Kopīgot:
Agar Hektoen pamats, sagatavošana un izmantošana
The Hektoen agars vai enterālais Hektoen agars ir cieta, selektīva un diferenciāla barotne. Tas tika izveidots Hektoen institūtā King un Metzger, lai izolētu Shigella un Salmonella ģints ģenētiskās baktērijas..
Vidēja viela sastāv no proteozes peptona, rauga ekstrakta, žults sāļiem, laktozes, saharozes, salicīna, nātrija tiosulfāta, nātrija hlorīda, dzelzs citrāta, amonija citrāta, bromtimola zila, skābes fuksīna un agara. Šis formulējums ļauj nošķirt Shigella un Salmonella ģints no pārējām baktērijām, kas spēj augt šajā barotnē.
Lai gan ir citi līdzekļi ar tādu pašu funkciju kā Hektoen agaram, tas rada lielāku priekšrocību salīdzinājumā ar citiem līdzekļiem, jo īpaši, ja vēlaties atgūt Shigella sugas.
Abu ģinšu sugas cilvēkiem izraisa smagas kuņģa-zarnu trakta problēmas, jo tās ir piesārņotas; tāpēc transmisija ir izkārnījumi - perorāli. Šī iemesla dēļ Hektoen agara lietošana ir galvenokārt norādīta izkārnījumu un pārtikas paraugu mikrobioloģiskajā analīzē..
Indekss
- 1 Fonds
- 2 Sagatavošana
- 3 Lietošana
- 4 Kvalitātes kontrole
- 5 Ierobežojumi
- 6 Atsauces
Fonds
Hektoen agars satur peptonus un rauga ekstraktu kā barības vielu avotu, nodrošinot būtiskus mikrobu attīstības elementus..
Tomēr tajā ir arī žults sāļi, kas darbojas, inhibējot dažu baktēriju, īpaši gram-pozitīvu un dažu gramnegatīvu, augšanu. Šī iemesla dēļ to uzskata par selektīvu vidi.
No otras puses, Hektoen agars ir diferenciāla vide. Šo īpašību nodrošina fermentējamo ogļhidrātu, piemēram, laktozes, saharora un salicīna, klātbūtne kopā ar pH indikatora sistēmu, ko pārstāv bromtimola zils un skābes fuksīns..
Visas baktērijas, kas spēj augt šajā barotnē, kas nepieder pie Salmonella un Shigella ģints, attīstīs lašu vai apelsīnu kolonijas, izņemot Proteus ģints. Tas ir saistīts ar viena vai vairāku klātbūtnes ogļhidrātu fermentāciju, kas paskābina vidi, kas izraisa pH indikatora pagriezienu.
Savukārt Shigella un Salmonella ģints nespēj fermentēt kādu no esošajiem ogļhidrātiem, izmantojot tikai enerģijas avotu peptonus, kas sārmaina vidi, un tāpēc tās kolonijas ir zilas-zaļas.
Arī šajā vidē var atšķirt baktērijas, kas spēj veidot sērūdeņradi (bezkrāsaina gāze). Nātrija tiosulfāts darbojas kā sēra avots, savukārt dzelzs citrāts ir atklātais līdzeklis. Abi savienojumi ļauj veidot melnu dzelzs sulfīda nogulsnes, kas liecina par reakciju.
Melnās nogulsnes kolonijas centrā ar caurspīdīgu apvalku rada zivs acu izskatu. Šī īpašība liecina par Salmonella ģints klātbūtni.
Visbeidzot, nātrija hlorīds saglabā osmotisko līdzsvaru un agars nodrošina vidēju konsistenci.
Sagatavošana
Nosver 76 g dehidrētas vides un izšķīdina vienā litrā destilēta ūdens. Enerģiski sakrata maisījumu un tad ļaujiet tai palikt 10 līdz 15 minūtes. To var sildīt un vārīt, dodot rotācijas kustības līdz pilnīgai izšķīdināšanai. Šis nesējs nav autoklāvēts.
Ja vidēja temperatūra sasniedz aptuveni 45 ° C, 20 ml tilpumu tieši ielej sterilos Petri trauciņos..
Agaram ļauj sacietēt. Tajā laikā viņi ir gatavi lietošanai. Ieteicams tos nekavējoties izmantot. Ja tās nav iespējams, tās jāglabā ledusskapī, līdz tās tiek izmantotas.
Pirms stādīšanas, lai ņemtu istabas temperatūru, plāksnes no ledusskapja ir jānoņem agri.
Barotnes pH jābūt 7,5 ± 0,2. Dehidrētās vides krāsa ir purpura un sagatavota brūnganzaļā krāsā.
Izmantot
Hektoen agara lietošana ir ieteicama, lai meklētu baktērijas Shigella un Salmonella ģints briedēm izkārnījumos un pārtikas paraugos..
Iespēja izolēt šīs baktērijas ir ievērojami palielinājusies, ja paraugs iepriekš ir bagātināts ar īpašiem buljoniem, piemēram, selenīta buljonu, selenīta cistīna buljonu, tetrationāta buljonu utt..
Sējmateriālam jābūt spēcīgam un sēklas tiek veiktas ar striju. Plāksnes inkubē 37 ° C temperatūrā 24 līdz 48 stundas aerobioze.
Inkubācija ir ieteicama 48 stundas, jo koloniju īpašības ir skaidrākas to interpretācijai un diferenciācijai šajā laikā.
Kvalitātes kontrole
Lai veiktu kvalitātes kontroli šajā barotnē, tiek izmantoti sertificēti baktēriju celmi, piemēram: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Shigella flexneri ATCC 12022 un Shigella sonnei ATCC 25931.
Gaidāmie rezultāti ir šādi: Salmonella typhimurium un. \ T Salmonella enteritidis tām ir jāizstrādā zaļganzilas kolonijas ar vai bez melnā centra. Kamēr Shigella sugas augs kā zilzaļās kolonijas.
Jūs varat iekļaut arī celmus Escherichia coli ATCC 29212, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Enterococcus faecalis ATCC 29212 un Staphylococcus aureus ATCC 25923.
Šādos gadījumos novērotās īpašības ir šādas: E. coli un K. pneumoniae Šajā barotnē tās izveidos lašu-oranžās kolonijas, kurās ap tiem būs tādas pašas krāsas nogulsnes. Tikmēr Proteus izveidos zilganzaļās kolonijas ar vai bez melnā centra.
Kamēr S. aureus un E. faecalis dažreiz ir jāaizliedz E. faecalis izdodas augt kā dzeltenas kolonijas, ļoti mazas.
No otras puses, tā kā šī barotne nav sterilizēta autoklāvā, ir svarīgi novērtēt barotnes sterilitāti. Tādēļ katra sagatavotā partija ir jā inkubē no vienas līdz divām plāksnēm bez inokulēšanas 37 ° C temperatūrā 24 stundas aerobiozi..
Acīmredzot ir sagaidāms, ka uz plates nebūs nekāda veida augšanas.
Ierobežojumi
-Proteus sugas var attīstīties šajā vidē, un to koloniju īpašības var sajaukt ar Salmonella vai Shigella sugām. Šī iemesla dēļ jebkura aizdomīga kolonija ir jāapstiprina ar bioķīmiskiem testiem.
-Šīs barotnes lietošana jāpapildina ar citiem mazāk selektīviem agāriem, jo, ja meklētais mikroorganisms ir atrodams zemā koncentrācijā, tas var neizdoties šajā vidē..
-Neuzkarst tās sagatavošanas laikā, jo pārmērīgs karstums maina barotnes sastāvu.
-Neparasti laktozes fermentējošās Salmonella kolonijas var nepamanīt.
Atsauces
- Wikipedia dalībnieki. Hektoen enterālais agars. Vikipēdija, brīvā enciklopēdija. 2019. gada 13. marts, 23:38 UTC. Pieejams: .wikipedia.org / Pieejams 2019. gada 16. martā.
- BD laboratorijas BD Hektoen enterālais agars (HE Agar). 2013. Pieejams: bd.com
- Laboratories Britania. Hektoen enterālais agars. 2015. Pieejams: britanialab.com
- Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. Agar Hektoen agars. Pieejams: f-soria.es
- Difco & BBL rokasgrāmata, Hektoen enterālais agars. 2. izdevums. Pieejams: bd.com/europe