Papa dekstrozes pamats, sagatavošana un izmantošana

The papa dekstrozes agars tā ir cieta, neselektīva barojoša barotne. Tā var audzēt baktēriju un sēnīšu sugas, taču tās lietošana ir īpaši paredzēta šķiedru sēnīšu un raugu izolēšanai. To sauc arī par PDA mediju angļu valodā ar kartupeļu dekstrozes agaru.

Tas ir īpaši noderīgs fitopatogēno sēņu, tas ir, augu, kas ietekmē augus, izolēšanai. Lai audzētu paraugus no inficētiem augiem, var izmantot citus barotnes, piemēram, Sabouraud agaru vai malta agaru, tomēr parastai lietošanai ir ieteicams izmantot kartupeļu dekstrozes agaru..

To izmanto arī sēnīšu koloniju skaitīšanai kosmētikas, farmācijas un dažu piena produktu paraugos. Tāpat ir lietderīgi veikt ādas skrāpju paraugu dermatofītu meklēšanu, kas šajā vidē aug ļoti labi, attīstot raksturīgos pigmentus..

Kartupeļu dekstrozes barotne ir ļoti vienkārša un viegli sagatavojama laboratorijā. Kā norādīts nosaukums, tas satur kartupeļu infūziju, dekstrozi un agara agaru. Papildu inhibitorus var pievienot, lai novērstu baktēriju augšanu un palielinātu selektivitāti sēnīšu sugām.

Indekss

• 1 Fonds
• 2 Sagatavošana
  • 2.1. Pašdarināts (nekomerciāls) papa dekstrozes agara sagatavošana
  • 2.2. Papa dekstrozes agara komerciāla sagatavošana
• 3 Lietojumi
  • 3.1. Augu paraugu stādīšanas process uz kartupeļu dekstrozes agara
  • 3.2. Procedūra ādas, matu vai nagu skalu paraugu stādīšanai uz papa dekstrozes agara
  • 3.3 Identifikācijas procedūra
  • 3.4 Koloniju skaits
  • 3.5 Sēnīšu celmu uzturēšana
• 4 Kvalitātes kontrole
• 5 Atsauces

Fonds

Papa dekstrozes agars ir barotne, kas nodrošina nepieciešamos barības elementus pavedienu sēnīšu un raugu attīstībai..

Kartupeļu infūzijas kombinācija ar glikozi nodrošina perfektu enerģijas avotu, lai nodrošinātu pietiekamu sēnīšu augšanu. Kamēr agars ir tāds, kas nodrošina konsekvenci ar vidi.

Tikai barotne neinhibē baktēriju augšanu, tāpēc tā ir neselektīva barotne. Lai padarītu to selektīvu, jums ir nepieciešams pievienot inhibitorus, piemēram, vīnskābi vai antibiotikas.

Sagatavošana

-Pašdarināts (nekomerciāls) kartupeļu dekstrozes agara preparāts

Petri trauciņi

Tas ir sagatavots šādā veidā:

Pirmkārt, kartupeļi ir ļoti labi nomazgāti, noņemot netīrumus. Tos sagriež plānās šķēlītēs ar visu un čaumalu. Nosver 200 g kartupeļu un uz pusstundu liek vārīt litrā destilēta ūdens.

Pēc tam, kad laiks ir filtrēts vai saspiež visu preparātu caur marli.

Iegūto šķidrumu pabeidz ar destilētu ūdeni, līdz tas sasniedz vienu litru. Infūzijai pievieno 20 g agara agara un 20 g dekstrozes, labi samaisa un autoklavē 121 ° C temperatūrā 15 minūšu spiediena 15 minūtes..

Ļauj atdzist līdz 50 ° C un pasniedz sterilos Petri trauciņos. Sagatavotās plāksnes uzglabā ledusskapī.

Ķīļi

Jūs varat arī sagatavot papa dekstrozes agara ķīļus.

Šajā gadījumā pirms sterilizēšanas autoklāvā, 12 līdz 15 ml barotnes ievieto mēģenēs, tad tās tiek autoklāvētas un atstājot tās atrodas uz īpašiem balstiem, līdz tie tiek sacietēti. Saglabājiet ledusskapī.

Vidēja pH ir 5,6 ± 0,2, tomēr dažas laboratorijas pievieno 10% vīnskābi, lai pazeminātu pH līdz 3,1 ± 0,1, lai inhibētu baktēriju augšanu..

Šajā pašā nozīmē citas laboratorijas dod priekšroku antibiotiku pievienošanai, lai padarītu to selektīvu sēņu audzēšanai un novērstu baktēriju attīstību..

-Kartupeļu dekstrozes agara komerciāla sagatavošana

Nosver 39 g komerciāli pieejamā dehidrētā barotne un izšķīdina vienā litrā destilēta ūdens. Atstājiet mierā 5 minūtes.

Maisījumu silda, bieži maisot, līdz tā pilnīga izšķīdināšana. Pēc tam sterilizē autoklāvā 121 ° C temperatūrā 15 minūtes.

Var pagatavot plāksnes vai ķīļus. Turpināt, kā aprakstīts iepriekš.

PH saglabājas pie 5,6 ± 0,2. Ja ir vēlams pH 3,1, pirms pasniegšanas uz šķīvēm pievieno 14 ml 20% sterila vīnskābes..

Neapstrādātas barotnes krāsa ir bēša un sagatavota gaiši dzintara krāsā ar nedaudz duļķainu vai opalescējošu izskatu.

Lietojumi

Process augu paraugu stādīšanai kartupeļu dekstrozes agarā

-Lapām ar plankumiem

Lapas sagriež gabalos.

50cc glāzē ar 50% spirtu ievietojiet lapu gabalus (krāsotus un veselus), lai dezinficētu virsmu 20 līdz 30 sekundes. Izvelciet spirtu un pievienojiet 20% nātrija hipohlorītu 40 līdz 50 sekundes, ja tās ir plānas, un palieliniet laiku līdz 80 sekundēm, ja tā ir miza un baļķi.

Izvelciet nātrija hipohlorītu un ar sterilu klipu izņem dezinficētos gabalus un novietojiet tos uz barotnes virsmas (ne vairāk kā 10 gab.). Ievietojiet datumu un inkubējiet no 20 līdz 30 ° C.

-Augļiem un bumbuļiem

Ja auglis ir mīksts, atveriet sēnītes skartos augļus un paņemiet gabalus ar sterilu skalpeli, gan slimo daļu, gan veselo daļu, un novietojiet to uz agara virsmas..

Ja augļi ir citrusu, piemēram, citronu vai apelsīnu, jums vajadzētu atvērt un sēt savas sēklas.

Kad tiek ietekmēta augļu virsma un sporas, vislabāk ir izmantot rīvētu metodi uz plāksnes; tas nozīmē, ka sporas pieskaras ar lāpstiņu sterilizētā un atdzesētā veidā, pēc tam veicot cigarešu iesēju 2 līdz 3 reizes uz agara.

-Graudiem

Tos dezinficē, kā aprakstīts lapās, un pēc tam novieto uz agara.

-Zari un stublāji

Veikta mizas skrāpēšana, un pēc tam tiek paņemti veselas un slimo daļas gabali un sēti tieši uz agara..

Sējplāksnes inkubē aerobiozi 20-30 ° C temperatūrā 72 stundas.

Ādas, matu vai nagu skalu paraugu stādīšanas process uz papa dekstrozes agara

Paraugu ņem, izmantojot skalpeles asmeni Nr. 11, vai nu, lai samazinātu skartos matus, ādas pārslas vai nagus, meklējot dermatofītus. Pirms parauga ņemšanas laukums ir jādezinficē ar 70% alkoholu.

-Ādas paraugs

Scaly bojājumiem bojājuma malai jābūt nokasītai, jo ir lielāka iespēja atrast sēnīti.

Eksudatīvos bojājumos paraugu ņem ar sausu vai mitru tamponu. Nekavējoties sēj kartupeļu dekstrozes agaru vai Sabouraud agaru. Izvairieties no transporta līdzekļiem.

Vēl viena paraugu ņemšanas metode ir Mariat un Adan Campos paklāju laukuma tehnika. Šajā gadījumā skarto zonu piecas reizes paberzē ar sterilās vilnas gabalu tālākai audzēšanai.

Paraugu var ievietot tieši barotnē.

-Matu paraugs

Atkarībā no patoloģijas skarto daļu var sagriezt vai nojaukt saknes. Paraugu ievieto barotnē.

-Muguras paraugs

Jūs varat nokasīt vai sagriezt noteiktu skarto nagu daļu. Tas būs atkarīgs no traumas veida.

Paraugu sagriež 1 mm gabalos pirms sēšanas, lai palielinātu sēnītes saskari ar barotni.

Identifikācijas procedūra

Plāksnē iegūtās kolonijas izolē caurulēs, kurās ir kartupeļu dekstrozes agars, lai veiktu koloniju makroskopisko izpēti (izskats, krāsa, konsistence, attīstības pakāpe)..

Mikroskopisko pētījumu (struktūru un to veidojumu novērošana) var veikt ar mikrokultūru palīdzību vai tiešu novērošanu zem mikroskopa starp laminātu un lameli..

Koloniju skaits

Šo barotni var izmantot arī sēņu un raugu slodzes noteikšanai augu paraugos, pārtikā, kosmētikā vai medikamentos. Šim nolūkam izmanto papa dekstrozes agaru, kas papildināts ar antibiotikām, piemēram: (hloramfenikolu, hlorotetraciklīnu vai abus).

Ielej 1 ml parauga - vēlams atšķaidītu - sterilā un tukšā Petri trauciņā, pēc tam izkausē kartupeļu dekstrozes agara spraudni un ļaujiet atdzist līdz 45 ° C. Ielej Petri trauciņu un pagrieziet, līdz tas ir homogenizēts. Atstājiet to miera stāvoklī, līdz tas sacietē.

Inkubē aerobiozi 20-25 ° C temperatūrā (pelējuma) vai 30-32 ° C (rauga) 5 līdz 7 dienas vai ilgāk, atkarībā no meklējamā sēņu veida un parauga veida. Lai inkubētu abos temperatūras diapazonos, var izmantot divas plates.

Sēnīšu celmu uzturēšana

Papa dekstrozes agaru var izmantot, lai saglabātu dzīvotspējīgus sēnīšu celmus jau vairākus gadus.

Lai to izdarītu, sēne tiek kultivēta papa dekstrozes agara ķīļi un pēc tam, kad sēne tiek audzēta, tā ir pārklāta ar minerāleļļu. Eļļu sterilizē autoklāvā 45 minūtes, un tās viskozitāte ir aptuveni 300 līdz 330 Saybolt. Eļļai vajadzētu pārsniegt konusveida galu ar 1 līdz 2 cm.

Kvalitātes kontrole

No katras sagatavotās partijas jāņem viena vai divas plāksnes un inkubē 25 ° C temperatūrā 48 stundas vai 20 ° C temperatūrā 96 stundas. Laba sterilitātes kontrole ir tāda, kurā koloniju nav.

Zināmi vai sertificēti kontroles celmi, piemēram:

Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763, Candida albicans ATCC 10231, Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533. Visos gadījumos ir sagaidāma laba izaugsme.

Atsauces

1. Laboratories Britania. Papa glikozado agars. 2015. Pieejams: britanialab.com
2. Neogen Laboratories Kartupeļu dekstrozes agars. Pieejams: foodsafety.neogen.com
3. Insumolab laboratorija Kartupeļu dekstrozes agars. Pieejams: insumolab.cl
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobioloģiskā diagnoze. 12 ed. Redakcijas Panamericana S.A. Argentīna.
5. Casas-Rincon G. Vispārējā mikoloģija. 1994. 2. Ed. Universidad Central de Venezuela, bibliotēkas izdevumi. Venecuēla, Karakasa.
6. Aceituno M. Novērtējums par mikrobioloģisko kvalitāti acu ēnā, kompakts pulveris valsts ražošanas laboratorijā, saskaņā ar Pharmacopeia Usp atsauces metodi 2005. Promocijas darbs, lai iegūtu tiesības uz farmaceitisko ķīmiķi. San Carlos de Guatemala universitāte.
7. Cuétara M. Virsmas paraugu apstrāde. Iberoamerican Mycology Magazine. 2007. gads; pp. 1-12