Agara M.R.S pamats, sagatavošana un izmantošana



The agars M.R.S. ir selektīva cieta barotne, ko izmanto pienskābes baktēriju, jo īpaši Lactobacillus ģints, izolēšanai un skaitīšanai. Šo agaru 1960. gadā izveidoja Man, Rogosa un Sharpe, vidū ar tādu pašu nosaukumu, bet tās sarežģītības dēļ bieži tiek lietots saīsinājums M.R.S..

Tas sastāv no proteozes peptona, gaļas ekstrakta, rauga ekstrakta, glikozes, sorbitāna monoleata, dikālija fosfāta, nātrija acetāta, amonija citrāta, magnija sulfāta, mangāna sulfāta un agara..

Šis sastāvs ļauj pienācīgi attīstīt pienskābes baktērijas no klīniskajiem paraugiem, piemēram, izkārnījumiem, maksts sekrēciju, mutes paraugiem un mātes pienu, kā arī piena un gaļas produktiem..

Klīniskajās laboratorijās to neizmanto regulāri, jo pienskābes baktērijas retos gadījumos ir iesaistītas patoloģiskos procesos. Tomēr M.R. agara lietošana ir biežāka pārtikas mikrobioloģijas jomā..

No otras puses, šo mediju izmanto daži pētniecības centri, kuru mērķis ir pētīt pienskābes baktērijas.

Indekss

  • 1 Fonds
  • 2 Sagatavošana
  • 3 Lietojumi
    • 3.1. Koloniju raksturojums
    • 3.2. Pienskābes baktēriju izolēšana
    • 3.3. Pienskābes baktēriju skaitīšana
    • 3.4 Pētniecības līmenī
  • 4 Kvalitātes kontrole
  • 5 Atsauces

Fonds

Agara Man, Rogosa un Sharpe sastāvs ir diezgan sarežģīts. Sadalot funkciju, ko katra no tās sastāvdaļām izpilda, var izskaidrot tā pamatu.

Olbaltumvielu peptons, gaļas ekstrakts, rauga ekstrakts un glikoze ir barības vielas, kas nodrošina oglekļa, slāpekļa, vitamīnu un minerālvielu avotu, kas nepieciešams baktēriju augšanai. Turklāt glikoze ir universāls enerģijas avots, ko izmanto vairumā barotņu.

No otras puses, lai veicinātu pienskābes baktēriju augšanu, ir nepieciešami nepieciešamie kofaktori (katjoni) Lactobacillus un saistīto baktēriju metabolismā; Šie savienojumi ir nātrija, magnija un mangāna sāļi.

Tāpat sorbitāna monoleats vai polisorbāts 80 ir svarīgu taukskābju avots, ja tās absorbē kā barības vielas..

Turklāt sorbitāna monoleats un amonija citrāts darbojas, inhibējot pievienotās floras, īpaši gramnegatīvo baktēriju attīstību, nodrošinot šī agara selektīvo raksturu..

Visbeidzot, agara agars ir tas, kas nodrošina vidē cieto konsistenci.

Ir arī citi Man Rogosa Sharpe agara varianti; viens no tiem ir tas, kas papildināts ar cisteīnu (M.R.S.c), kas ir ļoti noderīgs bifidobaktēriju izolēšanai starp citiem mikroorganismiem. No otras puses, ir MRS barotne, kas papildināta ar neomicīnu, paromomicīnu, nalidiksīnskābi un litija hlorīdu, īpaši selektīvai bifidobaktēriju skaitīšanai piena produktos..

Sagatavošana

Nosver 68,25 gramus dehidrētas vides un izšķīdina vienā litrā destilēta ūdens. Ļaujiet nostāvēties 5 minūtes. Lai pilnībā izšķīdinātu, uz siltuma avotu bieži samaisiet un uzkarsējiet 1 līdz 2 minūtes. Sterilizē autoklāvā 121 ° C temperatūrā 15 minūtes.

Atstājot autoklāvu, ļaujiet nostāvēties dažas minūtes un vēl karsti izdalīt sterilos Petri trauciņos.

Ļaujiet sacietēt un apgriezt plāksnes, sakārtot plāksnītēs un uzglabāt ledusskapī līdz lietošanai. Pirms to lietošanas atstājiet plāksnes istabas temperatūrā.

Barotnes pH jābūt 6,4 ± 0,2. Dažas komerciālas mājas iesaka pH robežās no 5,5 līdz 5,9.

Dehidrēta vide ir bēša un sagatavota tumšā dzintara krāsā.

Gan dehidrētā vide, gan sagatavotās plāksnes jāuzglabā 2 līdz 8 ° C temperatūrā.

Lietojumi

Agara plāksnes M.R. tos var sēt uz virsmas (izsīkums vai ar Drigalski lāpstiņu). To var arī sēt ar dziļumu. Plāksnes inkubē 37 ° C temperatūrā mikroaerofilā (4% O2 un 5-10% CO2) 24 līdz 72 stundas.

Sēšanas metode tiek izvēlēta atbilstoši mērķim (izolācijai vai skaitīšanai).

Koloniju raksturojums

Lactobacillus varbūtējās kolonijas aug baltās krāsās, un šajā agārā ir gļotādas vai krēmveida izskats. Tad viņiem ir jāidentificē.

Pienskābes baktēriju izolēšana

Šim nolūkam tiek izmantota virsmas stādīšana. Stādāmajiem paraugiem nepieciešama iepriekšēja procedūra. 

Mātes piena paraugu gadījumā ieteicams centrifugēt 1 ml parauga 14 000 rmp 10 minūtes, lai noņemtu tauku slāni. 900 μl tiek izmesti un atlikušajos 100 μl nogulsnes tiek suspendētas un ielej M.R. Tad tas vienmērīgi jāsadala ar Drigalski lāpstiņu.

Ja ir izkārnījumi, vienu (1) gramu izkārnījumu nosver un homogenizē 9 ml 0,1% sterilā peptonētā ūdenī, kas atbilst 1/10 atšķaidījumam. Tad tiek veikti sērijveida atšķaidījumi, līdz tiek iegūts galīgais atšķaidījums 10-4.

Visbeidzot, tiek ņemti 100 μl atšķaidījumu 10-2, 10-3 un 10-4 un katrs atšķaidījums tiek iesūkts uz MRS agara, vienmērīgi sadalot ar Drigalski lāpstiņu.

Pienskābes baktēriju skaitīšana

Šajā gadījumā sēšana tiek veikta ar dziļumu.

Mātes piena paraugiem ņem 1 ml un ievieto sterilā koniskā plastmasas caurulē. MRS agars tiek pievienots apmēram 40 ° C temperatūrā līdz 25 ml gala tilpumam, iegūstot homogēnu maisījumu. Pēc tam to vienmērīgi ielej sterilos Petri trauciņos un ļauj nostāvēties, līdz tas polimerizējas..

Atšķaidījumi tiek veikti izkārnījumu paraugiem, kā aprakstīts iepriekš. Ņem 1 ml katra atšķaidījuma un ievieto sterilās koniskās plastmasas caurulēs. Izkausētais MRS agars tiek pievienots 25 ml tilpumam.

Katra atšķaidījuma maisījumu ielej vienmērīgi sterilos Petri trauciņos. Visbeidzot ļaujiet tai nostāvēties līdz polimerizācijai.

Pētniecības līmenī

Katru dienu piena skābes baktēriju izpēte kļūst interesantāka; jo īpaši pētnieki cenšas uzzināt jaunus celmus un to potenciālu kā ierosinātājus standartizācijai piena produktu ražošanā, cita starpā.

Šajā ziņā Alvarado et al. (2007) izmantoja M.R. veikt pētījumu, kurā tie izolēti, identificēti un raksturoti pienskābes baktērijas, kas atrodas amatnieku kūpinātā Venecuēlas sierā.

Sierī konstatēja Lactococcus un Lactobacillus ģints baktēriju klātbūtni un secināja, ka izolētu celmu maisījumi ir piemēroti kā startera celmi pasterizēta piena sieru ražošanā..

No otras puses, Sánchez et al. (2017) izmantoja M.R. izpētīt pienskābes baktēriju klātbūtni sivēnu gremošanas traktā, lai tos izmantotu kā dabiskus probiotikus, kas palielina veselīgu sivēnu produktivitāti.

Ar šo barotni viņiem izdevās izolēt četras sugas: Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus brevis, Enterococcus hirae un Pediococcus pentosaceus.

Tāpat Báez et al. (2019) izmantoja M.R. novērtēt pienskābes baktērijas (BAL) un bifidobaktērijas ar probiotisko potenciālu mātes pienā un zīdaiņiem.

Viņiem izdevās izolēt 11 BAL un 3 Bifidobacteria sp mātes pienā, un 8 BAL un 2 Bifidobacteria sp. izkārnījumos Visi izpildīja dažus parametrus, kas tos akreditē kā baktērijas ar probiotisku aktivitāti.

Autori secināja, ka gan zīdaiņu piens, gan ekskrementi, kas iegūti tikai zīdaiņiem, ir dabiski probiotisko baktēriju avoti.

Kvalitātes kontrole

Novērtēt M.R.S. kontroles celmus var izmantot, piemēram:

Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Lactobacillus casei ATCC 393, Bifidobacterium bifidum ATCC 11863, Lactobacillus plantarum MKTA 8014, Lactobacillus lactis MKTA 19435, Pediococcus damnosus MKTA 29358, Escherichia coli un Bacillus cereus.

Gaidāmie rezultāti ir apmierinošs augums pirmajām sešām baktērijām E. coli un Bacillus cereus pilnībā jāaizliedz.

Atsauces

  1. Alvarado C, Chacón Z, Otoniel J, Guerrero B, López G. Andu roku darbs, kūpināts Venecuēlas siers, izolējot, identificējot un raksturojot pienskābes baktērijas. Tās lietošana kā sākuma kultivēšana. Zinātnieks (Maracaibo) 2007; 17 (3): 301-308. Pieejams: scielo.org.
  2. Sánchez H, Fabián F, Ochoa G, Alfaro izolācija no pienskābes baktērijām no sivēnu gremošanas trakta. Rev. vet. Peru 2017; 28 (3): 730-736. Pieejams: scielo.org.
  3. Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Pienskābes baktēriju un Bifidobaktēriju novērtēšana ar probiotisko potenciālu mātes pienā un zīdaiņu izkārnījumos Acevedo pašvaldībā, Miranda 2017. Bakalaura darbs bakalaura grāda iegūšanai Bioanalīze Karabobo Universitāte, Venecuēla.
  4. Britu laboratorija M.R.S agars. 2015. Pieejams: britanialab.com
  5. Wikipedia dalībnieki. MRS agars Vikipēdija, brīvā enciklopēdija. 2018. gada 10. janvāris, 19:44 UTC. Pieejams: wikipedia.org Piekļuve 2019. gada 17. februārim.
  6. Roy D. Media bifidobaktēriju izolēšanai un uzskaitīšanai piena produktos. Int J Food Microbiol, 200128; 69 (3): 167-82.