Barojošs agara pamats, sagatavošana un izmantošana



The barojošs agars tā ir neselektīva un nediferencēta cieta kultūras barotne. Šajā vidē augt visu veidu baktērijas, kas nav prasīgas no uztura viedokļa.

Tas ir vienkāršs līdzeklis, un, neraugoties uz tās nosaukumu, tas satur mazāku uzturvērtību salīdzinājumā ar citiem līdzīgiem medijiem, piemēram, smadzeņu sirds infūzijas agaru vai triptāzes sojas agaru..

Tās lietderība laboratorijā ir ļoti atšķirīga. Galvenokārt tiek izmantota sugu subkultūrai, celmu uzturēšanai, koloniju skaitīšanai, kā pamats asins agara sagatavošanai, cita starpā.

Tāpat, ņemot vērā gaišās bēšās krāsas, dažu baktēriju celmu radīto pigmentu, piemēram, zaļgana pigmenta, \ t Pseudomonas aeruginosa, ķieģeļu sarkanais pigments, ko ražo Serratia marcescens istabas temperatūrā - zelta dzeltenais pigments Staphylococcus aureus, cita starpā.

Turklāt tas ir viens no ekonomiskākajiem augšanas līdzekļiem, kas atrodami tirgū.

Indekss

  • 1 Fonds
  • 2 Sastāvs
  • 3 Sagatavošana
  • 4 Lietojumi
    • 4.1 Par pamatu asins agara sagatavošanai
    • 4.2 Stimulēt sporas veidojošās baktērijas
    • 4.3. Celmu apkope
    • 4.4 Koloniju skaitīšana
    • 4.5. Diagnostikas testu veikšana
    • 4.6. Mezofilās aerobās atpūtas sāls ūdeņu atgūšana (pludmales)
  • 5 Atsauces

Fonds

Kā jau minēts, tas ir ļoti vienkāršs līdzeklis, kas balstīts uz barības vielu nodrošināšanu baktēriju augšanai bez ierobežojumiem un bez sarežģītām reakcijām, lai interpretētu.

Tā kā vide ir caurspīdīga, tā ir ideāli piemērota koloniju skaitīšanai, izmantojot sēšanas paņēmienu.

Sastāvs

Tas galvenokārt sastāv no gaļas ekstrakta vai rauga ekstrakta, peptoniem vai aizkuņģa dziedzera želatīna, agara agara, nātrija hlorīda un destilēta ūdens..

Gaļas vai rauga un peptonu ekstrakts ir oglekļa un būtisko minerālu (slāpeklis, fosfors un sērs) avoti, kurus baktērijas izmantos kā enerģijas avotu un augšanas faktorus..

Tāpat agara agars ir visu cieto audzēšanas substrātu pamats, aizstājot želatīnu, kas bija pirmais bāzes savienojums, ko izmantoja Robert Koch, lai nodrošinātu medikamenta cieto konsistenci..

Agars ir polisaharīds, kas sastāv no galaktozes, galaktomannāna, agarozes un agaropektīna. Tas iestājas 40 ° C temperatūrā un kūst 100 ° C temperatūrā.

Savukārt nātrija hlorīds nodrošina barotni ar baktēriju attīstībai nepieciešamo osmolaritāti.

Visbeidzot, ūdens kalpo liofilizētu savienojumu hidratēšanai un izšķīdināšanai. Jāizmanto destilēts ūdens, kas pielāgots neitrālam pH. Krāna ūdeni nevajadzētu lietot, jo tas satur kalciju un magniju, kas var reaģēt ar fosfātiem vidē un veido nešķīstošus sāļus.

Sagatavošana

Vienam litram barojoša agara jānosver 31 g dehidratēta barotne. Tas tiek ievietots fiolā un izšķīdināts litrā destilēta ūdens. Pēc 5 minūšu atpūtas, sakarsējiet siltuma avotu un nepārtraukti samaisiet, līdz tas vārās 1 vai 2 minūtes.

Pēc tam ievietojiet fiolu autoklāvā un sterilizējiet 121 ° C temperatūrā 20 minūtes.

Laika beigās tas tiek izņemts no autoklāvas un tiek pasniegts sterilos Petri trauciņos, izmantojot lamināru plūsmas pārsegu vai Bunsen degli..

Ja Petri trauciņi ir vienreizlietojami (plastmasa), barotne jāsadala, kad agars ir aptuveni 50 ° C temperatūrā, lai nepieļautu to deformāciju ar pārmērīgu karstumu.

Ļaujiet sacietēt un uzglabāt plāksnītes turētājā apgrieztā un ledusskapī 2-8 ° C temperatūrā līdz lietošanai.

Pirms sēšanas plāksnes ir jākaršina. Barojošas agara plāksnes nedrīkst lietot, ja tās ir piesārņotas vai dehidrētas.

Sagatavotās barotnes pH jākoriģē līdz 7,3 ± 0,2.

Lietojumi

Tas ir vienkāršākais barotnes veids, ko izmanto mikrobioloģijas laboratorijā. Tās sastāvs ir lieliski piemērots nevēlamu baktēriju augšanai.

Tās galvenie lietojumi ir izskaidroti turpmāk:

Kā pamats asins agara pagatavošanai

Šo barotni dažreiz izmanto kā pamatu asins agara pagatavošanai, tomēr tā nav visbiežāk izmantotā bāze.

Veicināt sporas veidojošo baktēriju sporulāciju

Šī barotne ir īpaši noderīga, lai stimulētu sporas veidojošo baktēriju, piemēram, Bacillus sp.

Lai to izdarītu, ģints celms tiek iesēts Bacillus un inkubē 24 stundas 37 ° C temperatūrā aerobioze. Kad kolonijas tiek audzētas, plāksne tiek pakļauta temperatūrai, ti, plīts temperatūra tiek paaugstināta līdz 44 ° C un atstāta vēl 24 stundas vai arī tiek ievadīta ledusskapī 24 stundas..

Kultūras beigās kultūraugi tiek paplašināti un iekrāsoti ar Grama traipu vai Shaeffer-Fulton sporu traipiem. Tajos tiks novērotas bacīles ar endosporām (sporas bacillus iekšpusē) un eksosporas (sporas ārpus bacillus)..

Celmu uzturēšana

Dažām pētniecības laboratorijām vai universitāšu mācību laboratorijām pēc iespējas ilgāk ir jāsaglabā dzīvotspējīgas klīniski nozīmīgas baktērijas, lai izmantotu baktēriju banku (bakterioteka) pētnieciskajam darbam vai mācību prakses sagatavošanai. Studenti iemācīsies manipulēt un identificēt šos mikroorganismus.

Šim nolūkam var izmantot barojošu agaru, kā arī smadzeņu sirds infūzijas agaru. Sagatavo agaru, ielej bakelīta apvalkotās caurulēs un noliek uz pamatnes tā, lai agars sacietētu, veidojot bloku apakšā un slīpumu uz virsmas (flautas pīķa).

Katra caurule ir marķēta, ievietojot stādāmo baktēriju nosaukumu un datumu. Katrā no baktērijām stādīs un inkubē 24 stundas, kad kolonijas tiek audzētas, caurules uzglabā istabas temperatūrā..

Bakterioteka ir jāatjauno no 1 līdz 3 mēnešiem, lai izvairītos no vides piesārņojuma un dehidratācijas, kā arī baktēriju nāves..

Tādā veidā var uzturēt tikai nevēlamas baktērijas.

Koloniju skaitīšana

Lai gan pastāv specializēti līdzekļi koloniju skaitīšanai, piemēram, standarta skaitīšanas agars, šim nolūkam var izmantot barojošu agaru, vai nu sējot uz virsmas ar drigalski lāpstiņu, vai ar dziļumu. Tāpēc tas ir ļoti noderīgs pārtikas un ūdens mikrobioloģiskajā analīzē.

Diagnostikas testu izpilde

Tā kā tas ir nesējs, kas nesatur asinis vai kādu citu piedevu, ir ideāli ņemt šajā vidē audzētas kolonijas, lai veiktu katalāzes testu..

Tāpat, ņemot vērā tās skaidro krāsu, ir norādīts, ka oksidāzes testi jāveic tieši uz sēklas agara laukuma, bez traucējumiem..

Mezofilās aerobās atpūtas ūdens atgūšana (pludmales)

Barības vielu agars, kas sagatavots ar 10% jūras ūdeni, ir noderīgs mezofīlo aerobu novērtēšanai pludmales ūdeņos.

Šādā veidā mēs varam novērtēt reālo piesārņojumu, kāds ir ūdeņiem ar šiem mikroorganismiem, jo ​​šāda veida paraugos rezultāti tiek pārklāti, izmantojot parastā veidā sagatavotu barotni.

To pierādīja Cortez et al. 2013. gadā pētījuma dokumentā.

Tas ir izskaidrojams sakarā ar pēkšņu baktēriju maiņu, kas notiek, pārejot no hiper sāls vides uz zemu sāls vidi, tādēļ mikroorganismi nonāk letarģijas stāvoklī, kurā tie ir dzīvotspējīgi, bet nav kultivējami.

Atsauces

  1. "Uzturīgs agars". Vikipēdija, brīvā enciklopēdija. 13 Sep 2016, 20:33 UTC. 2018. gada 29. decembris, 21:04 en.wikipedia.org
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobioloģiskā diagnoze. 12 ed. Argentīna Panamericana S.A Redaktors.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobioloģiskā diagnoze. (5. izdevums). Argentīna, Redakcijas Panamericana S.A..
  4. Cortez J, Ruiz Y, Medina L, Valbuena O. Ar jūras ūdeni sagatavotas barotnes ietekme uz veselības rādītājiem jūras ūdeņos Chichiriviche spa, Falcón stāvoklis, Venecuēla. Rev Soc Come Microbiol 2013. gads; 33: 122-128
  5. Paredes V, Dias V, Silva de Almeida M un Cardoso M. Ūdens mikrobioloģiskā kvalitāte dozēšanai, Suinos.Cient.Agro.Amaz. 2013. gads; 1 (2): 42-49.
  6. Garsija P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktiskā klīniskā mikrobioloģija. Kadisas Universitāte, 2. izdevums. UCA publikāciju dienests.