Agara LIA (Lizīna dzelzs) pamats, sagatavošana un izmantošana



The LIA agars (Lizīna dzelzs) ir bioķīmisks tests, ko izmanto, lai identificētu Enterobacteriaceae ģimenes baktērijas. Šo mediju veidoja Edwards un Fife, pamatojoties uz Falkow formulu.

Sākotnēji šis tests bija buljons, kas satur peptonus, rauga ekstraktu, glikozi, L-lizīnu, bromkrezola violetu un destilētu ūdeni. Edvards un Fife pievienoja agaru, dzelzs amonija citrātu un nātrija tiosulfātu.

Tests būtībā ietver fermenta lizīna dekarboksilāzes klātbūtnes demonstrēšanu, kas spēj reaģēt ar L-lizīna aminoskābes karboksilgrupu. Aminoskābes deaminācija var notikt arī sakarā ar lizīna deamināzes enzīma klātbūtni.

Turklāt barotnes sastāvs ļauj pierādīt dažu baktēriju ģints spēju ražot sērūdeņradi. Visbeidzot, ir iespējams arī novērot vidusgāzes paaudzi vai ne.

Indekss

  • 1 Fonds
    • 1.1. Peptoni un rauga ekstrakts
    • 1.2. Glikoze
    • 1,3 L-lizīns
    • 1.4 pH indikators (bromkresola purpursarkanā krāsā)
    • 1.5. Amonija dzelzs citrāts un nātrija tiosulfāts
  • 2 Testa interpretācija
    • 2.1 Lizīna dekarboksilēšana
    • 2.2 Lizīna dezaminēšana
    • 2.3. Ūdeņraža sulfīda (H2S) ražošana
  • 3 Rezultātu reģistrs
  • 4 Sagatavošana
  • 5 Lietojumi
  • 6 Atsauces

Fonds

Peptoni un rauga ekstrakts

Tāpat kā lielākā daļa barotņu, dzelzs lizīna agars satur sastāvdaļas, kas nodrošina barības vielu avotu, kas nepieciešams baktēriju augšanai. Šīs sastāvdaļas attēlo peptoni un rauga ekstrakts.

Glikoze

Arī šis agars satur fermentējamu ogļhidrātu glikozi. Ir zināms, ka visas Enterobacteriaceaee ģimenes baktērijas fermentē glikozi.

Šis solis ir izšķirošs, jo tas būs atbildīgs par vides paskābināšanu, kas ir būtisks nosacījums lizīna dekarboksilāzes fermentam, ja tāds ir, darboties uz tās substrāta..

Dažās baktēriju ģintās var novērot glikozes fermentācijas radīto gāzes ražošanu.

Gāzi pierāda, ja caurulē ir agara pārvietojums, atstājot tukšas vietas caurules apakšā vai sadalot vidē divās vai vairākās porcijās..

L-lizīns

Kad lizīns ir dekarboksilēts, veidojas diamīns (kadaverīns) un oglekļa dioksīds.

Dekarboksilēšana notiek ar koenzīma piridoksāla fosfāta klātbūtni. Šī reakcija ir neatgriezeniska.

PH indikators (bromkrezola violets)

Visas pH izmaiņas, kas radušās vidē ar dažādām reakcijām, tiek konstatētas ar bromkresola purpura pH indikatoru.

Šajā ziņā, kad ir paskābināšanās, barotne kļūst dzeltena, un, ja ir sārmains, vidē atgriežas sākotnējā purpura vai purpura krāsā.

Kad lizīna deaminācija notiek ar lizīna deamināzes enzīma klātbūtni, uz virsmas veidojas sarkanīga krāsa, kas raksturīga Proteus, Providencia un dažām Morganella sugām..

Tas ir saistīts ar to, ka deaminācijas procesā veidojas alfa-keto-ogļskābe, kas skābekļa klātbūtnē reaģē ar amonija citrātu, kas izraisa iepriekšminēto krāsu..

Amonija dzelzs citrāts un nātrija tiosulfāts

No otras puses, baktērijas, kas ražo sērūdeņradi, apliecinās nātrija tiosulfāta (sēra avots) un dzelzs amonija citrāta klātbūtne, kas ir H attīstītājs.2S.

Baktērijām, kurām ir tiosulfāta reduktāzes enzīms, ir spēja darboties, samazinot klātbūtnē esošo nātrija tiosulfātu, veidojot sulfītu un sērūdeņradi (H2S).

Pēdējais ir bezkrāsains gāze, bet, reaģējot ar dzelzs sāli, veidojas metālisks dzelzs sulfīds, kas ir nešķīstošs savienojums (redzams melns nogulsnes)..

Tomēr H veidošanās spēja2S ar šo barotni nav ļoti ticama, jo dažas negatīvas lizīna dekarboksilāzes baktērijas, kas spēj ražot H2S neradīs melnās nogulsnes, jo barotnes skābums traucē. Tāpēc ieteicams pārbaudīt ar citiem līdzekļiem, kas satur dzelzi.

Testa interpretācija

Lizīna dekarboksilēšana

Caurules jāizlasa pēc 24 stundu inkubācijas beigām, pretējā gadījumā pastāv risks, ka reakcija tiks nepareizi interpretēta, ziņojot par viltus negatīviem.

Jāatceras, ka pirmā reakcija būs glikozes fermentācija, tāpēc visas caurules pēc 10 līdz 12 stundām kļūs dzeltenas.

Ja inkubācijas perioda beigās (24 stundas) novēro dzeltenu fonu ar purpura vai purpura virsmu, reakcija ir negatīva. Virsmas purpursarkanā krāsa atbilst barotnes sārmainībai, izmantojot peptonus.

Pozitīva reakcija ir tāda, kurā caurules apakšdaļa un virsma ir pilnīgi purpura, ti, atgriežas pie sākotnējās krāsas.

Tāpēc, kurš nosaka testa pozitivitāti, ir barotnes pamatne vai apakšdaļa. Ja jums ir šaubas par krāsu, to var salīdzināt ar neinokulētu LIA cauruli.

Lizīna deaminācija

Caurulei, kas pierāda lizīna deamināciju, būs sarkanīgi brūna virsma un dzeltens fons (skābe) vai visa sarkanbrūna caurule..

Šī reakcija tiek interpretēta kā negatīva lizīna dekarboksilēšanai, bet pozitīva lizīna deaminācijai..

Šī reakcija ir definēta un interpretēta slīpumā.

Ūdeņraža sulfīda ražošana (H. \ T2S)

Pozitīva reakcija novērojama melnās nogulsnes parādīšanās vidē vai tās daļā. Parasti starp slīpuma robežu un pamatni.

Ja nogulsnes parādās visā caurulē, tas nerādīs citas reakcijas, kas rodas vidē.

Rezultātu reģistrs

Interpretējot testu, rezultātus ieraksta šādi:

Vispirms izlasiet slīpumu, tad grunts vai taco, tad H2S, un, visbeidzot, gāzes ražošana.

Piemērs: K / A + (-). Tas nozīmē:

  • K: Sārmains rāmis (violets)
  • A: skābe (dzeltena) fona, proti, negatīva dekarboksilācijas reakcija un negatīva deaminācija.
  • +: Ūdeņraža sulfīda ražošana
  • (-): Bez gāzes.

Sagatavošana

Nosver 35 g lizīna agara atūdeņota dzelzs un izšķīdina vienā litrā destilēta ūdens.

Karsē, līdz agars ir pilnīgi izšķīdis, tāpēc to vāra dažas minūtes bieži maisot. Izplatiet 4 ml barotnes ar 13/100 mēģenēm ar vates vāku.

Sterilizē autoklāvā 121 ° C temperatūrā 15 minūtes. Noņemiet no autoklāvas un ļaujiet atpūsties slīpi, tādā veidā, ka ir dziļa bāze un īss slīpums.

Uzglabāt ledusskapī 2-8 ° C. Pirms baktēriju celmu stādīšanas ļaujiet noskalot.

Dehidrētās vides krāsa ir smilškrāsas un vidēji sagatavota sarkanīgi violeta krāsa.

Sagatavotās barotnes galīgais pH ir 6,7 ± 0,2.

Vidēja viela kļūst dzeltena, pH ir vienāda ar vai mazāka par 5,2, un purpura pH ir 6,5.

Lietojumi

Šo testu kopā ar citiem bioķīmiskiem testiem izmanto, lai identificētu bacīles no Enterobacteriaceae ģimenes..

Vidēja sēja ar taisnu cilpu vai adatu, caurules apakšā tiek veidots viens vai divi perforatori, un tad barotnes virsma ir sasmalcināta.

To inkubē 24 stundas 35-37 ° C temperatūrā aerobiozi. Ja nepieciešams, tas tiek inkubēts vēl 24 stundas.

Galvenokārt ir lietderīgi diferencēt negatīvās Citrobacter laktozes sugas Salmonellas sp.

Atsauces

  1. Mac Faddin J. (2003). Biochemiskie testi klīniski nozīmīgu baktēriju identificēšanai. 3. ed. Redakcijas Panamericana. Buenosairesa Argentīna.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobioloģiskā diagnoze. 12 ed. Redakcijas Panamericana S.A. Argentīna.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobioloģiskā diagnoze. 5. izdevums Redakcijas Panamericana S.A. Argentīna.
  4. Laboratories Britania. Lizīna dzelzs agars. 2015. Pieejams: britanialab.com
  5. BD laboratorijas BBL lizīna dzelzs agars. 2007. Pieejams: bd.com
  6. Valtek Laboratories Medium L.I.A. 2009. Pieejams: andinamedica.com