uz sausiem un pārstrādātiem pārtikas produktiem, kas, iespējams, ir piesārņoti Salmonellas sp. Šādos gadījumos, ja baktērijas ir klāt, tās ražošanas procesa laikā tās ir cietušas fiziski un ķīmiski..

Tādā veidā, lai mikroorganismi tiktu pakļauti tādiem nelabvēlīgiem faktoriem kā dehidratācija, iedarbība uz inhibējošiem vai toksiskiem produktiem, kā arī citu baktēriju klātbūtnei, kas cita starpā pārklājas..

Šajā ziņā laktozes buljonam ir labojoša iedarbība uz bojātajām mikroorganisma struktūrām, izraisot tā atgūšanos un vairošanos tādā veidā, ka to var atklāt..

Tāpat laktozes buljonam ir iespēja atšķaidīt inhibējošās vielas, kas var ietekmēt tā dzīvotspēju, ļaujot tās attīstīties. Turklāt laktozes buljona uztura sastāvs ir stratēģisks, lai sekmētu augsnes augšanu Salmonella sp virs citiem mikroorganismiem.

Lai iegūtu galīgo identifikāciju, tas jāapstrādā citos galīgo kultūru veidos.

No otras puses, arī barotnes sastāvs ļauj atklāt laktozi fermentējošus mikroorganismus, kas ražo gāzi.

Sagatavošana

Lai pagatavotu vienu litru laktozes buljona, nosver 13 gramus dehidratēta barotnes un izšķīdina 1000 ml destilēta ūdens..

Lai palīdzētu izšķīdināt vidē ūdeni, šķīdumu var uzsildīt nedaudz, bet ne pārāk daudz..

Pēc viendabīga šķīduma pagatavo šādi: ja buljonu izmanto koliformu meklēšanai, sagatavo plauktu ar testa mēģenēm un Durham fermentācijas cauruli ievieto otrādi.

Durham caurule ir ļoti svarīga detaļa, jo tā ļaus atklāt gāzes veidošanos, vērtīgus datus koliformu meklējumos..

Kad caurules ir gatavas, tajā ievieto 10 ml laktozes buljona, kas ir pietiekami, lai aptvertu visu Durham cauruli..

Ja laktozes buljonu izmantos kā bagātināšanas buljonu, nav nepieciešams ievietot Durham fermentācijas cauruli. Šajā gadījumā ir nepieciešams lielāks daudzums barotnes (225 ml), kas tiks pasniegts 500 ml pudelēs, plaša mutē un ar termiski izturīgu skrūvējamu vāciņu..

Pēc tam caurules vai kolbas uz autoklāvu ievada 121 ° C temperatūrā 15 minūtes.

Barotnei jāpaliek pie galīgā pH 6,9 ± 0,2 pie 25 ° C.

Vīni tiek uzglabāti ledusskapī, līdz tie tiek izmantoti.

Pirms lietošanas buljoni ir jāturpina istabas temperatūrā.

No otras puses, laktozes buljonu var pagatavot arī divkāršā koncentrācijā.

Dažas laboratorijas pievieno bromkresolu purpursarkanai uz laktozes buljona kā pH indikatoru, lai parādītu caurules, kurās pēc krāsas maiņas ir bijusi laktozes fermentācija. Šajā gadījumā buljona krāsa ir violeta un, ja fermentācija kļūst dzeltena.

Lietojumi

Mikrobioloģijas laboratorijās laktozes buljonu plaši izmanto kā salīdzinoši lētu vidi, kas nodrošina uzticamus un ātrus rezultātus (24-48 stundas).

To var izmantot, lai analizētu kopējo un fekāliju koliformu veidošanos ūdenī un pārtikā vai kā salmonellas pirmsskābju buljonu..

Iepriekšēja bagātināšana

Iepriekšēja bagātināšana ir solis pirms parauga bagātināšanas, kas ievērojami uzlabo Salmonella ģints baktēriju atgūšanu pārstrādātos pārtikas produktos..

Lai to izdarītu, cietā barības paraugs (25 grami) vai šķidrums (25 ml) tiek ievietots 225 ml laktozes buljona un inkubēts 24 līdz 48 stundas. Pēc tam selenīta cistīna buljonu vai tetrationāta buljonu subkulturē bagātinātā vidē. Tad tas pāriet uz selektīvo mediju XLD un SS.

Kopējo un fekālo koliformu analīze

Tas ir lielisks līdzeklis kā fekāliju piesārņojuma indikators.

Tāpēc laktozes buljons ir ideāli piemērots koliformas pētījuma paredzamajai fāzei, izmantojot visizteiktāko skaitļu metodi.

Paraugiem, kuros ir aizdomas par lielu koliformu daudzumu, tiks ievietots mazāks daudzums koliformu (1 ml), bet paraugiem, kuros ir aizdomas par mazāku koliformu daudzumu, inokulē vairāk paraugu (10 ml)..

Analīzei tiek veikti 10 atšķaidījumi-1, 10-2, 10-3, veidojot 3-5 caurules bateriju katrai izmantotajai koncentrācijai.

No katras atšķaidīšanas tas pats tilpums tiek uzklāts uz laktozes buljoniem.

Caurules inkubē 24 stundas. Negatīvie buljoni tiek inkubēti vēl 24 stundas.

Rezultātu interpretācija tiek veikta, ievērojot divas īpašības: pirmā ir duļķainuma klātbūtne vai neesamība, un, tā kā šajā vidē nav pH indikatora, krāsa netiks mainīta..

Otrais ir gāzes ražošana vai ne. Gāze ir viegli demonstrējama Durham caurulē, parādot vienu vai vairākus gaisa burbuļus.

Tiek uzskatīts par pozitīvu, ja tiek novērotas abas īpašības, tas ir, duļķainība ar gāzes ražošanu. Pozitīvas caurules jāpārklāj apstiprinošā vidē (Brothiant Green 2% Bile un EC buljona).

Mediju kvalitātes kontrole

- Sagatavojot barotni, ir svarīgi neaizmirstiet, lai Durhams caurules tiktu ievietotas, ja tās mērķis ir koliformu izpēte..

- Pirms sterilizēšanas neuzkarsējiet barotni.

- Pirms sterilizēšanas izplata testa mēģenēs, nekad pēc tam.

- Nelietot, ja barotnei ir vairāk nekā 3 mēnešu preparāts.

- Nelietojiet, ja pamanāt kādas izmaiņas parastajā barotnes īpašībā.

- Sagatavojot laktozes buljona partiju, pārbaudiet to kvalitāti, stādot celmus, kas pazīstami kā Escherichia coli, Enterobacter aerogenes , Citrobacter freundii un Klebsiella pneumoniae. Tie aug ļoti labi, ar gāzes ražošanu (pozitīva kontrole).

- Tas var ietvert arī Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium o Enterococcus faecalis, labi aug, bet bez gāzes ražošanas (negatīva kontrole).

- Jāatzīmē, ka dehidrētās vides sākotnējā krāsa ir smilškrāsas un ļoti vidēji sagatavota dzidra un caurspīdīga dzeltena. Ja ir mainījusies krāsa vai izskats, tas var pasliktināties.

Atsauces

  1. Acevedo R, Severiche C, Castillo M. Bioloģija un vides mikrobioloģija. (2013) 1. izdevums. Kartahenas Universitāte, Kolumbija.
  2. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B un Velázquez O. (2009). Pārtikas mikrobioloģiskās analīzes metodes. 2nd ed. Ķīmijas fakultāte, UNAM. Meksika.
  3. Laboratorijas Conda Pronadisa. 2017. Laktozes buljona dubultā koncentrācija (European Pharm.)
  4. Fernández-Rendón C, Barrera-Escorcia G. Coliformas baktēriju ekstrakcijas metožu salīdzinājums no Xochimilco, Meksikas ezera nogulsnēm. Rev. mikrobiols.  2013. gads; 45 (3): 180-184. Pieejams: scielo.org.
  5. Sotomayor F, Villagra V, Cristaldo G, Silva L, Ibáñez L. Centrālās, Cordillera un galvaspilsētas pašvaldības departamentu artēzisko aku ūdeņu mikrobioloģiskās kvalitātes noteikšana. Mem. Inst. Cienc. Veselība 2013. gads; 11 (1): 5-14. Pieejams no: scielo.iics.