Agar Müeller Hinton pamats, sagatavošana un izmantošana



The Müeller Hinton agars Tā ir cieta, neselektīva barības viela, kas sastāv no gaļas infūzijas, kazeīna skābes peptona, cietes, agara un destilēta ūdens. Šī barotne ļauj lieliski attīstīties visstraujāk augošajām baktērijām.

Sākotnēji to radīja Džons Hovards Mīrers un Džeina Hintons, lai izolētu uztura ziņā prasīgas baktērijas, piemēram, Neisseria gonorrhoeae un Neisseria meningitidis. Tomēr, pateicoties savām īpašībām, tas izrādījās ideāls pētījumam par jutību pret antibiotikām, nodrošinot ticamus un reproducējamus rezultātus..

Šī iemesla dēļ Müeller Hinton agars ir klīniskās un laboratorijas standartu institūta (CLSI) un Eiropas Antimikrobiālās jutības pārbaudes komitejas akceptēta barotne, lai veiktu antibakteriālās jutības testu ar Kirby diska difūzijas metodi. Bauers.

Indekss

  • 1 Fonds
  • 2 Sagatavošana
  • 3 Lietojumi
    • 3.1. Pretmikrobu tehnika
    • 3.2 Disku stratēģiskā izvietošana uz Müeller Hinton agara
  • 4 Kļūdainu rezultātu cēloņi
  • 5 Ierobežojumi
  • 6 Kvalitātes kontrole
  • 7 Atsauces

Fonds

Tā kā tā ir neselektīva barības viela, tā ir lieliska vairuma patogēnu baktēriju augšanai.

No otras puses, tās vienkāršais sastāvs padara vielas viegli izkliedējamas uz to, kas ir būtisks raksturojums jutīguma testam ar diska difūzijas metodi..

Vēl viens no tā raksturlielumiem ir tas, ka tas satur nelielu daudzumu inhibitoru, kas ļauj efektīvi novērtēt sulfonamīdus, trimetoprimu un tetraciklīnus..

Tomēr jāatceras, ka videi ir jāatbilst noteiktiem nosacījumiem, lai nodrošinātu tā pareizu darbību, tostarp:

PH korekcija, agara dziļums un atbilstoša timīna, timidīna, Ca koncentrācija++, Mg++ un Zn++.

Mums arī jāzina, ka metodoloģija ir standartizēta, un tāpēc ir jāizpilda visi parametri, piemēram:

Inokulāta koncentrācija, antibiotiku disku koncentrācija un saglabāšana, atbilstoša diska skaita novietošana uz agara, attālums starp vienu disku un otru, noteiktu antibiotiku izvietošana, atmosfēra, temperatūra un laiks. inkubācija.

Sagatavošana

Nosver 37 g dehidrētā Müeller Hinton barotnes un izšķīdina 1 litrā destilēta ūdens. Apkarsējiet vidi, maisot, lai palīdzētu izšķīdināt. Ļaujiet vārīties 1 minūti.

Autoklāvu sterilizē 121 ° C temperatūrā 15 minūtes. Noņemot no autoklāvas, fiola jāievieto ūdens vannā 50 ° C temperatūrā, lai atdzesētu. Ielejiet 25 līdz 30 ml sterilos Petri traukos, kuru diametrs ir 10 cm.

Plātņu vidējam biezumam jābūt 4 mm (ideāls), pieļaujot diapazonu 3-5 mm.

Ja vēlams sagatavot asins agaru, izmantojot Müeller Hinton agara bāzi, pirms pasniegšanas uz šķīvēm ielej 5% sterilu un defibrētu jēra asinis..

Barotnes galīgajam pH jābūt 7,2 līdz 7,4.

Iegādājieties un uzglabājiet ledusskapī līdz lietošanai. Pirms lietošanas ļaujiet šķīvim ņemt istabas temperatūru.

Sagatavotās barotnes krāsa ir gaiši bēša.

Lietojumi

To lieto, lai veiktu antibiotiku vai antibiotiku jutības testu vairumam patogēnu, kas nav ātri augoši.

Ja agars tiek papildināts ar asinīm, tas kalpo tādu mikroorganismu antibiotikai, kā: Streptococcus pneumoniae, Haemophilus sp, Neisseria meningitidis, cita starpā. To izmanto arī, lai izolētu Legionella pneumophila.

Antibiogrammas tehnika

Pirms veikt antibiotiku, jāsagatavo baktēriju šķīdums, kas ir ekvivalents 1,5 x 108 šūnām.

Lai to izdarītu, no tīrās kultūras ņem 3 līdz 4 kolonijas un suspendē triptāzes sojas buljonā vai Müeller Hinton buljonā, inkubē 2 līdz 6 stundas un koncentrāciju noregulē ar sterilu fizioloģisko šķīdumu, salīdzinot to ar Mac Farland standartu. 0,5%.

Ja tie ir prasīgi mikroorganismi, kolonijas var tikt apturētas tieši, līdz tās sasniedz 0,5% Mac Farland koncentrāciju. Pēc tam Müeller Hinton plāksne tiek apsēta ar salveti, kas piesūcināta ar sagatavoto baktēriju šķīdumu.

Lai to izdarītu, iemērciet tamponu šķīdumā un pēc tam noņemiet lieko šķidrumu, nospiežot pret caurules sienām. Tūlīt pēc tam, kad tampons tiek izvadīts pa visu virsmu, atstājot neskartas vietas, nedaudz pagrieziet plāksni un atkal sēj. Darbība tiek atkārtota vēl 2 reizes.

Ļaujiet nostāvēties 10 minūtes un pēc tam ievietojiet antibiotikas diskus ar sterilu knaibles, atstājot starp tām 24 mm lielu vietu. Pēc katra diska novietošanas uz agara viegli piespiediet katru ar skavu, lai pārliecinātos, ka tās ir labi piestiprinātas.

Pēc procesa plāksne tiek apgriezta un inkubēta 35-37 ° C temperatūrā aerobiozi 16 līdz 18 stundas. Ja tas ir prasīgs mikroorganisms, tas var prasīt mikroaerofiliju un, ja antibiotika satur oksacilīna diski, tas jālasa 24 stundas..

Katra halo diametra mērīšanai izmanto lineālu. Rezultāti jāreģistrē mm. Pēc tam iegūtās vērtības korelē ar griezuma punktu tabulām, kas publicētas pašreizējā CLSI rokasgrāmatā.

Ziņojiet par jutīgu (S), starpproduktu (I) vai izturīgu (R), atkarībā no apstākļiem.

Antibiotikas izvēlas atbilstoši izolētajam mikroorganismam un infekcijas veidam.

Dažreiz jāapsver, ka antibiotiku stratēģiskā izvietošana parāda fenotipiskas rezistences modeļus.

Disku stratēģiskā izvietošana uz Müeller Hinton agara

Enterobaktērijām klavulānskābes disks jānovieto 3. un 4. paaudzes cefalosporīnu priekšā. Olu formas paplašināšanās norāda, ka celms ir paplašināta spektra beta-laktamāzes (ESBL) ražotājs. Tas nozīmē, ka pacientu nedrīkst ārstēt ar cefalosporīnu.

Staphylococcus ir svarīgi ievietot eritromicīna vai azitromicīna disku klindamicīna diska priekšā (D-tests)..

Rezistents halogēns eritromicīnā un klindamicīna halogēna atloksēšana norāda, ka celmam ir inducējama rezistence pret klindamicīnu, celmu (RIC). Tas nozīmē, ka ārstēšana ar klindamicīnu nebūs efektīva.

Lai meklētu inducējamus AMP C celmus Enterobacteriaceae un dažus nefermentējošus gramnegatīvus bacīļus, ceftazidīma, cefoksitīna vai piperacilīna tazobaktāna diski saskaras ar imipenēma disku 27 mm attālumā..

Halo, kas saplacināts vienā no diskiem, kas saskaras ar imipenēmu, norāda uz inducējamu AMP C klātbūtni.

Konstatējoša AMP C meklēšanai kloksacilīna 500 μg disks saskaras ar ceftazidīmu (30 μg) un ar cefotaksimu (30 μg) 25 mm attālumā. Paplašināta halogēna atoms vienā no cefalosporīniem norāda uz pozitivitāti.

Kloksacilīna disku var nomainīt arī ar 9 mm Whatman No. 6 filtrpapīru, kas impregnēts ar fenilborskābi (400 μg) ar 18 mm attālumu. To interpretē tāpat kā iepriekšējo.

Visbeidzot, izpētīt metallo-beta-laktamāžu ražošanu, jo īpaši Pseudomonas aeruginosa, 15 mm attālumā izmanto disku, kas piesūcināts ar 10 μl etilēndiamīntetraetiķskābes (EDTA 750 μg) un tioglikolskābes (SMA 300 μg), kas saskaras ar imipenēmu un meropenēma diskiem..

Tests ir pozitīvs, ja imipenēma vai meropenēma halos tiek paplašināts pret EDTA / SMA disku. Šis rezultāts jāapstiprina ar modificēto Hodge testu.

Šī metode ietver inokulāciju Escherichia coli ATCC 25922 uz Müeller Hinton plāksnes. Imipenēma disku novieto plāksnes centrā un tad no diska tiek veidota flauta uz perifēriju ar celmu. P. aeruginosa aizdomas Jūs varat pārbaudīt līdz pat 4 celmiem vienā šķīvī.

Tests būs pozitīvs, ja apkārtējā stropā ir imipenēma halogēnas izkropļošanas zona.

Kļūdainu rezultātu cēloņi

-Nepietiekami konservētu antibiotiku diski var radīt nepatiesas pretestības. Piemēram, oksacilīna disks ir ļoti jutīgs pret temperatūras izmaiņām.

-Vidējā pH, kas ir zemāks par norādīto (skābi), rada mazākas halogēnvielas aminoglikozīdos un makrolīdos (viltus rezistences risks) un lielākas halots penicilīnā, tetraciklīnā un novobiocīnā (viltus jutīguma risks)..

-Ja pH ir augstāks par norādīto (sārmainu), iepriekš aprakstītās sekas ir apgrieztas.

-Mediji ar augstu timīna un timidīna koncentrāciju būtiski samazina sulfonamīdu un trimetoprima inhibīciju.

-Augsta kalcija un magnija koncentrācija rada viltus aminoglikozīdu, polimiksīna B un tetraciklīnu rezistences pret \ t Pseudomonas aeruginosa.

-Zemas kalcija un magnija koncentrācijas rada nepatīkamas jutības pret aminoglikozīdiem, polimiksīnu B un tetraciklīniem pret \ t Pseudomonas aeruginosa.

-Cinka klātbūtne ietekmē karbapenēmu disku (imipenēma, meropenēma un ertapenēma) rezultātus..

-Vidēja, kas ir zemāka par 3 mm, biezums rada viltus jutīguma rezultātus, bet biezums virs 5 - radīs viltus pretestību.

-Disku mobilizācija antibiotikā dos deformētus halos, jo antibiotiku izdalīšanās ir tūlītēja.

- Ļoti vāji inokulāti ietekmē rezultātus, jo agārā nebūs vienota vai saplūstoša auguma, kas ir nepieciešams nosacījums, lai varētu izmērīt inhibīciju zonas, papildus tam, ka halāti var dot lielāku nekā parasti.

-Pārslogotā inokula var dot halo mazāku nekā parasti.

-Ja attālums starp diskiem netiek ievērots, viens halo pārklājas ar citu, un to nevar pareizi nolasīt.

-Inkubējiet ar CO2 palielina tetraciklīna un meticilīna disku halo izmēru.

-Inkubēšana temperatūrā, kas zemāka par 35 ° C, rada lielākas halo.

-Asins pievienošana samazina sulfonamīdu halogēna izmēru.

Ierobežojums

Antibiotikas jutība pret antibiotiku pret mikroorganismu (in vitro) nav garantija, ka tā darbosies in vivo.

Kvalitātes kontrole

Lai noskaidrotu, vai vidē ir pareizais timīna daudzums, sēj no Enterococcus faecalis ATCC 29212 un pārbauda jutību pret trimetoprima sulfametoksazolu (SXT), tam jābūt apmierinātam ar halogēnu, kas ir vienāds vai lielāks par 20 mm..

Atsauces

  1. "Agar Müller-Hinton." Vikipēdija, brīvā enciklopēdija. 16. novembris 2018, 12:23 UTC. 27, 2019, 04:22
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobioloģiskā diagnoze. 12 ed. Redakcijas Panamericana S.A. Argentīna.
  3. Cona E. Nosacījumi labas jutības pētījumam ar agara difūzijas testu. Rev Chil Infect, 2002; 19 (2): 77-81
  4. Difco Francisco Soria Melguizo laboratorija. Müeller Hinton agars ar 5% aitu asinīm. 2009. Pieejams: http://f-soria.es
  5. BD Müeller Hinton II Agar laboratorija. 2017. Pieejams: .bd.com
  6. Laboratories Britania. Müeller Hinton agars. 2015. Pieejams: britanialab.com
  7. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobioloģiskā diagnoze. 5. izdevums Redakcijas Panamericana S.A. Argentīna.
  8. Martínez-Rojas D. Betalactamasas tips AmpC: vispārīgi un fenotipiskās noteikšanas metodes. Soc. Ven. Mikrobiol. 2009. gads; 29 (2): 78-83. Pieejams: scielo.org.
  9. Perozo A, Castellano M, Ling E, Arraiz N. Fenotipisks metallobetalaktāmāžu noteikšana klīniskajos izolātos. Pseudomonas aeruginosa. Kasmera, 2012. gads; 40 (2): 113-121. Pieejams: scielo.org.