Agar Thayer Martin pamats, sagatavošana un izmantošana



The Thayer Martin agars Tas ir ļoti barojošs un selektīvs ciets līdzeklis, lai izolētu Neisseria meningitidis un Neisseria gonorrhoeae; abas pazīstamas kā patogēnas vai klīniski nozīmīgas Neisseria.

Viena no svarīgākajām Thayer Martin agara īpašajām iezīmēm ir tās augstais uztura bagātinātāju saturs. Šis īpašums ir neaizstājams, jo Neisserias ir ļoti prasīgi mikroorganismi no uztura viedokļa un tāpēc nepalielinās kopējos medijos.

No otras puses, jo šie mikroorganismi parasti atrodami nesterilās zonās, ir nepieciešams pievienot inhibitorus, kas kavē pievienotās floras augšanu, neietekmējot Neisseria ģints attīstību..

Šis agars sastāv no GC bāzes agara, hemoglobīna, papildu uztura bagātinātājiem un inhibējošu vielu kompleksa (antibiotikas un pretsēnīšu līdzekļi). Komerciālās mājas pārdod katru papildinājumu atsevišķi.

Šajā vidē plānotais paraugs būs atkarīgs no meklējamā mikroorganisma. Uz Neisseria gonorrhoeae Ideāli paraugi ir maksts un urīnizvadkanāla izdalījumi. Kamēr par Neisseria meningitidis visbiežāk izmantotie paraugi ir CSF, faringālās un nazofaringālās eksudāti.

Indekss

  • 1 Fonds
    • 1,1 GC bāzes agars
    • 1.2 Hemoglobīns
    • 1.3 Bagātināšanas papildinājums
    • 1.4 Inhibitori
  • 2 Sagatavošana
    • 2.1. Sākotnējais Thayer Martin Agar
    • 2.2 Agar Thayer Martin modificēts
  • 3 Lietošana
  • 4 Kvalitātes kontrole
  • 5 Ierobežojumi
  • 6 Atsauces

Fonds

Neisserias ir mikroorganismi, kas klasificēti kā apgrūtinoši, un tāpēc to izolācija ir sarežģīta. Šā iemesla dēļ Thayer Martín ir sarežģīts informācijas nesējs, un katrs no tā komponentiem pilda tālāk aprakstīto funkciju:

GC kodolsagars

GC agars satur proteozes peptonu, kukurūzas cieti, nātrija hlorīdu, dikālija fosfātu, monokālija fosfātu un agara agaru. Tās sastāvdaļas nodrošina pamata barības vielas mikrobu attīstībai, neitralizē toksiskās taukskābes, veicina osmotisko līdzsvaru, nosaka pH un nodrošina stabilu konsistenci videi..

Hemoglobīns

Hemoglobīns nodrošina faktorus V un X (nikotīnamīda adenīna dinukleotīds NAD un hemin). Tāpēc šajā vidē aug arī Haemophilus sugas. Hemoglobīnu var iegūt komerciāli dehidrētā veidā vai svaigu defibrinātu liellopu asinis var pievienot vidē..

Bagātināšanas papildinājums

No otras puses, Thayer-Martin vidē jāpievieno bagātināšanas bagātinātājs, jo barības vielas, kas atrodas bāzes agarā, nav pietiekamas Neisseria ģints prasībām..

Visbiežāk izmantoto bagātināšanas papildinājumu sauc par isovitalex. Tas satur glutamīnu, adenīnu, NAD, kokarboksilāzi, guanīnu, dzelzs nitrātu, p-amino benzoskābi, B12 vitamīnu, tiamīnu un glikozi. Visi šie savienojumi ir nepieciešami, lai pareizi attīstītu patogēno Neisseria.

Inhibitori

Tā kā tas ir ļoti barojošs līdzeklis, inhibitori jāizmanto, lai novērstu mikroorganismu augšanu parastajā šīs zonas florā, tādējādi veicinot Neisseria ģints izolāciju..

Inhibitoru komplekss sastāv no vankomicīna, kolistīna un nistatīna. Vankomicīns kavē Gram-pozitīvo baktēriju augšanu, kolistīns neļauj attīstīties gramnegatīvām baktērijām, piemēram, Pseudomonas un dažiem saprofītiskiem Neisseria, un nistatīns iedarbojas uz raugiem kā Candida albicans.

Tomēr Thayer Martin agars tika pārveidots; izmaiņas ietvēra trimetoprima pievienošanu, agara daudzuma palielināšanos un papildus glikozes pievienošanu. Šīs pārmaiņas būtiski uzlaboja sugu atjaunošanos. \ T Neisseria gonorrhoeae.

Jāatzīmē, ka trimetoprims inhibē Proteus ģints augšanu un tā sekojošo rīšana. Šajā ziņā antibiotikas nodrošina selektīvu dabu Thayer Martin.

Sagatavošana

Oriģinālais Thayer Martin Agar

-GC agars

Nosver 8,2 g dehidrētas GC barotnes un suspendē 100 ml. Samaisa un vāra 1 minūti ar biežu maisīšanu, lai pilnībā izšķīdinātu. Sterilizē maisījumu autoklāvā 121 ° C temperatūrā 15 minūtes.

-2% hemoglobīna

2 g dehidratēta hemoglobīna suspendē 2 vai 3 ml karsta destilēta ūdens, veidojot vienotu maisījumu. Pievienojiet nedaudz nedaudz vairāk ūdens, lai pabeigtu 100 ml tilpumu. Pirms sterilizēšanas suspensijai jābūt viendabīgai.

Sterilizējiet autoklāvā 15 minūtes.

-Bagātināšanas papildinājums

Atjaunojiet komerciālo ceļu ar atšķaidītāju, ko nodrošina tā pati tirdzniecības māja. Labi samaisa. Izmantojamā atšķaidītāja daudzums tiks norādīts komplekta instrukcijās..

-Aizlieguma papildinājums V.C.N (vankomicīns, kolistīns, nistatīns)

Izšķīdiniet flakonu ar atšķaidītāju, ko nodrošina tirdzniecības māja. Labi samaisa. Izmantojamā atšķaidītāja daudzums tiks norādīts komplekta instrukcijās..

-Sagatavots

Katram 100 ml GC agara notiek šādi:

Kad GC agars atstāj autoklāvu, ļaujiet tai atdzist līdz aptuveni 50 ° C temperatūrai un pievieno 2 ml sagatavotā hemoglobīna šķīduma, 2 ml bagātināšanas papildinājuma (izobitalex vai britalex) un 2 ml inhibīcijas papildinājuma. Sajauc un pasniedz sterilos Petri trauciņos.

Ļaujiet sacietēt un uzglabāt ledusskapī līdz lietošanai.

Sagatavotās barotnes krāsa ir ķiršu sarkana. Vidēja pH ir 7,2 ± 0,2

Modificēts Thayer Martin Agar

Nosver 8,2 g dehidrētas GC barotnes un suspendē 100 ml. Pievieno 1 g agara un pievieno 0,3 g glikozes. Samaisa un vāra 1 minūti ar biežu maisīšanu, lai pilnībā izšķīdinātu. Sterilizē maisījumu autoklāvā 121 ° C temperatūrā 15 minūtes.

Sagatavojiet hemoglobīna un bagātināšanas papildinājumu, kā aprakstīts iepriekš.

Lietotais inhibīcijas papildinājums ir V.C.N.T (vankomicīns, kolistīns, nistatīns, trimetoprims)..

-Sagatavots

Turpiniet, kā aprakstīts oriģinālajam Thayer Martin agaram.

Izmantot

Pirms paraugu sēšanas Thayer Martin agars jāturpina. Visbiežāk izmantotie paraugi ir rīkles eksudāti, deguna eksudāti, maksts, urīnizvadkanāla un / vai taisnās zarnas sekrēcija un CSF..

Izmantojiet svaigi ņemtus paraugus un uz agara uzlieciet stipras inokulas. Paraugi tiek sēti tieši ar materiāla izlādi un pēc tam izstiepti uz virsmas.

Plāksnes inkubē 35-37 ° C temperatūrā 24 līdz 48 stundas mikroaerofilā burkā (5% CO2). Inkubācijas perioda beigās plāksnes tiek pārbaudītas attiecībā uz mazām, pelēkām un dažreiz gļotainām kolonijām..

Veikt gramatikas un apstiprinošās bioķīmiskās pārbaudes aizdomīgām kolonijām.

Kvalitātes kontrole

Lai veiktu Thayer Martin agara kvalitātes kontroli, var izmantot šādus mikrobu celmus.

Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 un Neisseria meningitidis ATCC 13090; abos celmos ir sagaidāma pietiekama attīstība.

Jāiekļauj arī šādi celmi: Staphylococcus epidermidis ATCC 14990, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 un Candida albicans ATCC 10231. Visos šajos barotnēs ir sagaidāma pilnīga vai daļēja inhibīcija.

Ierobežojumi

-Jāņem vērā, ka vidē var augt baktērijas, kas ir izturīgas pret izmantotajiem inhibitoriem..

-Ir. \ T Neisseria gonorrhoeae kas var būt jutīgi pret izmantoto vankomicīna koncentrāciju. Šā iemesla dēļ ir ieteicams paralēli izmantot šokolādes agaru, kas papildināts ar isovitalex, bet bez inhibitoriem.

-Pastāv raugi, kas ir izturīgi pret nistatīnu, kas var augt šajā barotnē un traucēt patogēnu Neisseria, īpaši gonokoku, izolāciju..

Atsauces

  1. Valtek diagnostikas laboratorijas. Agar Thayer-Martin.2016. Pieejams: com
  2. Laboratories Britania. Thayer Martin Modified Medium. 2010. Pieejams: britanialab.com
  3. Wikipedia dalībnieki. Thayer-Martin agars. Vikipēdija, brīvā enciklopēdija. 2017. gada 26. oktobris, 16:33 UTC. Pieejams vietnē: wikipedia.org4. Piekļuve 2019. gada 28. februārim.
  4. Laboratories Britania. GC agars. 2010. Pieejams: britanialab.com.
  5. Laboratorijas BBL ™ vidēja bagātināšana stipriem mikroorganismiem. 1999. Pieejams: bd.com
  6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobioloģiskā diagnoze. 12 ed. Redakcijas Panamericana S.A. Argentīna.