Agara TCBS pamats, sagatavošana un izmantošana



The TCBS agars ir ļoti selektīva un diferenciāla cieta barotne, ko izmanto, lai izolētu un kultivētu Vibrio baktērijas, īpaši Vibrio cholerae, V. vulnificus un V. parahaemolyticus kā šīs ģints galvenie patogēni.

Akronīms TCBS ir tiosulfāta citrāta žults saharoze. Šis agars ir pazīstams arī kā selektīva vide Vibrios. Sākotnējo formulu izveidoja Nakanishi un vēlāk modificēja Kobayashi.

Tas sastāv no rauga ekstrakta, gaļas peptona, tripteīna, nātrija citrāta, nātrija tiosulfāta, vēršu žults, saharozes, nātrija hlorīda, dzelzs citrāta, bromtimola zila, timola zilā un agara.

Šis sastāvs ļauj pienācīgi attīstīt Vibrio sugas no ūdens, izkārnījumiem un pārtikas paraugiem; izņemot Vibrio hollisae, kas nepalielinās šajā vidē. Turklāt TCBS barotne spēj inhibēt citu pavadošo baktēriju, īpaši koliformu, augšanu.

Sakarā ar smagām kuņģa-zarnu trakta un ārpuszarnu problēmām, ko rada dažas Vibrio ģints sugas, to diagnoze ir ļoti svarīga. Cilvēks ir inficēts galvenokārt ar neapstrādātu vai neapstrādātu jūras produktu vai piesārņota ūdens patēriņu, bet arī ar brūču infekciju..

Tādēļ klīniskajām laboratorijām jāiekļauj TCBS agars šķidru izkārnījumu paraugu izkārnījumu kultūru pētīšanā, jo īpaši ar rīsu ūdens izskatu. Jo īpaši, ja pacientam ir bijis kontakts ar jūras ūdeni vai patērējis jūras veltes vai zivis.

Indekss

  • 1 Fonds
  • 2 Sagatavošana
  • 3 Lietošana
  • 4 Sēž
  • 5 Ierobežojumi
  • 6 Kvalitātes kontrole
  • 7 Atsauces

Fonds

Rauga ekstrakts, gaļas peptoni un tripteīns ir barotnes avots. Tomēr TCBS agars ir nevēlams medijs vairumam baktēriju.

Tās augsto selektivitāti nodrošina, pievienojot nātrija citrātu un vēršu žulti; abas ir inhibējošas vielas, kas arī nodrošina sārmu pH vidē, ierobežojot pievienotās floras augšanu un veicinot augšanu. V. cholerae, citu sugu vidū. Jāatzīmē, ka Vibrio cholerae ir ļoti jutīga pret grēmas.

Savukārt nātrija hlorīds osmotiski līdzsvaro barotni. Turklāt, tā kā tā koncentrācija ir augsta, tā darbojas arī kā inhibējošs līdzeklis, kas veicina halofilo baktēriju augšanu.

Saharoze ir fermentējamais cukurs, kas kopā ar zilo pH rādītāju bromtimolu un timolu zilā krāsā piešķir atšķirīgu raksturu. Šā iemesla dēļ ir iespējams diferencēt saharozes fermentācijas celmus no nefermentējošiem celmiem.

Saharozes fermentējošo celmu kolonijas veido dzeltenu krāsu, un skābes ražošanas dēļ tās no zaļas līdz dzeltenai pārvēršas. Nefermentori aug caurspīdīgi un barotne paliek sākotnējā krāsa (zaļa).

Līdzīgi, šī barotne satur nātrija tiosulfātu kā sēra un dzelzs citrāta avotu kā atklātu līdzekli. Abās ir baktērijas, kas spēj ražot sērūdeņradi (bezkrāsaina gāze). H2S veidojas no tiosulfāta un vēlāk reaģējot ar dzelzs citrātu, rodas redzama melna nogulsne.

Visbeidzot, agars ir tas, kas nodrošina vidē cieto konsistenci.

Sagatavošana

Nosver 89 g dehidrētas vides un izšķīdina vienā litrā destilēta ūdens. Palīdziet izšķīdināšanai, sildot un bieži sajaucot. Maisījumu var vārīt 2 minūtes.

Šis nesējs nav autoklāvs. Pēc izšķīdināšanas tas tiek pasniegts tieši uz sterilām plāksnēm. Sablīvējot, tie ir novietoti apgrieztā veidā plāksnes veidotājos un tiek uzglabāti ledusskapī (2-8 ° C), līdz tie tiek izmantoti.

Pēc sagatavošanas barotnei jābūt pH 8,6 ± 0,2.

Dehidrētās vides krāsa ir gaiši bēša vai zaļgani bēša, un vidēja krāsa ir meža zaļa vai zilgani zaļa.

Pirms paraugu sēšanas ir svarīgi, lai plāksnes tiktu rūdītas.

Izmantot

Visbiežāk sastopamais paraugs Vibrios izolācijai ir caureju izkārnījumi.

Stoļu paraugi, ja tos nevar sēt tieši uz selektīvā barotnes, jāpārvadā Cary Blair vidū.

Lai palielinātu kultūras jutību, fekālijas var izvadīt caur peptona ūdeni pie pH 8,4 kā bagātināšanas vidi 8 stundas maksimāli, no turienes tas tiek kultivēts uz TCBS barotni..

Jāņem vērā arī tas, ka daži Vibrios celmi var izraisīt septicēmiju imūnsupresīviem pacientiem, tāpēc tos var izolēt no asins kultūrām. Tāpat var analizēt ūdens un pārtikas paraugus no jūras, ja ir epidēmijas uzliesmojumi no holēras slimības..

Sēta

Izpētītā parauga inokulātam jābūt pamanāmam, sēšana tiek veikta, izmantojot izsmidzināšanas metodi. Plāksnes inkubē 37 ° C temperatūrā 24 stundas aerobiozi.

Paredzamās. \ T Vibrio cholerae Tās ir vidēja lieluma, gludas, necaurspīdīgas, ar plānām malām un dzeltenu, jo tās fermentē saharozi..

Līdzīgi, sugas V. alginolyticus, V. fluvialis, V. hareyi, V. cincinnatiensis, V. furnissii, V. metschnikovii un daži V. vulnificus. Citas sugas Vibrios klīniski nozīmīgas kā V. parahaemolyticus nesagatavo saharozi, attīstoties kā olīvu zaļās kolonijas.

No otras puses, mums ir jāpatur prātā, ka daži Aeromonas un Plesiomonas celmi, kas ir oksidāze (+), var augt šajā vidē, attīstot dzeltenas kolonijas, kas var sajaukt klīniku. Kaut arī daži Pseudomonas celmi arī oksidāzi (+) aug kā zaļās kolonijas, kā arī V. parahaemolyticus.

Ierobežojums

Oksidāzes tests, kas ir pozitīvs attiecībā uz Vibrio ģints, nekad nav jāveic no kolonijām, kas iegūtas no TCBS agara, jo iegūtais rezultāts būs viltus negatīvs. Šajā testā vidē esošie savienojumi iejaucas. Tāpēc tas jādara no subkultūrām uz asins agara.

Kvalitātes kontrole

Lai pierādītu, ka vide ir labā stāvoklī, ieteicams apzināt zināmus vai sertificētus kontroles celmus un novērot, vai augšana atbilst paredzamajām īpašībām.

Šim nolūkam:

-Vibrio cholerae - Apmierinoša izaugsme (dzeltenas kolonijas, caurspīdīga robeža).

-Vibrio parahaemolyticus - Apmierinoša izaugsme (kolonija ar zaļu centru un caurspīdīgu robežu).

-Vibrio alginolyticus ATCC 17749 - apmierinošs augums (dzeltenas kolonijas ar tāda pašas krāsas halo ap koloniju).

-Enterococcus faecalis ATCC 29212 - pilnīga vai daļēja inhibīcija (mazas dzeltenas vai caurspīdīgas kolonijas).

-Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 - daļēja vai pilnīga inhibīcija (zilas kolonijas).

-Escherichia coli ATCC 25922 - Pilnīgi nomākts.

-Proteus mirabilis ATCC 43071 - pilnīga vai daļēja inhibīcija. (Mazo koloniju centra zaļā caurspīdīgā mala).

Neapstrādāta nesēja inkubācijai nevajadzētu mainīties.

Atsauces

  1. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. TCBS agars. 2009. Pieejams: f-soria.es
  2. BD laboratorija. BD. TCBS Agar 2003. Pieejams: bd.com
  3. Laboratories Britania. TCBS Medium. 2015. Pieejams: britanialab.com
  4. Acumedia laboratorijas TCBS agars. 2016. Pieejams: foodsafety.neogen.com
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobioloģiskā diagnoze. 12 ed. Redakcijas Panamericana S.A. Argentīna.
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobioloģiskā diagnoze. 5. izdevums Redakcijas Panamericana S.A. Argentīna.