Agara asins pamats, lietošana un sagatavošana



The asins agars tā ir bagātināta cieta vide, diferenciāla, bet ne selektīva. To izmanto daudzu mikroorganismu daudzveidības atjaunošanai un augšanai no klīniskajiem paraugiem vai subkultūrām.

Lai iegūtu vairumu klīnisko paraugu, kas saņemti laboratorijā, jāiekļauj klasiskais asins agars; izņemot izkārnījumu paraugus, ja tas nav lietderīgi, ja vien tas nav sagatavots ar noteiktām izmaiņām.

Šī barotne pamatā sastāv no bagātināta bāzes agara un 5% asins. Agara bāze var atšķirties atkarībā no vajadzībām, bet galvenokārt sastāv no peptoniem, aminoskābēm, vitamīniem, gaļas ekstrakta, nātrija hlorīda, agara,.

Kas attiecas uz asinīm, tas parasti ir saistīts ar bioteriju, lai iegūtu asinis no dzīvniekiem, piemēram, aitām, trušiem vai zirgiem. Tomēr tas ne vienmēr ir iespējams, un dažreiz tiek izmantota cilvēka asinis.

Asins agara barotni var pagatavot laboratorijā vai arī to var iegādāties gataviem uzņēmumiem. Šī barotnes sagatavošana ir viena no delikātākajām, bet neviena neveiksme tās sagatavošanā radīs piesārņotu partiju.

Tāpēc ir jāveic visi iespējamie piesardzības pasākumi, un galu galā ir jāveic kvalitātes kontrole, inkubējot 37 ° C temperatūrā 1 plāksnīti uz katriem 100 sagatavotajiem..

Indekss

  • 1 Fonds
  • 2 Lietojumi
    • 2.1. Asinsgrupas izvēle
    • 2.2 Bāzes agara tipa izvēle
    • 2.3 Asins agara lietošana saskaņā ar tās sagatavošanai izmantoto bāzes barotni
  • 3 Sagatavošana
    • 3.1 Nosveriet un izšķīdiniet
    • 3.2 Sterilizēt
    • 3.3 Asins apkopošana
    • 3.4 Ielej Petri trauciņos
  • 4 Atsauces

Fonds

Jau minēts, ka asins agaram ir raksturīga bagātināta, diferenciāla un neselektīva barotne. Katras no šīm īpašībām pamatne ir paskaidrota turpmāk.

Asins agars ir bagātināts substrāts, jo tā galvenajai piedevai agara bāzē ir 5-10% asins. Abos savienojumos ir daudz barības vielu, un šī īpašība ļauj vairumam kultivējamo baktēriju tajā augt.

Šis pieaugums notiek bez ierobežojumiem; šī iemesla dēļ tā nav selektīva. Tomēr, ja šajā vidē tiek pievienoti savienojumi, kas novērš dažu mikroorganismu augšanu un veicina citu augšanu, tas kļūst selektīvs. Tas ir gadījumā, ja tiek pievienoti dažu veidu antibiotikas vai pretsēnīšu līdzekļi.

Tāpat asins agars ir diferenciāls līdzeklis, jo tas ļauj atšķirt 3 baktēriju veidus: beta-hemolītisku, alfa-hemolītisku un gamma-hemolītisku..

Beta-hemolītiskie līdzekļi ir tie, kas spēj lizēt vai pilnībā izjaukt sarkano asins šūnu veidošanos, veidojot skaidru halo ap kolonijām, tādējādi radot β vai β hemolīzi - hemolīzi un mikroorganismus sauc par ß-hemolītiskiem.

Β-hemolītisko baktēriju piemēri ir Streptococcus pyogenes un Streptococcus agalactiae.

Alfa-hemolītiskie ir tie, kas veic daļēju hemolīzi, kur hemoglobīns oksidējas uz metemoglobīnu, radot zaļganu krāsu ap kolonijām. Šī parādība ir pazīstama kā hemolīze α vai α-hemolīze, un baktērijas ir klasificētas kā α-hemolītiskas.

Α-hemolītisko baktēriju piemērs ir Streptococcus pneumoniae un Streptokoku grupai viridāni.

Visbeidzot, ir baktērijas, ko sauc par gamma-hemolītisku vai ne-hemolītisku. Tie aug uz agara, neradot izmaiņas, kas ir pazīstams kā γ-hemolīze, un mikroorganismi ir γ-hemolītiskie.

Γ-hemolītisko baktēriju piemērs: daži D grupas Streptococcus celmi (Streptococcus bovis un Enterococcus faecalis).

Lietojumi

Asins agara barotne ir viena no visbiežāk lietotajām mikrobioloģijas laboratorijā.

Starp mikroorganismiem, kas spēj augt uz asins agara barotnes, ir: stingra, fakultatīva, mikroaerofīla, anaerobā, grampozitīvā vai gramnegatīvā aerobā baktērija, ātri augošas vai lēni augošas baktērijas.

Pieaug arī dažas baktērijas, kas ir prasīgas vai apgrūtinošas no uztura viedokļa, kā arī sēnītes un raugi. Tāpat ir lietderīgi subkulturēt vai atkārtoti aktivizēt celmus, kas ir ļoti vāji metaboliski.

Tomēr asinsgrupas un bāzes agara izvēle var atšķirties atkarībā no varbūtējā mikroorganisma, kas ir aizdomas par reģenerāciju, un plāksnes (kultūras vai antibiotikas) lietošanu..

Asinsgrupu izvēle

Asinis var būt jērs, trusis, zirgs vai cilvēks.

Ieteicamākais ir jēra asinis ar dažiem izņēmumiem. Piemēram, lai izolētu Haemophilus sugas, kur ieteicamā asinīs ir zirgs vai trusis, jo jēra asinīs ir fermenti, kas inhibē faktoru V.

Vismazāk ieteicams ir cilvēks, tomēr tas ir visizplatītākais, iespējams, tāpēc, ka tas ir vieglākais. 

Asinis jāfibrē, iegūst bez jebkāda veida piedevas un veseliem dzīvniekiem. Cilvēka asins lietošanai jāņem vērā vairāki faktori:

Ja asinis nāk no indivīdiem, kuri cietuši no bakteriālām infekcijām, viņiem būs specifiskas antivielas. Šādos apstākļos dažu baktēriju augšana, iespējams, tiks inhibēta.

Ja tas tiek iegūts no asins bankas, tas satur citrātu un ir iespējams, ka dažas baktērijas neattīstās klātbūtnē. No otras puses, ja asinis nāk no pacientiem, kuri lieto antibiotikas, jutīgu baktēriju augšanu var kavēt..

Un, ja asinis ir no diabēta slimnieka, glikozes pārpalikums traucē hemolīzes modeļu pareizu attīstību.

Bāzes agara tipa izvēle

Bāzes agars, ko izmanto asins agara pagatavošanai, var būt ļoti plašs. To vidū ir: barības vielu agars, smadzeņu sirds infūzijas agars, triptāzes sojas agars, Müeller Hinton agars, Thayer Martin agars, Kolumbijas agars, Brucella agars, Campylobacter agar uc.

Asins agara izmantošana saskaņā ar tās sagatavošanai izmantoto bāzes barotni

Barības vielu agars

Šī bāze ir vismazāk izmantota, jo uz tā aug galvenokārt nevajadzīgas baktērijas, piemēram, zarnās baktērijas, Pseudomonas sp, S. aureus, Bacillus sp, cita starpā. Streptococcus nav ieteicams izolēt.

Sirds smadzeņu infūzijas agars (BHI)

Tas ir viens no visbiežāk izmantotajiem asins agara pamatiem, jo ​​tam ir nepieciešamās barības vielas vairuma baktēriju augšanai, ieskaitot Streptococcus sp un citas prasīgas baktērijas. Lai gan nav lietderīgi novērot hemolīzes paraugus.

Ar šo bāzi parasti lieto jēra asinis.

Var sagatavot arī asins agara variantus, kur pievieno citus savienojumus, lai izolētu noteiktus mikroorganismus. Piemēram, smadzeņu sirds infūzijas agars, kas papildināts ar trušu asinīm, cistīnu un glikozi, kalpo, lai izolētu Francisella tularensis.

Tā kā ar cistīna telurītu ir lietderīgi izolēt Corynebacterium diphteriae. Jūs varat lietot cilvēka vai jēra asinis.

Ar pirmo beta-hemolīzi izskatīsies šaurs halo, bet otrais - daudz plašāks.

Tāpat šī bāze kopā ar bacitracīnu, kukurūzas cieti, zirgu asinīm un citiem bagātināšanas bagātinātājiem (IsoVitaleX) tiek izmantota ģints izolēšanai. Haemophilus sp no elpošanas paraugiem.

Turklāt, ja pievienojat hloramfenikola - gentamicīna vai penicilīna - streptomicīna antibiotiku kombināciju ar zirgu asinīm, tas ir ideāls, lai izolētu prasīgas patogēnās sēnītes, pat ar lielāku atdevi nekā Sabouraud glikozes agars. Tas ir īpaši noderīgi, izolējot Histoplasma capsulatum.

Tryptīvā sojas pupas

Šī bāze ir visvairāk ieteicama labākai hemolīzes modeļa un diagnostisko testu, piemēram, optoquine un bacitracin taksonu, novērošanai. Tas ir klasisks asins agars, kas tiek izmantots regulāri.

Ar šo bāzi jūs varat arī sagatavot īpašu asins agaru Corynebacterium diphteriae, ar tellūra cistīnu un jēra asinis.

Līdzīgi šīs agara kombinācija ar jēra asinīm un kanamicīna-vankomicīnu ir ideāla anaerobu augšanai, īpaši Bacteroides sp.

Agar Müeller Hinton

Šo bāzi, kas papildināta ar asinīm, izmanto, lai veiktu nepieciešamo mikroorganismu antibiotiku, piemēram, Streptococcus sp.

Tas ir noderīgs arī tādu baktēriju izolēšanai kā Legionella pneumophila.

Agar Thayer Martin

Šī barotne ir ideāla kā pamats asins agaram, ja ir aizdomas par Neisseria ģinti Neisseria meningitidis, kopš tā laika N. gonorrhoeae neizaug uz asins agara.

Tas kalpo arī jutīguma testu veikšanai Neisseria meningitidis.

Agar Kolumbija

Šī bāze ir lieliska kuņģa biopsiju paraugu sēšanai, meklējot Helicobacter pylori.

Vidēja viela tiek pagatavota, pievienojot 7% ​​jēra asins, kas defibrēta ar antibiotikām (vankomicīnu, trimetoprimu, amfotericīnu B un cefsulodīnu), lai ierobežotu citu veidu baktēriju augšanu..

Šo pašu pamatu, kas papildināts ar cilvēka vai jēra asinīm, nalidiksīnskābi un kolistīnu, var izmantot izolācijai Gardnerella vaginalis. Tas ir arī ideāls, lai novērtētu pretmikrobu jutību pret tā paša mikroorganisma antibiotikām.

Turklāt to lieto asins agara sagatavošanai anaerobu audzēšanai, pievienojot aminoglikozīdus un vankomicīnu..

Šī bāze ļauj mums pareizi novērot hemolīzes modeļus.

Brucella Agar

Šī barotne, ko izmanto par pamatu asins agaram kopā ar K vitamīna pievienošanu, ir ideāli piemērota anaerobo baktēriju audzēšanai. Šajā gadījumā ieteicams izmantot jēra asinis.

Campylobacter agars

Campylobacter Agar, kas papildināts ar 5% aitu asinīm un 5 antibiotikām (cefalotīnu, amfotericīnu B, trimetoprimu, polimiksīnu B un vankomicīnu), ir barotne, ko izmanto, lai izolētu Campylobacter jejuni izkārnījumos.

Sagatavošana

Katra komerciālā māja uz iepakojuma aizmugures sniedz instrukcijas, kā sagatavot litru barotnes. Attiecīgos aprēķinus var veikt, lai sagatavotu vēlamo daudzumu atbilstoši izvēlētajam bāzes agaram.

Nosver un izšķīdina

Bāzes agars nāk dehidrēts (pulveris), tāpēc tas ir jāizšķīdina destilētā ūdenī, kas noregulēts līdz pH 7,3.

Izvēlētais bāzes agars norādīto daudzumu nosver un izšķīdina attiecīgajā ūdens daudzumā fiolā, pēc tam uzkarsē līdz mērenam siltumam un sajauc ar rotējošām kustībām, līdz viss pulveris ir izšķīdis..

Sterilizējiet

Pēc izšķīdināšanas sterilizē autoklāvā 121 ° C temperatūrā 20 minūtes.

Asins kopums

Atstājot autoklāvu, ļaujiet fiolai atdzist, līdz temperatūra svārstās no 40 līdz 50 ° C; ir temperatūra, ko atbalsta cilvēka āda, un tajā pašā laikā agars vēl nav sacietējis.

Šim nolūkam fols tiek pieskarties ar roku un, ja siltums ir pieļaujams, tā ir ideāla temperatūra, lai pievienotu atbilstošu daudzumu defibrināto asiņu (50 ml uz litru agara). Viegli samaisa, lai homogenizētos.

Asinsgrupas pāreja ir ļoti svarīga, jo, ja to dara, kad barotne ir ļoti karsta, sarkanās asins šūnas izlauzīs un barotne nenovēro hemolīzi.

Ja tas tiek pievienots pārāk auksts, veidojas gabaliņi un vidēja virsma nebūs gluda, lai flauta būtu pareizi.

Ielej Petri trauciņos

Pasniedziet sterilos Petri trauciņos tūlīt pēc asins homogenizācijas. Katrā Petri trauciņā ielej aptuveni 20 ml. Šī procedūra tiek veikta laminārā plūsmas pārsegā vai pie degļa.

Pasniedzot asins agaru Petri traukos, uz plāksnes virsmas nedrīkst palikt gaisa burbuļi. Ja tas notiek, Bunsen degļa liesma tiek ātri pārnesta uz plāksnes, lai tos novērstu..

Plāksnēm ļauj sacietēt un uzglabāt ledusskapī (2-8 ° C), līdz tās tiek izmantotas. Pirms lietojat asins agara plāksnes ir jāturpina (ļaujiet tām ņemt istabas temperatūru).

Sagatavotās plāksnes ilgst aptuveni 1 nedēļu.

Atsauces

  1. Bayona M. Mikrobioloģiskie apstākļi audzēšanai. \ T Helicobacter pylori. Rev Colom Gastroenterol 2013. gads; 28 (2): 94-99
  2. Garsija P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktiskā klīniskā mikrobioloģija. Kadisas Universitāte, 2. izdevums. UCA publikāciju dienests.
  3. "Agara asinis." Vikipēdija, brīvā enciklopēdija. 2018. gada 10. decembris, 14:55 UTC. 27. decembris 2018, 01: 49 en.wikipedia.org.
  4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobioloģiskā diagnoze. 12 ed. Argentīna Panamericana S.A Redaktors.
  5. CEDIVET Laboratory Veterinary Diagnostic Center. Gvatemala Pieejams: trensa.com.
  6.  Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobioloģiskā diagnoze. (5. izdevums). Argentīna, Redakcijas Panamericana S.A..