Agara Endo pamats, sagatavošana un izmantošana



The Endo agars vai vidēja Endo ir cieta, diferenciāla barotne ar noteiktu selektivitātes pakāpi. Sākotnējo formulu Endo izveidoja 1904. gadā, lai diferencētu laktozes fermentācijas baktērijas no nefermentējošām baktērijām. Sākumā tas bija paredzēts, lai izolētu Salmonella typhi, bet vēlāk vidēja mērķa mērķis bija meklēt koliformas.

Endo agara princips ir saglabāts, bet tās formulējums gadu gaitā ir noticis neskaitāmas izmaiņas. Pašlaik barotne sastāv no peptīdu šķeltiem dzīvnieku audiem, laktozes, dikālija hidrogēnfosfāta, nātrija sulfīta, pamata fuksīna un agara..

Galvenais barotnes izmantošanas veids ir saistīts ar Enterobacteriaceae ģimenei piederošo gramnegatīvo bacīļu un citu tuvu ģimeņu izolāciju un diferenciāciju..

Ilgu laiku tā tika izmantota koliformu atklāšanai ūdens, piena un pārtikas paraugos, bet mūsdienās šo mediju lietošana ir pārvietojusies no citām līdzīgām funkcijām. Tomēr dažas mikrobioloģijas laboratorijas izmanto šo agaru Enterobacteriaceae izolēšanai no klīniskas izcelsmes paraugiem.

Indekss

  • 1 Fonds
  • 2 Sagatavošana
    • 2.1. Endo agars
    • 2.2 agara m-Endo variants
  • 3 Lietošana
  • 4 Kvalitātes kontrole
  • 5 Ierobežojumi
  • 6 Atsauces

Fonds

Endo agars satur peptonus, kas kalpo kā aminoskābju, slāpekļa, oglekļa un enerģijas avots, kas nepieciešams, lai augtu nepiemēroti mikroorganismi..

No otras puses, agara nedaudz selektīvo raksturu nodrošina, pievienojot nātrija sulfītu un pamata fuksīnu; abas sastāvdaļas daļēji vai pilnībā kavē lielāko gram-pozitīvo baktēriju attīstību.

Diferenciālo raksturu nosaka fermentējamo ogļhidrātu klātbūtne, kas šajā gadījumā ir laktoze un pamata fuksīns, kas arī kalpo kā pH indikators..

Gram-negatīvās baktērijas, kas aug šajā agārā un spēj fermentēt laktozi, veidos spēcīgas rozā kolonijas; ir. \ t Escherichia coli tumši sarkanu koloniju veidošanās ar zaļu metālisku spīdumu. Tas ir saistīts ar ogļhidrātu fermentācijas augsto skābju ražošanu.

Jāatzīmē, ka barotne, kas atrodas ap kolonijām, kļūst par spēcīgu rozā krāsu. Kamēr laktoze nesagraujošās gramnegatīvās bacīles veido gaiši rozā kolonijas, kas līdzīgas vidējam vai bezkrāsainam.

Dikālija hidrogēnfosfāts līdzsvaro barotnes pH un agars ir sastāvdaļa, kas nodrošina cieto konsistenci.

Sagatavošana

Endo Agar

Nosver 41,5 g dehidratēta barotnes un izšķīdina 1 litrā destilēta ūdens. Sildiet maisījumu, bieži maisot, līdz vidē tiek pilnībā izšķīdināta. Sterilizē autoklāvā 121 ° C temperatūrā pie 15 lb spiediena 15 minūtes.

Noņemot no autoklāvas, ļaujiet atdzist līdz apmēram 45-50 ° C temperatūrai, sakratiet maisījumu, lai homogenizētu pirms pasniegšanas. Ielej 20 ml sterilos Petri trauciņos.

Pirms uzglabāšanas ledusskapī lieciet plāksnes sacietēt, invertēt un uzglabāt kārbā vai iesaiņot ar tumšu papīru. Ir ļoti svarīgi aizsargāt sagatavoto vidi no tiešas gaismas. Ieteicamā prakse ir sagatavot precīzu summu, kas būs nepieciešama.

Ja tās tiek uzglabātas ledusskapī, pirms lietošanas tās jāturpina.

Barotnes pH jābūt 7,2 līdz 7,6, un sagatavotās barotnes krāsa ir gaiši rozā..

Agar m-Endo variants

Ir vēl viena Endo agara versija (m-Endo), kas atbilst McCarthy, Delaney un Grasso formulai, kurā ir vairāk savienojumu un kas atšķiras pēc sagatavošanas veida..

Šis variants satur: laktozi, triptozi, kazeīna fermentu fermentāciju, dzīvnieku audu fermentu fermentāciju, nātrija hlorīdu, divšķiedru kālija fosfātu, nātrija sulfītu, rauga ekstraktu, kālija fosfātu monobazu, pamata fuksīnu, nātrija dezoksikolātu, laurilsulfātu nātrija un agara.

Šajā gadījumā mēs nosveram 51 g dehidrētas vides un suspendējam to 1 litrā destilēta ūdens, kas satur 20 ml etanola..

Nedaudz sakarsējiet, līdz barotne ir pilnībā izšķīdusi. Nepārkarstiet un ne sterilizējiet autoklāvā. Kad maisījums ir homogēns, izmantojiet sterilos Petri trauciņos un ļauj sacietēt.

Izmantot

Dažās valstīs tas joprojām tiek izmantots kopējo un fēcisko koliformu uzskaitei ūdens un pārtikas paraugos, jo īpaši, Escherichia coli kā galveno fekāliju piesārņojuma rādītāju.

D-dezinfekcijas un notekūdeņu attīrīšanas programmu uzraudzībai un kontrolei, kā arī dzeramā ūdens kvalitātes novērtēšanai iesaka M-Endo agars..

Visbiežāk izmantotā metode ir membrānas filtrēšana pēc parauga bagātināšanas ar Laurila sulfāta buljonu 2 līdz 4 stundas..

To var izmantot arī kā aizstājēju EMB agaram pārtikas un ūdens mikrobioloģiskajā analīzē, izmantojot visticamāko skaitļu metodi (NMP), īpaši pilnā apstiprinājuma fāzē, lai apstiprinātu klātbūtni. E. coli no duļķainiem EK buljoniem.

Kvalitātes kontrole

Lai novērtētu sagatavoto Endo agara partijas kvalitāti, tiek sēti zināmi vai sertificēti kontroles celmi.

Starp celmiem, kurus var izmantot šim nolūkam, ir: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 11775, Enterobacter cloacae ATCC 13047, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella flexneri ATCC 12022, Proteus mirabilis ATCC 14153 un Enterococcus faecalis ATCC 11700.

Celmus sēj ar izsmelšanu un inkubē 37 ° C temperatūrā 24 stundas aerobiozi.

Gaidāmie rezultāti ir:

  • Uz Escherichia coli: kolonijas ir spēcīgas sarkanas, ar metāla spīdumu.
  • Uz E. cloacae un K. pneumoniae kolonijām jābūt rozā gļotādām.
  • S gadījumā. typhimurium, S. flexneri un P. mirabilis kolonijas parasti ir gaiši rozā vai bezkrāsainas.
  • Visbeidzot, E. faecalis ir paredzams, ka tas daļēji tiks nomākts, tāpēc tā augšanai jābūt sliktai ar ļoti mazām spēcīgas rozā kolonijām.

Ierobežojumi

-Endo barotnei ir zema selektīvā jauda, ​​tāpēc ir iespējams, ka var attīstīties daži gram-pozitīvi mikroorganismi, piemēram, Staphylococcus, Enterococcus un pat raugi.

-Šajā vidē var attīstīties arī citi bobīli, kas nepieder pie Enterobacteriaceae ģimenes Pseudomonas sp un Aeromonas sp. Šo celmu īpašības ir bezkrāsains neregulāras kolonijas.

-Šis sagatavotais nesējs ir ļoti jutīgs pret gaismu, tāpēc ilgstoša iedarbība uz to pasliktina indikatoru sistēmu, neatgriezeniski bojājot vidi..

-Vidēja viela tiek uzskatīta par kancerogēnu, tāpēc jāizvairās no tieša kontakta.

-Dehidrēta vide ir ļoti higroskopiska un jāuzglabā tā sākotnējā iepakojumā istabas temperatūrā, cieši noslēgtā un sausā vidē..

Atsauces

  1. BD laboratorijas Endo Agar. 2013. Pieejams: bd.com
  2. Neogen Laboratories M Endo Agar. Pieejams: foodsafety.neogen.com
  3. "Agar Endo." Vikipēdija, brīvā enciklopēdija. 2017. gada 7. septembris, 08:27 UTC. 28. februāris 2019, 22:55. Pieejams: en.wikipedia.
  4. MercK laboratorija. Endo agars 2019. Pieejams vietnē: merckmillipore.com
  5. Laboratoriju tehniskā lapa. M -Endo Agar LES. 2015. Pieejams: liofilchem.net