Kopīgot:
Agar Sabouraud fonds, sagatavošana un izmantošana
The Sabouraud agars, Pazīstams arī kā Sabouraud dekstrozes agars, tas ir ciets barotnes materiāls, kas īpaši bagātināts sēnīšu, piemēram, raugu, pelējuma un dermatofītu, izolēšanai un attīstībai..
Tāpēc mikrobioloģijas laboratorijā šo līdzekļu nav, lai izpētītu patogēnu vai oportūnistisku sēnīšu klātbūtni no klīniskiem vai neklīniskiem paraugiem. Tāpat tas ir arī ideāls filamentu baktēriju, piemēram, Streptomyces un Nocardia, augšanai. Tās lietošana ir ļoti plaša, to var izmantot cilvēku, dzīvnieku, augu un rūpnieciskajā mikoloģijā.
Šo mediju 1896. gadā izveidoja slavens dermatologs Raimond Sabouraud, kurš kļuva par pasaules slaveno galvas ādas slimību speciālistu, ko galvenokārt izraisīja dermatofīti..
Tās izveide bija tik svarīga, ka tā ir izmantota kopš tā laika un tā turpinās šodien, kaut arī ar dažām izmaiņām.
Lai gan tas ir īpašs sēnītēm, šajā vidē baktērijas var augt, tāpēc paraugiem ar jauktu floru ir nepieciešams iekļaut antibiotikas to sagatavošanā un tādējādi kavēt baktēriju floras augšanu, kas var būt.
Antibiotiku izvēli vajadzētu veikt uzmanīgi un ņemot vērā sēnītes veidu, kuru vēlaties atgūt, jo daži ir inhibēti noteiktu vielu klātbūtnē..
Indekss
- 1 Fonds
- 1.1. Visbiežāk lietotās Sabouraud dekstrozes agara kombinācijas ar antibiotikām
- 2 Sagatavošana
- 2.1. Dekstrozes Sabouraud agars
- 2.2 Sabouraud dekstrozes agars (Emmonu modifikācija)
- 2.3 Sabouraud dekstrozes agars (Emmons modifikācija) ar hloramfenikolu
- 2.4. Dekstrozes Sabouraud Emmons agars ar cikloheksimīdu
- 2.5. Dekstrozes Sabouraud agars (Emmons) ar hloramfenikolu un cikloheksimīdu
- 2.6 Citas antibiotikas, kuras var pievienot
- 3 Īpaši apsvērumi
- 4 Kvalitātes kontrole
- 5 Lietojumi
- 5.1. Primārā audzēšana
- 5.2 Sporulācija
- 5.3. Saglabāšana
- 5.4 Mikrokultūras
- 5.5 Cilvēka mikoloģijā
- 5.6 Dzīvnieku mikoloģija
- 5.7 Vides mikoloģija
- 5.8 Rūpnieciskā mikoloģija
- 5.9 Augu mikoloģija
- 6 Atsauces
Fonds
Sabouraud dekstrozes agars ir barotne, kas sākotnējā sastāvā ir vāji selektīva, jo tā skābais pH ir 5,6 ± 0,2, tomēr baktērijas joprojām var attīstīties, galvenokārt ilgstoši inkubējot..
Vidēja viela satur kazeīna peptonu un aizkuņģa dziedzera šķelšanos, kas nodrošina oglekļa un slāpekļa avotu mikroorganismu attīstībai..
Tā satur arī augstu glikozes koncentrāciju, kas darbojas kā enerģijas avots, veicinot sēnīšu augšanu baktērijās. Visi sajaukti ar agar-agaru, kas ir pareiza konsistence.
No otras puses, Sabouraud dekstrozes agars var būt selektīvs, ja tiek pievienotas antibiotikas.
Ar antibiotikām tas ir īpaši noderīgs brūču paraugos, atklātajās čūlas vai jebkuros paraugos, kuros ir aizdomas par lielu baktēriju piesārņojumu..
Visbiežāk lietotās Sabouraud dekstrozes agara kombinācijas ar antibiotikām
-Sabouraud agars ar hloramfenikolu: ideāls raugu un pavedienu sēņu atgūšanai.
-Sabouraud agars ar gentamicīnu un hloramfenikolu: šajā vidē aug gandrīz visas šķiedras sēnītes un raugi un kavē lielu skaitu baktēriju, tostarp Enterobacteria, Pseudomonas un Staphylococcus..
-Sabouraud agars ar cikloheksimīdu: tas ir īpaši noderīgs ādas vai elpceļu paraugiem, ja ir aizdomas par dimorfiskām sēnēm..
Cikloheksimīds jālieto piesardzīgi; Lai gan to lieto, lai kavētu tādu patogēnu vai vides sēnīšu un raugu augšanu, kas var būt paraugā kā piesārņotāji, tas arī kavē dažu sēnīšu, piemēram, sēņu, augšanu. Cryptococcus neoformans, Aspergillus fumigatus, Allescheria boydii, Penicillium sp un citas oportūnistiskās sēnes.
-Sabouraud agars ar hloramfenikolu un cikloheksimīdu: galvenokārt izmanto, lai izolētu dimorfos dermatofītos un sēnītes. Tā trūkums ir tas, ka tas inhibē dažas oportūnistisko sēņu sugas Candida nav albicans, Aspergillus, Zygomycetes vai C. neoformans.
-Sabouraud agars ar hloramfenikolu, streptomicīnu, penicilīnu G un cikloheksimīdu: tas ir ideāli piemērots paraugiem, kas ir ļoti inficēti ar baktērijām un saprofītiskajām sēnēm, bet ir trūkums, ka tas kavē augšanu. Actinomyces un Nocardias, papildus iepriekš minētajām oportūnistiskajām sēnēm.
Sagatavošana
Ja jums ir sastāvdaļas atsevišķi, to var sagatavot šādi:
Dekstrozes agars Sabouraud
Nosveriet:
- 40 g dekstrozes
- 10 g peptona
- 15 g agara agara
- Izmēra 1000 ml destilēta ūdens
Visas sastāvdaļas sajauc, pH tiek noregulēts līdz 5.6. Izšķīdina šķīdinātājus, vārot, izplata 20 ml barotnes caurulēs ar 25 x 150 mm, bez atlokiem un vēlams ar kokvilnas topu.
Var izmantot arī citus izmēru izmērus atkarībā no pieejamības.
Tie tiek autoklāvēti 10 minūtes spiediena atmosfērā (121 ° C). Nepārsniedziet autoklāvēšanas laiku. Izejot no autoklāvas, caurules noliek ar balstu, līdz tās sacietē flautas virsotnē..
Vēl viens veids ir izšķīdināt sastāvdaļas, sildot, līdz tas vārās. Tajā pašā autoklāvā 10 minūtes un pēc tam izšķīdiniet 20 ml Petri trauciņos.
Ja ir pieejama Sabouraud dekstrozes agara barotne, kurā jau ir visas sastāvdaļas, mēs nosveram tirdzniecības namā norādīto daudzumu uz vienu litru ūdens. Pārējie posmi ir tādi paši, kā aprakstīts iepriekš.
Dekstrozes agar Sabouraud (Emmonu pārveidošana)
Nosveriet:
- 20 g dekstrozes
- 10 g peptona
- 17 g agara agara
- Izmēra 1000 ml destilēta ūdens
Visas sastāvdaļas sajauc, pH tiek noregulēts līdz 6.9. Turpiniet rīkoties tāpat kā iepriekšējā gadījumā.
Ir komerciālas mājas, kas piedāvā mediju ar visām sastāvdaļām. Šādā gadījumā nosveriet un sagatavojiet, kā aprakstīts ieliktnī.
Sabouraud dekstrozes agars (Emmons modifikācija) ar hloramfenikolu
Hloramfenikola izejas šķīdums
- Nosver 500 mg hloramfenikola bāzes
- Izmēra 100 ml 95% etanola
- Sajauc
Sabouraud dekstrozes agara barotne (Emmons) tiek pagatavota, kā aprakstīts iepriekš, un papildus katram barotnes litram pievieno 10 ml hloramfenikola izejas šķīduma pirms autoklāvēšanas..
Dekstrozes agars Sabouraud Emmons ar cikloheksimīdu
Cikloheksimīda izejas šķīdums
- Nosver 5 g cikloheksimīda
- Izmēra 100 ml acetona
- Sajauc
Sabouraud dekstrozes agara barotne (Emmons) tiek pagatavota, kā aprakstīts iepriekš, un papildus katram barotnes litram pirms autoklāvēšanas pievieno 10 ml cikloheksimīda izejas šķīduma..
Sabouraud dekstrozes agars (Emmons) ar hloramfenikolu un cikloheksimīdu
Sabouraud dekstrozes agara barotne (Emmons) tiek pagatavota, kā aprakstīts iepriekš, un papildus katram litram barotnes pievieno 10 ml hloramfenikola izejas šķīduma un 10 ml cikloheksimīda izejas šķīduma pirms autoklāvēšanas..
Citas antibiotikas, kuras var pievienot
20 000 līdz 60 000 vienības penicilīna uz litru barotnes.
30 mg streptomicīna uz litru barotnes.
Abi ir iekļaujami pēc vidējas autoklāvēšanas, nedaudz atdzesēti (50-55 ° C).
0,04 g neomicīna uz litru barotnes.
0,04 g gentamicīna uz litru barotnes.
Īpaši apsvērumi
Lai izvairītos no sporu dispersijas un ieelpošanas, priekšroka dodama drošībai, lai Sabouraud dekstrozes agaru stādītu ķīļu formas caurulēs (slīpās flautas virsotnē)..
Ir svarīgi, lai caurules ar Sabouraud agaru pārklātu ar kokvilnu, nevis ar skrūvējamu vāciņu, jo ir pierādīts, ka semianaerobie apstākļi dažos celmos kavē sporu veidošanos. Coccidioides immitis. Turklāt vairums sēņu ir aerobas.
Ja izmantojat skrūvējamu vāciņu, nelietojiet to cieši.
Kvalitātes kontrole
Sagatavotajiem plašsaziņas līdzekļiem jābūt kvalitātes kontrolei, lai pārbaudītu to pareizu darbību. Šim nolūkam sēj dažus kontroles celmus.
Sabouraud dekstrozes agaru ar hloramfenikola ATCC celmiem var izmantot. Candida albicans, kuriem ir jābūt izcilai izaugsmei. Cita plāksne ir inokulēta ar celmiem no Escherichia coli, jābūt pilnīgi bloķētam.
Inkubē nenoteiktu plāksni, kurā nedrīkst augt mikroorganismi.
Sabouraud dekstrozes agaru ar hloramfenikolu un cikloheksimīdu var izmantot Trichophyton mentagrophytes, jāattīsta labi. Vēl viena plāksne ir inokulēta ar celmu Aspergillus flavus, izaugsmei vai izaugsmei nav jābūt. Turklāt, lai parādītu tā sterilitāti, inkubē nenoteiktu plāksni.
Sabouraud dekstrozes agaram ar cikloheksimīdu, celmu celmi. \ T Candida albicans, Trichophyton rubrum o Microsporum canis, kas būtu labs izaugsme.
Tāpat arī celms Aspergillus flavus, nepietiekams pieaugums vai nav izaugsmes. Visbeidzot, sterilizācijas kontrolei inkubējiet neapstrādātu plati.
Lietojumi
Primārā audzēšana
Klasiskais Sabouraud dekstrozes agars satur 4 gramus dekstrozes un ir lielisks kā primārais izolācijas līdzeklis, jo tas parāda katras sēnītes raksturīgo morfoloģiju..
Tas ir arī lieliski piemērots pigmentu ražošanas demonstrēšanai. Tomēr tas nav vispiemērotākais līdzeklis sporulācijas novērošanai.
Tāpat nav ieteicams augt Blastomyces dermatitidis, kuru kavē glikozes augstā koncentrācija.
No otras puses, audzēšanai ir jāpatur prātā daži apsvērumi.
Dažas sēnes labāk attīstās istabas temperatūrā, piemēram, pelējuma, citas veiksmīgi attīstās 37 ° C temperatūrā, tāpat kā daži raugi, un citi var attīstīties abās temperatūrās (dimorfās sēnītes).
Šā iemesla dēļ dažreiz ir nepieciešams izmantot vairākus Sabouraud agara plāksnes vienai un tai pašai paraugam, jo tie bieži tiek iestādīti divos eksemplāros, lai inkubētu vienu plati istabas temperatūrā un citu plati 37 ° C temperatūrā..
Piemēram,, Sporothrix schenckii to sēj divās plāksnēs; vienu inkubē istabas temperatūrā, lai iegūtu pelējuma fāzi, un otru inkubē 37 ° C temperatūrā, lai iegūtu rauga līdzīgu fāzi, bet pēdējā ir jāpievieno 5% asins vidē.
Citos gadījumos, tāpat kā mikotomu paraugos, tiek sētas divas Sabouraud agara plāksnes, viena ar hloramfenikolu un otra ar cikloheksimīdu. Pirmais ļaus augt sēnīšu izcelsmes mikotomu (Eumicetoma) un otru bakteriālas mikotomas izraisītāju, piemēram, aktinomicetomas..
Sporulācija
Emmons modificētais dekstrozes Sabouraud agars satur 2 gramus dekstrozes un to lieto ne tikai izolācijai, bet arī sēnīšu sporulācijai un saglabāšanai..
Šajā vidē, ja jūs varat atgūt celmus Blastomyces dermatitidis.
Saglabāšana
Sēnīšu kultūru saglabāšanai var uzglabāt ledusskapī (2-8 ° C). Uzglabāšanas laiks var būt no 2 līdz 8 nedēļām. Pēc šī laika tie jāapstrādā, lai atkārtotu procesu.
Dažas sēnītes vislabāk uztur istabas temperatūrā, piemēram, Epidermophyton foccosum, Trichophyton schoenleinnii, T. violaceum un Microsporum audounii.
Celmu uzturēšanu var pagarināt, lai izvairītos no pleomorfisma, ja dekstroze ir pilnībā noņemta no agara un ja agara daudzums vidē ir samazināts, lai izvairītos no sausuma..
Mikrokultūras
Dažu pavedienu sēņu identificēšanai ir nepieciešams veikt mikrokultūras, izmantojot Sabouraud agaru vai citus īpašus līdzekļus, lai novērotu seksuālās un neksuālās reprodukcijas struktūras..
Cilvēka mikoloģijā
To lieto galvenokārt sēnīšu slimību, īpaši to, kas ietekmē ādu un tā stiprinājumus (matus un nagus), diagnosticēšanai..
Paraugi var būt sekrēcijas, eksudāti, āda, mati, nagi, krēpas, CSF vai urīns. Bieži izolētie patogēni ir dermatofīti, sēnītes, kas izraisa zemādas un sistēmiskas sēnīšu infekcijas.
Dzīvnieku mikoloģija
Dzīvniekus bieži ietekmē sēnīšu infekcijas, tāpēc Sabouraud agars ir tikpat noderīgs dzīvniekiem kā cilvēka mikoloģijā..
Piemēram, dermatofīti bieži var ietekmēt dzīvniekus. Tā tas ir Microsporum canis var distortum, kas bieži inficē suņus, kaķus, zirgus, cūkas un pērtiķus. Tāpat, Microsporum gypseum inficē suņus, kaķus un liellopus.
Putnus, piemēram, cāļus, gailis un cāļus, ietekmē Microsporum gallinae.
Citas sēnes, piemēram, Zymonema farciminosum, tie ir arī slimību cēlonis dzīvniekiem, galvenokārt zirgiem, mūļiem un ēzeļiem, kas izraisa būtisku iekaisumu limfātiskos traukos..
Sporothrix schenkii un Histoplasma capsulatum ietekmē mājas un cilvēku dzīvniekus.
Vides mikoloģija
Daudzās patogēnās vai oportūnistiskās sēnītes jebkurā laikā var koncentrēt noteiktā vidē, īpaši klīniku un slimnīcu operatīvajās telpās un intensīvās terapijas vienībās. Tāpēc ir nepieciešams tos kontrolēt.
Citas neaizsargātas vietas ir bibliotēkas un vecās ēkas, kuras var ietekmēt vides sēnīšu koncentrācija.
Vides pētījumos sēņu izolēšanai izmanto Sabouraud dekstrozes agaru.
Rūpnieciskā mikoloģija
Saburaudas dekstrozes agars nav pieejams, pētot sēnīšu piesārņotājus kosmētikas, pārtikas, dzērienu, ādas, tekstilizstrādājumu ražošanā, cita starpā.
Augu mikoloģija
Augi arī cieš no sēnīšu izraisītām slimībām, kas skar dažādas augu daļas, kas var pat izbeigt ražu, izraisot lielus zaudējumus lauksaimniecībā..
Atsauces
- Cuenca M, Gadea I, Martín E, Pemán J, Pontón J, Rodríguez (2006). Mikozioloģiskā diagnoze un jutīguma pētījumi pret pretsēnīšu līdzekļiem. Spānijas Infekcijas slimību un klīniskās mikrobioloģijas biedrības ieteikumi. Pieejams vietnē: coesant-seimc.org
- ValteK laboratorija. (2009). Sabouraud dekstrozes agars ar cikloheksimīdu. Pieejams: andinamedica.com.
- Navarro O. (2013). Veterinārā mikoloģija. Nacionālā lauksaimniecības universitāte. Nikaragva.
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott mikrobioloģiskā diagnoze. 12 ed. Argentīna Panamericana S.A Redaktors
- Casas-Rincon G. Vispārējā mikoloģija. 1994. 2. Ed. Universidad Central de Venezuela, bibliotēkas izdevumi. Venecuēla, Karakasa.