Agara EMB pamati, sagatavošana un izmantošana



The EMB agars ir selektīva un diferenciāla cieta barotne, ko izmanto gramnegatīvās bacīļu, galvenokārt Enterobacteriaceae ģimenes, un citu neprasītu gramnegatīvu bacīļu izolēšanai. To pazīst arī akronīms EAM, kas nozīmē eozīna-metilēna zilu.

Šo vidi izveidoja Holt-Harris un Teague 1916. gadā. Tas satur peptonu, laktozi, saharozi, dikālija fosfātu, agaru, eozīnu, metilēnzilu un ūdeni. Tas ir ļoti līdzīgs MacConkey agaram, īpaši, ja lieto EMB agaru, ko modificējis Levine un kas nesatur saharozi..

Faktiski katra laboratorija nolemj, vai tā darbojas ar vienu vai otru, jo tās pilda vienu un to pašu funkciju, kaut arī tās bioķīmiski atšķiras..

Tas pat rada tādu pašu trūkumu kā klasiskajam MacConkey agaram attiecībā uz Proteus ģints ražošanu. Tāpēc, lai izvairītos no šīs parādības, agara koncentrāciju var palielināt līdz 5%..

Indekss

  • 1 Fonds
    • 1.1. Selektīva
    • 1.2 Diferenciālis
  • 2 Sagatavošana
  • 3 Lietojumi
  • 4 Kvalitātes kontrole
  • 5 Galīgie apsvērumi
  • 6 Atsauces

Fonds

Selektīvs

EMB agars ir smalki selektīvs, jo tajā ir anilinās krāsvielas (eozīns un metilēnzils), kas darbojas kā inhibitori, novēršot lielāko gram-pozitīvo baktēriju un dažu prasīgu gramnegatīvu bacillu augšanu..

Tomēr šim agaram ir trūkums, ka dažas Gram-pozitīvās baktērijas var izturēt inhibējošo vielu klātbūtni un augt kā mazas bezkrāsainas kolonijas, piemēram, Enterococcus faecalis un daži Staphylococcus.

Jūs varat arī audzēt dažus raugus, piemēram, Candida albicans komplekss, Tas dos ļoti mazas rozā kolonijas. Pat no šī rauga var attīstīties pat hlamidosporas, ja paraugs tiek sēts ar dziļumu.

Diferenciālis

No otras puses, EMB agars ir arī diferencēts līdzeklis, jo šīm krāsvielām kopā (eozīns un metilēnzils) ir īpašība, ka tās veido skābi pie skābā pH, tāpēc tās kalpo par to ražošanas rādītājiem..

Tāpēc vāji fermentējošās laktozes vai saharozes baktērijas 24 līdz 48 stundu laikā rada purpura kolonijas. Piemēram, ģints Klebsiella, Enterobacter un Serratia.

Tās baktērijas, kas stipri fermentē laktozi, piemēram, Escherichia coli, vai saharoze, kā Yersinia enterocolitica o Proteus penneri, veidot zaļgani melnu nogulsni, piešķirot šīm sugām metālisku spīdumu.

Jāatzīmē, ka, ja lieto EMB levīna barotni (bez saharozes), Yersinia enterocolitica un Proteus penneri tās radīs pārredzamas kolonijas.

Baktērijas, kas fermentē laktozi vai saharozi, baro ar peptonu klātbūtni, kas nodrošina aminoskābes un slāpekli, kas nepieciešami baktēriju attīstībai, un rada caurspīdīgas kolonijas. Piemēram, Salmonella un Shigella ģints, cita starpā.

Tāpat ir svarīgi atzīmēt, ka Acinetobacter ģints var uzrādīt lavandas zilās kolonijas, lai gan tas nav laktozes, ne saharozes fermentors, bet tiem ir īpašība, ka tās šūnu sieniņā ir metilēna zils. Tas var notikt arī ar citām oksidējošām baktērijām.

Sagatavošana

Oriģinālais dehidrēts līdzeklis ir gaiši bēša.

Lai pagatavotu šo barotni, 36 grami dehidratēta barotne jānosver un suspendē flakonā, kas satur vienu litru destilēta ūdens..

Pēc tam, kad maisījums ir atstājis 5 minūtes atpūtā, atvelciet fiolu uz siltuma avotu, enerģiski un pastāvīgi sajaucot, līdz tas vārās, un tas ir pilnīgi izšķīdis..

Pēc tam izšķīdināto barotni sterilizē, izmantojot autoklāvu 121 ° C temperatūrā 15 minūtes.

Laika beigās tas tiek noņemts no autoklāvas un atstāts uz īsu brīdi. Tad katram sterilam Petri trauciņā tas tiek pasniegts pat karsts (45 - 50 ° C) no 15 līdz 20 ml agara. Medijam jābūt zilam litmam.

Pēc tam, kad plāksnes tiek pasniegtas, tās atstāj nedaudz atklātas, līdz agars atdziest nedaudz. Tad tie tiek pārklāti un ļauts pilnīgi sacietēt. Vēlāk tos pasūta apgrieztā plāksnes turētājā un uzglabā ledusskapī (8 ° C), līdz tie tiek izmantoti.

Lai izvairītos no piesārņojuma, šo procedūru vēlams veikt laminārā plūsmas pārsegā vai Bunsen degļa priekšā.

Ir svarīgi paturēt prātā, ka katra komerciālā ēka norāda sveramo daudzumu, lai sagatavotu barotni.

Barotnes galīgajam pH jābūt 7,2 ± 0,2

Lietojumi

Šo barotni izmanto urīna un izkārnījumu vai jebkura veida klīnisko paraugu sēšanai, jo īpaši, ja ir aizdomas par nepieprasītām gramnegatīvām bacillām, piemēram, Enterobacteriaceae ģimenei piederošajiem baciliem, kas šajā vidē aug ļoti labi.

Shigella un Salmonella ģints enteropatogēnās baktērijas izceļas ar bezkrāsas vai nedaudz dzintara kolonijām..

Pieaug arī citi nefermentējoši laktozes bacīļi, piemēram, Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter..

Līdzīgi, šis barotnes ir ļoti noderīgas pārtikas un ūdens mikrobioloģiskajā analīzē, jo tas ir ideāls koliformu noteikšanas pilnīgai apstiprinošai fāzei, ti, lai apstiprinātu klātbūtni. E. coli no duļķainiem EK buljoniem, no visticamākā skaita metodes (NMP).

Kvalitātes kontrole

Lai pārliecinātos, ka nesen kultivētā barotne darbojas labi, kontroles celmus var stādīt, lai ņemtu vērā koloniju īpašības un pārliecinātos, ka tie sniedz, kā paredzēts.

Šim nolūkam ATCC celmi vai labi identificēti celmi E. coli, Enterobacter aerogenes, Klebsiella sp, Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Pseudomonas aeruginosa un dažas Gram-pozitīvas baktērijas S. aureus.

Paredzams, ka E. coli Izveidojiet labi attīstītas zilgani melnas kolonijas ar zaļu metālisku spīdumu. Kamēr, Enterobacter aerogenes un Klebsiella sp tiem jānodrošina labi attīstītas gļotādas kolonijas zilgani melnā krāsā.

Savukārt, Salmonella typhimurium un Shigella flexneri, tām jāizveido lielas kolonijas, bezkrāsainas vai ar nelielu dzintara krāsu.

Visbeidzot žanrs Pseudomonas aeruginosa tā aug kā bezkrāsains kolonijas ar neregulāru izmēru, bet Gram-pozitīvās baktērijas ir pilnībā jāaizsargā vai jāaudzē ar nelielām kolonijām..

Galīgie apsvērumi

Dažreiz sterilizācija samazina metilēnzilu, novēršot oranžu vidi. Lai metilēnzilā oksidēties un purpura krāsa atjaunotos, to viegli sajauc, līdz krāsa atjaunojas.

Arī pēc sterilizēšanas var nokrāsot krāsu, tāpēc pirms Petri trauku pasniegšanas tas labi jāsamaisa.

Atsauces

  1. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B un Velázquez O. 2009. Pārtikas produktu mikrobioloģiskās analīzes metodes. 2nd ed. Ķīmijas fakultāte, UNAM. Meksika.
  2. Carranza C, León R, Falcón N, Neumann A, Kromm C. Celmu raksturojums un sadalījums. Escherichia coli Potenciāli patogēni vistas broilera izolāti no mājputnu saimniecībām Peru. Rev. vet. Peru 2012 23 (2): 209-219. Pieejams: scielo.org.
  3. Laboratories Conda S.A. Eozīna agars un metilēnzils. 2010. Pieejams: condalab.com
  4. Laboratories Britania. Levine E.M.B (Ar Eosin un Methylene Blue) 2011. Pieejams: britanialab.com
  5. BD laboratorijas BD EMB agars (Eozīna metilēnzilais agars), modificēts. 2013. Pieejams: bd.com
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobioloģiskā diagnoze. (5. izdevums). Argentīna, Redakcijas Panamericana S.A..
  7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott mikrobioloģiskā diagnoze. 12 ed. Argentīna Panamericana S.A Redaktors