Agar SITS pamats, sagatavošana un izmantošana



The SITS agars vai dzelzs trīskāršā cukura agars ir cieta barotne, kas kalpo kā bioķīmisks tests, lai vadītu gramnegatīvās bacīles sākotnējo identifikāciju. Tā pamatā ir klātbūtnes cukuru fermentācija un sērūdeņraža un gāzes ražošana.

Tās sastāvs un pamats ir ļoti līdzīgs Kligler dzelzs testam, atšķirībā no tā, ka pēdējais satur tikai glikozi un laktozi. Tā vietā, kā norāda nosaukums, trīs dzelzs dzelzs satur trīs fermentējamus ogļhidrātus: glikozi, laktozi un saharozi..

Turklāt SITS vidē ir četri olbaltumvielu atvasinājumi, kas padara to par ļoti barojošu agaru: rauga ekstraktu, gaļas ekstraktu, peptonu un proteozes peptonu. Tas satur arī dzelzs amonija sulfātu, nātrija tiosulfātu, nātrija hlorīdu, fenola sarkano un agaru.

Mikroorganisma nespēja fermentēt vidē esošu glikozi nekavējoties izslēdz to no piederības Enterobacteriaceae ģimenei. Tādējādi šis tests ir būtisks, lai izlemtu, kurš identifikācijas ceļš būtu jāizmanto, lai noteiktu ģints un sugas.

Katra laboratorija izlemj, vai tā darbojas ar TSI agaru vai Kligler agara agaru.

Indekss

  • 1 Fonds
    • 1.1 Nātrija hlorīds un agars
    • 1.2 pH indikators (fenola sarkans)
    • 1.3. Olbaltumvielu atvasinājumi (rauga ekstrakts, gaļas ekstrakts, peptons un proteozes peptons)
    • 1.4 Ogļhidrātu fermentācija (glikoze, laktoze un saharoze)
    • 1.5 Gāzes ražošana
    • 1.6 Nātrija tiosulfāts un dzelzs amonija sulfāts (sērūdeņraža ražošana) \ t
  • 2 Sagatavošana
  • 3 Lietojumi
  • 4 Sēž
  • 5 Ierobežojumi
  • 6 Atsauces

Fonds

Katrs no savienojumiem pilda funkciju vidē.

Nātrija hlorīds un agars

Nātrija hlorīds ir nepieciešams, lai uzturētu barotnes osmotisko līdzsvaru. Kamēr agars nodrošina cietu konsistenci.

PH indikators (fenola sarkans)

Sagatavotās barotnes pH ir līdzsvarots līdz 7,3 un pH indikators (fenola sarkans) kļūst dzeltens zem 6.8. Tas nozīmē, ka neliels daudzums skābes, kas rodas, fermentējot cukurus, padara vidi no sarkanīgi oranžas līdz dzeltenai.

Ja fermentācija nenotiek, barotne sārmainās, izmantojot peptonus, no sarkanīgi oranža līdz spēcīgai sarkanai.

Olbaltumvielu atvasinājumi (rauga ekstrakts, gaļas ekstrakts, peptons un proteozes peptons)

Kad baktērijas metabolizē TSI agarā esošās olbaltumvielas, tiek ražoti amīni, kas sārmaina vidi (galvenokārt slīpuma līmenī), jo reakcijai ir nepieciešams skābeklis. Amīni pagriež rāmi uz spēcīgu sarkanu.

Bet tas būs atkarīgs no baktēriju spējas fermentēt ogļhidrātus vai nē.

Ogļhidrātu fermentācija (glikoze, laktoze un saharoze)

Cukuru fermentācijas pētījums var dot vairākus attēlus, un katrs no tiem ir atšķirīgi interpretēts. Testa interpretācija sadala mikroorganismus 3 kategorijās: ne-glikozes fermentori, ne-laktozes fermentori un laktozes / saharozes fermentatori..

Jāatzīmē, ka glikozes daudzums vidē ir ierobežots, bet laktozes un saharozes koncentrācija ir 10 reizes lielāka..

Enterobacteriaceae ģimenes baktērijas un citi glikozes fermentācijas mikroorganismi sāks fermentēt šo cukuru, jo tas ir vienkāršākais enerģijas ogļhidrāts..

No otras puses, laktoze un saharoze ir sarežģīti ogļhidrāti, kas jāsadala un jāpārvērš glikozē, lai tie varētu iekļūt Embden-Meyerhof ciklā.

-Nefermentējoši glikozes mikroorganismi

Kad inokulētais mikroorganisms nespēj fermentēt glikozi, daudz mazāk var fermentēt citus ogļhidrātus. Tāpēc šeit nav veidotas skābes, bet konjunktūrā ir amīna veidošanās peptonu lietošanas dēļ.

Šajā gadījumā slīpums kļūst par spēcīgāku sarkanu, un caurules apakšdaļa var palikt nemainīga vai arī var būt sārmaina, atstājot visu sarkano cauruli.

Interpretācija: K / K ir sārmains vai sārmains vai neitrāls fons

Attēlā, kas atrodas raksta sākumā, skatiet caurules D attēlu.

Šis rezultāts norāda, ka mikroorganisms nepieder Enterobacteriaceae ģimenei.

-Laktozes / saharozes nefermentējošie mikroorganismi

Ja baktērijas spēj fermentēt glikozi, bet ne laktozi vai saharozi, notiks:

Baktērija patērēs visu glikozi, kas atrodas pēc aptuveni 6 līdz 8 stundām, un varēs paskābināt gan leņķi, gan taco; tas ir, agars būs pilnīgi dzeltens. Bet, kad glikoze ir izsmelta un nespēj lietot laktozi un saharozi, baktērijas sāks proteīnu metabolismu..

Šai reakcijai ir vajadzīgs skābeklis, tāpēc peptonu sadalīšanās notiek uz virsmas (slīpums). Izgatavotie amīni sārmaina slāni, pagriežot dzelteno līdz sarkanu. Šo reakciju pierāda 18 līdz 24 stundu inkubācijas laikā.

Interpretācija: K / A ir sārmains slīpums un skābe taco.

Attēlā, kas atrodas raksta sākumā, skatiet caurules B attēlu.

-Laktozes / saharozes fermentācijas mikroorganismi

Acīmredzot, mikroorganismi, kas spēj fermentēt laktozi un saharozi, var fermentēt glikozi. Pēc tam, kad vidē esošais minimālais glikozes daudzums ir izsmelts, veidojas piruvāts, kas sāk metabolizēties, veidojot skābes caur Krebsa aerobo ciklu, un no 8 līdz 12 stundām visa barotne būs dzeltena.

Ja baktērijas spēj sadalīt laktozi vai saharozi, skābes turpinās ražot, un pēc 18 līdz 24 stundām visa caurule - knābis un taco - paliks dzeltena.

Jāatzīmē, ka glikozes lietošana notiek divos veidos: viens aerobos formā caurules leņķī un otrs anaerobiski caurules apakšā..

Interpretācija: A / A ir skābes slīpums / skābe. Tas var uzrādīt gāzi vai nē.

Attēlā, kas atrodas raksta sākumā, skatiet caurules A attēlu.

Gāzes ražošana

Daži mikroorganismi spēj saražot gāzi cukuru fermentācijas laikā. Caurulē gāzi pierāda spiediens, ko tas rada agārā. Spiediens izraisa burbuļu veidošanos vai agara pārvietošanos. Dažreiz gāzes veidošanās var sagraut vidi.

Svarīgi, lai SSI barotnes sēšanas laikā punkcija tiktu veikta tīri ar agara centru, līdz tas sasniedz dibenu. Ja punkcija tiek novirzīta caurules sienām, tā var radīt viltus pozitīvus gāzes ražošanā, jo tā izbēgsies caur nepareizi izveidoto kanālu.

Gāzes ražošanai, kā arī reakcijām, kas rodas agara slīpumā, ir nepieciešams skābeklis, tādēļ ir ieteicams, lai caurule tiktu pārklāta ar kokvilnas spraudni, un, ja tiek izmantots bakelīta vāks, to nedrīkst pilnībā noregulēt.

Gāzes ražošanu ziņo kā pozitīvu (+) vai negatīvu (-).

Nātrija tiosulfāts un dzelzs amonija sulfāts (ūdeņraža sulfīda ražošana) \ t

Baktērijas, kas spēj ražot sērūdeņradi (bezkrāsains gāze), ņem nātrija tiosulfāta sēru vidē. Kad H ir izveidots2S reaģē ar dzelzs amonija sulfātu, veidojot dzelzs sulfīdu (skaidri redzamas melnas nogulsnes).

H2S ziņo kā pozitīvu (+) vai negatīvu (-).

Attēlā, kas atrodas raksta sākumā, skatiet caurules C attēlu.

Sagatavošana

Nosver 62,5 g dehidrēta trīskāršā cukura (TSI) agara un izšķīdina vienā litrā destilēta ūdens..

Karsē, līdz agars ir pilnīgi izšķīdis. Vāra dažas minūtes bieži maisot. Izplatiet 4 ml barotnes ar 13/100 mēģenēm ar vates vāku.

Sterilizē autoklāvā 121 ° C temperatūrā 15 minūtes. Noņemiet no autoklāvas un ļaujiet tam palikt slīpi. Jāpievērš uzmanība tam, lai gan pamatnei, gan rāmim būtu vienāds attālums.

Uzglabāt ledusskapī 2-8 ° C. Pirms baktēriju celmu stādīšanas ļaujiet noskalot.

Dehidrētās vides krāsa ir gaiši bēša un sagatavotā barotne ir sarkanīgi oranža

Sagatavotās barotnes galīgais pH ir 7,3 ± 0,2.

Lietojumi

SITS tests tiek plaši izmantots mikrobioloģijas laboratorijas līmenī. Šis tests ir būtisks, lai vadītu testa veidu, kas jāpiemēro, lai iegūtu ģints un sugas identifikāciju. Tās laba izpilde un interpretācija var ietaupīt materiālus un darbu.

Ja rezultāts ir SITS K / K, un citohroma oksidāzes tests ir pozitīvs, ir zināms, ka testus jāizmanto, lai identificētu nefermentējošas gramnegatīvas bacīles, piemēram, Pseudomonas, Alcaligen, Achromobacter, Burkholderia, starp citām ģintīm. Ja tā ir negatīva oksidāze, tā ir orientēta uz Acinetobacter, Stenotrophomonas uc ģintīm..

No otras puses, ja iegūst ASI vai K / A SITS un citohroma oksidāzes tests ir negatīvs, jo vairāk nitrātu samazinās līdz nitritiem, mums būs pārliecība, ka tas ir Enterobacteriaceae ģimenei piederošs mikroorganisms. Šajā gadījumā identifikācijas ceļš būs orientēts uz specifiskām pārbaudēm šai baktēriju grupai.

No otras puses, ja tiek iegūts K / A vai A / A attēls un citohroma oksidāzes tests ir pozitīvs, papildus uzstādāmie testi tiks vērsti uz fermentācijas celmu identifikāciju, kas nepieder Enterobacteriaceae ģimenei, piemēram: Aeromonas, Plesiomonas, Vibrio un Pasteurella.

SITS ar ūdeņraža sulfīdu, negatīvu oksidāzi, noteiks šādas Enterobacteriaceae ģints ģints: Proteus, Citrobacter, Edwardsiella, Leminorella, Pragia, Trabusiella vai Salmonella.

TSI ar ierobežotu vai mērenu ūdeņraža sulfīdu sārmainā leņķī ar sārmu dibenu un pozitīvu oksidāzi palīdzēs izmantot testus, lai identificētu gramnegatīvus, nefermentējošus bacillus, kas ražo H2S, piemēram, Shewanella putrefaciens.

Visbeidzot, SITS var izmantot, lai izpētītu ūdeņraža sulfīda ražošanu grampozitīvos bacilos, jo īpaši, ja ir aizdomas par to. Erysipelotrix rhusiopathiae.

Sēta

SITS barotnei jāpārbauda tīras kolonijas, kas izolētas primārajās vai selektīvajās kultūrās. Ja kolonija tiek ņemta no selektīvām barotnēm, kas tika iesētas ar paraugiem ar jauktu floru, jāuzmanās, lai ņemtu tikai virsmu, jo kolonijas apakšējā daļā šajā vidē var būt dzīvotspējīgi celmi..

Tāpēc cilpa nekad nav jāatdzesē selektīvā vidē, lai pēc tam paņemtu koloniju un inokulētu SITS barotni.

Stādīšana notiks ar taisnu cilpu vai adatu. Tiks veikts punkcija, rūpējoties par to, lai tas būtu caur vidus centru, līdz sasniegs dibenu, un tad stādīšana ir pabeigta virsmas inokulēšana zigzaga veidā. Nelietojiet divus punktus.

Inkubējiet aerobiozi 37 ° C temperatūrā 18-24 stundas. Interpretēt šajā laikā, ne pirms, ne pēc tam.

Ierobežojumi

SITS tests jālasa no 18 līdz 24 stundām inkubācijas. Lasījums pirms šī laika var dot viltus pozitīvu fermentāciju A / A. Tā kā pēc šī laika nolasīšanas var rasties nepatiesa negatīva attēla forma, kas rodas, nesaturot fermentu, kas sārmaina vidi..

Atsauces

  1. Mac Faddin J. (2003). Biochemiskie testi klīniski nozīmīgu baktēriju identificēšanai. 3. ed. Redakcijas Panamericana. Buenosairesa Argentīna.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobioloģiskā diagnoze. 12 ed. Redakcijas Panamericana S.A. Argentīna.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobioloģiskā diagnoze. 5. izdevums Redakcijas Panamericana S.A. Argentīna.
  4. "TSI agars." Vikipēdija, brīvā enciklopēdija. 10 jūlijs 2018, 08:09 UTC. Feb 10 2019, 03:33 Pieejams: en.wikipedia.org
  5. Laboratories Britania. TSI agars (trīskāršā cukura dzelzs agars). 2015. Pieejams: britanialab.com
  6. BD laboratorijas Trīskāršā cukura dzelzs agars (TSI Agar). 2003. Pieejams: bd.com