EK buljona pamats, sagatavošana un izmantošana

The EK buljons vai buljonu Escherichia coli Tā ir selektīva šķidra barotne. Šo barotni iesaka standartmetodes kopējo un fēcisko koliformu skaitīšanai, izmantojot visticamākā skaita (NMP) metodi ūdens un pārtikas paraugos, kur galvenais iesaistītais aģents ir Escherichia coli.

EK buljonu veido tripteīns, laktoze, žults sāļi, dikālija fosfāts, monokālija fosfāts, nātrija hlorīds un ūdens. Tās formula ir stratēģiski izstrādāta, lai veicinātu kopējo un izkārnījumu koliformu veidošanos un novērstu citu pievienoto mikroorganismu attīstību..

Baktērija Escherichia coli ir galvenais izkārnījumu koliforms, kas ir piesārņotājs ūdenī un pārtikas avotos, izraisot nozīmīgus kuņģa-zarnu trakta traucējumus..

Jāatzīmē, ka ir daudz Escherchia coli; starp tām mēs varam minēt enterohemorāģisko (EHEC), enteroinvasīvo (EIEC), enteropatogēno (EPEC), enterotoksigēnu (ETEC) un enteroaggregatīvo (EAEK)..

Tas nozīmē, ka tam ir iespējas ļaut attīstīties visiem, bet nespējot tos atšķirt. Lai to izdarītu, jāveic papildu testi.

Ūdens un pārtikas mikrobioloģiskā izpēte pēc visticamākā skaita (NMP) kopējo un fekālo koliformu meklēšanai ir protokols, kas atbilst vairākām fāzēm; fāzei, apstiprinošās fāzes un pabeigšanas fāzei. EK buljonu izmanto apstiprinošajā fāzē.

Indekss

• 1 Fonds
  • 1.1. EK buljons
  • 1.2. EK buljons, pārveidots ar novobiocīnu
• 2 Sagatavošana
  • 2.1. EK buljons
  • 2.2. EK buljons, pārveidots ar novobiocīnu
• 3 Lietošana
  • 3.1. Kopējo un fekālo koliformu analīze
• 4 Kvalitātes kontrole
• 5 ieteikumi
• 6 Atsauces

Fonds

EK buljons

EK vides pamatā ir vajadzīgo uzturvielu nodrošināšana, lai optimāli attīstītu kopējās un fekālās koliformas, ja baktērija ir iekļauta. Escherichia coli.

Šos uztura elementus nodrošina tripteīns, kas ir lielisks peptīdu un aminoskābju avots. Turklāt tas satur arī laktozi - fermentējamu ogļhidrātu, kas nodrošina enerģiju un ļauj parādīt, vai baktērijas ražo gāzi.

No otras puses, vidē ir žults sāļi, kas nodrošina selektīvu raksturu, jo tas kavē Gram-pozitīvo mikroorganismu augšanu, kas var būt paraugā..

Tāpat kā pH balansēšanas sistēma darbojas kā dikālija fosfāts un monokālija fosfāts. Šī sistēma ir nepieciešama, jo losjonā, kas atrodas buljonā, ir tendence paskābināt vidi, kad to fermentē mikroorganismi, bet to kompensē fosfāta sāļi..

Tāpēc šie elementi ir būtiski, jo nekontrolētā skābums var ietekmēt meklējamo mikroorganismu pareizu attīstību.

Savukārt nātrija hlorīds stabilizē barotni osmotiski, kamēr ūdens ir šķīdinātājs no esošajām šķīdinātājām un nodrošina šķidruma konsistenci vidē..

EK buljons pārveidots ar novobiocīnu

Okrend un Rose radīja dažādus EK buljonus, ko sauc par ES buljonu, kas pārveidots ar novobiocīnu. Modifikācija ietvēra žults sāļu koncentrācijas samazināšanos un 20 mg / dl novobiocīna pievienošanu.

Šī modifikācija veicina celmu atgūšanu Escherichia coli enterohemorāģisks (O157: H7).

Šis baktēriju serotips izraisa smagu hemorāģisku kolītu, kas var izraisīt hemolītisku urēmisko sindromu (HUS); kas savukārt var izraisīt akūtu nieru mazspēju, ar augstu mirstības līmeni, kas vecāka gadagājuma cilvēkiem var sasniegt līdz pat 50%.

Sakarā ar saslimstību un mirstību, ko katru gadu šo baktēriju izraisa piesārņotās pārtikas patēriņš, Amerikas Savienoto Valstu Lauksaimniecības departaments (USDA) plaši iesaka izmantot šos līdzekļus..

Sagatavošana

EK buljons

Nosver 37,4 g dehidratēta barotnes un izšķīdina 1 litrā destilēta ūdens. Maisījumu atstāj uz 5 minūtēm. Pēc tam siltuma avotā izšķīst bieži izšķīst.

Pēc izšķīdināšanas to izplata testa mēģenēs, kas iepriekš kondicionētas ar iekšējo Durham cauruli. Sterilizē autoklāvā 121 ° C temperatūrā 15 minūtes.

Barotnes pH jābūt 6,9 ± 0,2. Dehidrētās vides krāsa ir bēša un sagatavota gaiši dzintara krāsā.

Vīni tiek uzglabāti ledusskapī, līdz tie tiek izmantoti. Lietošanas laikā buljoniem jābūt istabas temperatūrā.

No otras puses, EK buljonu var pagatavot arī divkāršā koncentrācijā.

EK buljons pārveidots ar novobiocīnu

Nosver 36,7 g dehidratēta barotnes un izšķīdina 1 litrā ūdens. Pārējā preparāta daļa ir tāda pati kā iepriekš aprakstītā.

Izmantot

Kopējo un fekālo koliformu analīze

EK buljons ir ideāls koliformu izpētes fāzei, izmantojot NMP metodi, gan ūdens paraugos, gan farmaceitiskajos produktos un pārtikas produktos..

Lazy duļķains un gāzu ražošanas buljoni, kas iegūti paredzamajā fāzē, jāpārvieto 2% gaiši zaļā žults un EK buljonā..

Kopējiem koliformiem EK buljonus inkubē aerobiozi 24 līdz 48 stundas 37 ° C temperatūrā, un fekāliju koliformām tos inkubē aerobiozi 24 līdz 48 stundas 44 ° C temperatūrā..

Abos gadījumos to interpretē šādi: duļķainās caurules ar gāzes ražošanu tiek uzskatītas par pozitīvām. Ja 24 stundu laikā netiek saražota gāze, inkubāciju turpina līdz 48 stundām.

EK pozitīvie buljoni nokļūst līdz pilnīgai apstiprinošajai fāzei, kas sastāv no sēklām selektīvos barotnēs, piemēram, Mac Conkey agarā, EMB agarā vai Endo agarā..

Ja izmantotais buljons ir EC modificēts ar novobiocīnu, pozitīvās caurules ieteicams atkārtoti ieslēgt uz Mac Conkey agara ar sorbītu.

Kvalitātes kontrole

Kvalitātes kontrole jāveic katrai sagatavotās barotnes partijai. Pirmkārt, jānovērtē barotnes sterilitāte. Šajā ziņā vienu vai divus buljonus inkubē bez inokulēšanas aerobiozi 24 stundas 37 ° C temperatūrā. Paredzamais rezultāts ir caurspīdīgs buljons bez duļķainības vai krāsas maiņas.

Otrkārt, jāizvērtē zināmo celmu augšana, kam var izmantot šādas baktērijas: Escherichia coli, ATCC 8739, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

Visos gadījumos ir sagaidāma apmierinoša mikrobu attīstība, novērojot duļķainu buljonu ar gāzes ražošanu E. coli un bez gāzēm Salmonella.

Citi celmi, kurus var iekļaut kontrolē, ir: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212. Šie celmi ir pilnībā jāaizliedz.

Ieteikumi

-Durham cauruļu izvietošana ir būtiska, lai pētītu koliformas.

-Pirms sterilizēšanas, nekad pēc tam izplatīt barotni mēģenēs.

-Nelietot, ja barotnei ir vairāk nekā 3 mēnešu preparāts.

-Nelietot, ja ir kādas izmaiņas parastajās barotnes īpašībās.

Atsauces

1. Laboratories Britania. EK vidējais. 2015. Pieejams: britanialab.com
2. E. coli enterohemorāģiski. Pārtikas nodrošinājuma un sabiedrības veselības centrs. 2010. Pieejams: cfsph.iastate.edu
3. Neogen Corporation. Vidējs EK. Pieejams: foodsafety.neogen.com
4. Neogēns Vidējs EK modificēts ar novobiocīnu. Pieejams: foodsafety.neogen.com
5. Jure M, Condorí S, Leotta G, Chinen I, Miliwebsky E, Allori C, Aulet O, Castillo M. Atklāšana, izolēšana un raksturojums Escherichia coli Shiga toksīna ražotājs no svaigas maltas liellopu gaļas no miesnieku veikaliem Concepción, Tucumán provincē. Rev Microgol ar Arg; 2010, 42 (4): 284-287. Pieejams: www.scielo.org.