Soy agar tripticaseína pamats, sagatavošana un izmantošana

The trypticasein sojas agars vai triptāzes sojas agars ir cieta, neselektīva un barojoša barotne. To apzīmē ar burtiem TSA par tās akronīmu angļu valodā Trypticase Soy Agar. Tas sastāv no tripteīna, sojas peptona, nātrija hlorīda un agara agara.

Pateicoties augstajai barības iedarbībai, tas ir ideāli piemērots vidēji prasīgu un neprasošu mikroorganismu audzēšanai. Barotne bez papildu piedevām nav ieteicama primārajām kultūrām, bet tā ir ļoti noderīga tīru celmu subkulturēšanai un to dzīvotspējas saglabāšanai, cita starpā..

Arī šis agars kalpo par pamatu bagātinātas barotnes, piemēram, asins agara, pagatavošanai, it īpaši, ja ir nepieciešams novērot hemolīzes paraugus un optoquine un bacitracin taksonus, kas nepieciešami diagnosticēšanai. Streptococcus pneumoniae un Streptococcus pyogenes attiecīgi.

No otras puses, kombinējot ar antibiotikām, ir lietderīgi izolēt klīniski nozīmīgus un stingrus anaerobus mikroorganismus no paraugiem ar jauktu floru..

Visbeidzot, tripticasein sojas agara sastāvs un tā veiktspēja atbilst dažādām farmakopejām (Eiropas, Japānas un Ziemeļamerikas) noteiktajām prasībām..

Indekss

• 1 Fonds
• 2 Sagatavošana
  • 2.1. Tripticasein sojas agara plāksnes
  • 2.2. Tripticasein sojas agara plāksnes, kas papildinātas ar asinīm
  • 2.3. Tripticasein sojas agara plāksnes, kas papildinātas ar apsildāmām asinīm
  • 2.4 Trīskāršā sojas agara ķīļi
• 3 Lietojumi
• 4 Sēž
• 5 Kvalitātes kontrole
  • 5.1. Sterilitātes kontrole
  • 5.2. Augšanas kontrole
  • 5.3. Kontrole ar tripticasein sojas agara augšanu un hemolīzes modeli, kas papildināts ar asinīm
• 6 Atsauces

Fonds

Lai pienācīgi attīstītu baktērijas, ir nepieciešams enerģijas ieguldījums, piemēram, aminoskābes, vitamīni, purīna bāzes un pirimīds..

Šajā ziņā tripteīns un sojas peptons nodrošina šīs barības vielas mikroorganismiem, tādējādi nodrošinot to pilnīgu attīstību. Tomēr, lai palielinātu tā bagātināšanos, prasīgajām baktērijām šis agars ir jāpapildina ar defibrētu asinīm vai sildāmām asinīm.

No otras puses, ja vidē tiek pievienotas antibiotikas, tas kļūst par selektīvu barotni. Jūs varat pievienot arī 0,6% rauga ekstraktu, lai veicinātu Listeria ģints sugu izolāciju, pievienojot cistīna tellurītu. un Jēra asinis ir ideāla Corynebacterium diphteriae.

Visbeidzot, nātrija hlorīds nodrošina osmotisko līdzsvaru vidē un agars nodrošina cietu konsistenci.

Sagatavošana

Tripticasein sojas agara plāksnes

Lai sagatavotu trypticasein sojas agaru, 40 g dehidrētas komerciālas barotnes jānosver digitālā mērogā. Šķīdina litrā destilēta ūdens, kas atrodas fiolā.

Maisījumam ļauj nostāvēties 5 minūtes un pēc tam nonāk siltuma avotā, lai palīdzētu izšķīdināt barotni. To bieži maisa un atstāj uz vāra 1 vai 2 minūtes. Pēc tam barotni sterilizē autoklāvā 121 ° C temperatūrā 15 minūtes.

Ļauj atdzist līdz 50 ° C un sadalīt sterilos Petri trauciņos. Ļaujiet sacietēt, invertēt, sakārtot plauktos un uzglabāt ledusskapī.

Barotnes galīgajam pH jābūt 7,3 ± 0,2.

Jāņem vērā, ka dehidrētās barotnes krāsa ir gaiši bēša un sausā vietā jāuzglabā no 10 līdz 35 ° C..

Savukārt sagatavotais agars ir gaiši dzintars. Sagatavotās plāksnes līdz lietošanai jāuzglabā ledusskapī (2 līdz 8 ° C).

Plāksnēm pirms lietošanas ir jāsasniedz istabas temperatūra.

Tripticasein sojas agara plāksnes, kas papildinātas ar asinīm

Asins agars tiek pagatavots, pievienojot 5% defibrinētu asiņu, atdzesējot trypticasein sojas agaru 50 ° C temperatūrā. Maisījumu homogenizē, pagriežot ar maigām kustībām.

Pasniedziet sterilos Petri trauciņos. Vidēja materiāla krāsai jābūt ķiršu sarkanai.

Tripticasein sojas agara plāksnes, kas papildinātas ar apsildāmām asinīm

Lai sagatavotu TSA balstītu asins agaru, iepriekš aprakstītās procedūras ir vienādas, bet, atstājot autoklāvu, tam ļauj nostāties, līdz vides temperatūra ir aptuveni no 56 līdz 70 ° C. Tajā laikā asinis ievieto un sajauc, līdz vidē kļūst brūna.

Pasniedziet sterilos Petri trauciņos. Vidējas krāsas krāsa ir šokolādes brūna.

Trīskāršā sojas agara ķīļi

Agara sagatavošanas procedūra ir tāda pati kā plāksnēs aprakstītā procedūra, atšķirībā no tā, ka tā vietā, lai kalpotu barotnei uz Petri trauciņām, pirms sterilizēšanas tas tiek sadalīts starp 10 un 12 ml mēģenēs ar bakelīta vāku..

Pēc tam caurules 15 minūtes autoklavē 121 ° C temperatūrā. Atstājot, viņi palīdz ar atbalstu un ļauj sev sacietēt.

Sagatavotos ķīļus sēj ar virsmu un kalpo tam, lai noteiktu laiku uzturētu noteiktus neprasamus dzīvotspējīgus mikroorganismus.

Lietojumi

Trypticasein sojas agaru izmanto šādos gadījumos:

-Kā pamats, lai sagatavotu klasisko asins agaru, ko parasti izmanto lielākajā daļā laboratoriju.

-Prasīgo baktēriju izolācija.

-Hemolīzes modeļa novērošana.

-Diagnostikas testu izpilde.

-Par pamatu speciāla asins agara sagatavošanai Corynebacterium diphteriae, ar tellūra cistīnu un jēra asinis.

-Par pamatu jēra asins agara sagatavošanai, vairāk kanamicīna-vankomicīna anaerobu augšanai, īpaši Bacteroides sp.

-Neprasošu celmu uzturēšanai (Bacterioteca).

-Mikrobu aerobo skaits mikrobioloģiskā limita pētījumā par ūdens, vides, pārtikas un kosmētikas paraugiem.

Sēta

Paraugus var sēt tieši tieši ar triptikāzīna sojas agara virsmu, kas papildināta ar asinīm vai citām piedevām. To sēj ar izsmelšanu.

Lai gan tripticasein sojas agara plāksnes bez piedevām parasti lieto mikrobu celmu (baktēriju vai raugu) subkultūru \ t.

Kvalitātes kontrole

Sterilitātes kontrole

Lai pārbaudītu dažādu mediju, kas pagatavotas ar triptikāzīna sojas agaru, sterilitāti, ieteicams veikt šādas darbības: no katras sagatavotās partijas vienu vai divas plāksnes vai caurules inkubē bez inokulācijas 37 ° C temperatūrā 24 stundas, lai parādītu sterilitāti. Visos gadījumos tai jāpaliek bez izaugsmes.

Ja ir konstatēts piesārņojums, visa partija jāiznīcina.

Izaugsmes kontrole

Lai pētītu triptikāzīna sojas agara pareizu darbību, var izmantot šādus baktēriju celmus: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aerugiosa ATCC 9027 un Enterococcus faecalis ATCC 29212.

Celmus sēj un inkubē aerobiozi 37 ° C temperatūrā 24 stundas.

Visos gadījumos izaugsmei jābūt apmierinošai.

Sēnes var izmantot arī kā kompleksu Candida albicans ATCC 10231 un Aspergillus niger ATCC 16404. Gaidāms labs abu celmu pieaugums.

Augšanas kontroles un hemolīzes paraugs tripticasein sojas agaram, kas papildināts ar asinīm

Lai pārbaudītu ar šo bāzi sagatavotā asins agara pareizu darbību, var izmantot šādus celmus: Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 un Streptococcus pneumoniae ATCC 49619.

Tos sēj un inkubē 37 ° C temperatūrā microaerophilicus 24 stundas.

Visos gadījumos izaugsmei jābūt apmierinošai, ņemot vērā to. \ T S. pyogenes beta-hemolīze (skaidra halo ap koloniju) un abos celmos S. pneumoniae jāievēro alfa hemolīze (zaļgana halo ap kolonijām).

Atsauces

1. Wikipedia dalībnieki. Trypticase I agar. Vikipēdija, brīvā enciklopēdija. 2018. gada 17. decembris, 15:47 UTC. Pieejams: https://en.wikipedia.org
2. Laboratories Britania. Tryteīna sojas agars. 2015. Pieejams: britanialab.com
3. Neogen Laboratories Sojas pupiņu triptika. Pieejams: foodsafety.neogen.com
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobioloģiskā diagnoze. 12 ed. Argentīna Panamericana S.A Redaktors.
5. BD laboratorijas Trypticase I am Agar. 2014. Pieejams: .bd.com