Agar ir standarta pamats, sagatavošana un izmantošana

The standarta konta agars ir cieta, neselektīva barotne, kas paredzēta, lai kvantitatīvi noteiktu citu pārtikas produktu dzeramā ūdens, notekūdeņu, piena dzērienu paraugu aerobo mikrobu slodzi. Šis barotne ir pazīstama arī kā PCA agars, tās akronīmam angļu valodā Plate Count Agar. To 1953. gadā izveidoja Buchbinder, Baris un Goldstein.

Standarta agara barotnes kontu veido rauga ekstrakts, tripteīns, glikoze, agars un destilēts ūdens. Šis sastāvs satur pamata uztura elementus, kas ļauj attīstīt pašreizējo aerobo mikrobu slodzi, kas nav prasīga.

Tā kā barotne nesatur inhibitorus, baktērijas var attīstīties bez jebkādiem ierobežojumiem, tāpēc tā ir ideāli piemērota vispārējam koloniju skaitam. Tomēr plākšņu kvantitatīvās noteikšanas metode neatklās visas klātbūtnes baktērijas, bet tikai tās, kas spēj augt tādos vides apstākļos, uz kuriem attiecas standarta sējas agars..

Šajā ziņā plākšņu kvantitatīvās noteikšanas metodes mērķis ir vispārīgi noteikt aerobo mezofilisko baktēriju daudzumu, tas ir, tās, kas attīstās temperatūrā starp 25 un 40 ° C, ar optimālu augšanas temperatūru 37 ° C temperatūrā..

Šī baktēriju grupa ir ļoti svarīga, jo cilvēkiem ir visvairāk patogēnu baktēriju.

Jāatzīmē, ka dažreiz var būt interesanti kvantitatīvi noteikt pārtikas produktos esošo psirofilo baktēriju daudzumu. Šīs baktērijas ir tās, kas attīstās zemā temperatūrā (< 20°C) y son las responsables de que los alimentos se descompongan más rápido, aun estando en nevera.

Tāpat arī termofīlas baktērijas, kas attīstās robežās no 50 ° C līdz 80 ° C vai vairāk, var būt svarīgas dažiem pārtikas produktu veidiem, piemēram, konserviem..

Mikroorganismu kvantitatīvo noteikšanu izsaka koloniju veidojošās vienībās (CFU) uz gramu vai parauga mililitru.

Indekss

• 1 Fonds
• 2 Sagatavošana
  • 2.1. Plākšņu ieliešanas paņēmienam
  • 2.2 Virsmas stādīšanai
• 3 Lietošana
  • 3.1. Plates ielešanas metode (izsējas ar dziļumu)
  • 3.2. Uz virsmas apsēta tehnika
• 4 Kvalitātes kontrole
• 5 Ierobežojumi
• 6 Atsauces

Fonds

Standarta skaitīšanas vide ir veidota tā, lai ļautu apmierinoši attīstīt nepieprasītas aerobās baktērijas, jo rauga ekstrakts, tripheīns un glikoze nodrošina vajadzīgās barības vielas labai mikrobu attīstībai..

No otras puses, vidē ir skaidra krāsa un caurspīdīgs izskats, tāpēc tas ir ideāli piemērots, lai parādītu kolonijas, kas izveidotas ar dziļās sēšanas metodi (ielejot šķīvī)..

Iespējams arī kolonijas saskaitīt ar sējmašīnu ar Drigalski lāpstiņu.

Ja mikrobioloģiskā slodze ir augsta, jāveic pētāmā parauga decimālšķīdumi, lai aprēķinātu CFU.

Jāatzīmē, ka šo mediju iesaka Amerikas Sabiedrības veselības asociācija (APHA) aerobo mezofilu skaitīšanai..

Sagatavošana

Nosver 23,5 g dehidrētas vides un izšķīdina vienā litrā destilēta ūdens. Lai pilnībā izšķīdinātu maisījumu, tas bieži jākarsē, līdz tas vārās. Apakšnodaļas ir atkarīgas no izmantojamās sēšanas tehnikas.

Par plākšņu ieliešanas tehniku

Izplatiet, izplūstot 12 līdz 15 ml mēģenēs. Pēc tam sterilizē autoklāvā 121 ° C temperatūrā 15 minūtes. Ļaujiet sacietēt vertikāli bloka veidā. Uzglabāt ledusskapī līdz lietošanai.

Izkausējiet to, kad tas tiks izmantots. Kad paraugi tiek gatavoti, pēc tā izkausēšanas noturiet to ūdens vannā 44-47 ° C temperatūrā.

Stādīšanai uz virsmas

Maisījumu sterilizē autoklāvā 121 ° C temperatūrā un pēc tam izšķīdina 20 ml sterilos Petri trauciņos. Pirms lietošanas ļaujiet sacietēt, invertēt un uzglabāt ledusskapī.

Pirms lietošanas noregulējiet plāksnes. Vidēja pH jābūt 7,0 ± 0,2.

Izmantot

Agara standarta skaitli izmanto ūdens un pārtikas mikrobioloģiskās analīzes laikā aerobos mezofilu skaitīšanas paņēmienos. Aerobo mezofilu skaitīšana ir nepieciešama, jo tā nosaka pētāmā parauga sanitāro kvalitāti.

Šīs metodes izmantošana (izmantojot šo barotni) ļauj izdalīt izolētas kolonijas makroskopiski to kvantitatīvai noteikšanai.

Plāksnes ielešanas tehnika (izsējas ar dziļumu)

-Procedūra

Šī metode sastāv no:

1) homogenizējiet paraugu, lai pārdalītu klātbūtnes baktērijas.

2) Sākotnējā suspensija tiek veikta sterilā flakonā vai maisā, ievērojot 10 g vai 10 ml parauga attiecību 90 ml šķīdinātāja (10^-1).

3) Sākotnējā suspensijā attiecīgie decimāldaļiņu atšķaidījumi tiek veikti atkarībā no parauga veida. Piem. (10^-2, 10^-3, 10^-4). Atšķaidījumi tiek veikti ar peptona ūdens vai fosfāta buferšķīdumu.

Lai to izdarītu, paņemiet 1 ml sākotnējās suspensijas un ievietojiet 9 ml šķīdinātāja, vajadzības gadījumā turpiniet atšķaidījumus, uzņemot 1 ml atšķaidījuma.^-2 un tā tālāk.

4) paņem 1 ml katra atšķaidījuma un ievieto tukšos sterilos Petri trauciņos.

5) Katrai plāksnei pievieno 12 līdz 15 ml iepriekšēja izkausētā un 44 - 47 ° C temperatūrā esošā standarta agara.

6) Dot gludas rotācijas kustības uz plāksnēm, lai vienmērīgi sadalītu paraugu agaram un ļautu cietināt.

7) Pagrieziet plāksnes un inkubējiet 37 ° C temperatūrā aerobiozi 24 līdz 48 stundas.

8) Kad laiks ir beidzies, turpiniet pārbaudīt plāksnes un skaitīt kolonijas atšķaidījumā, kas to atļauj. Tā ir izvēlēta, lai skaitītu tās plates, kurām ir no 30 līdz 300 CFU.

Skaitīšanu var veikt manuāli vai izmantot kolonijas skaitītāju aprīkojumu.

Pieļaujamās vērtības uz parauga mililitriem dažādās valstīs var atšķirties saskaņā ar standartiem, pēc kuriem tie tiek pārvaldīti.

-UFC aprēķins

Vispārējo aprēķinu veic, izmantojot šādu formulu:

Rezultātus izsaka ar 1 vai 2 cipariem, reizinot ar atbilstošo pamatni 10. Piemērs: ja rezultāts ir 16,545, tas ir noapaļots, pamatojoties uz trešo ciparu līdz 17.000 un tiks izteikts šādi: 1,7 x 10⁴. Tagad, ja rezultāts bija 16,436, tas ir noapaļots līdz 16 000 un tiek izteikts 1,6 x 10⁴.

Uz virsmas apstādītā tehnika

-Procedūra

-Ja ir šķidrums, sākotnējā suspensija 10 inokulē ar 0,1 ml tiešā parauga^-1 vai no secīgiem atšķaidījumiem 10^-2, 10^-3 utt. standarta konta agara plāksnes vidū.

-Paraugu vienmērīgi sadala ar Drigalski lāpstiņu vai L-veida stikla stienīti, ļaujiet nostāvēties 10 minūtes.

-Apgrieziet plāksnes un inkubējiet aerobiozi 37 ° C temperatūrā 24 līdz 48 stundas.

-Turpiniet skaitīt kolonijas, izvēlēties tās plāksnes, kas atrodas diapazonā no 20 līdz 250 CFU.

-UFC aprēķins

Aprēķināšanai izmanto atšķaidījuma koeficientu, kas ir apgriezts. Numurs ir noapaļots līdz 2 nozīmīgiem cipariem (noapaļošana saskaņā ar trešo ciparu) un izteikts 10 bāzes jaudā, piemēram, ja paraugā bez atšķaidīšanas tiek skaitīti 224 KVV (10^-1), Ziņots par 22 x 10¹  UFC, bet, ja skaitlis bija 225, tas tiek ziņots par 23 x 10¹ UFC.

Tagad, ja jūs skaitīsiet 199 CFU atšķaidījumā 10^-3, Tiks ziņots par 20 x 10⁴ UFC, bet, ja tajā pašā atšķaidījumā tiek aprēķināta 153 KVV, tiks ziņots par 15 x 10⁴ UFC.

Kvalitātes kontrole

Standartizēto barotni var novērtēt, izmantojot zināmus sertificētus celmus, piemēram: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Bacillus subtilis ATCC 6633, Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Shigella flexneri ATCC 12022.

Ja barotne ir optimālos apstākļos, visos gadījumos, izņemot L. fermentum kas var būt regulāri.

Lai novērtētu barotnes sterilitāti, vienu vai divas katras sagatavotās partijas plāksnes (neinokulētas) 24 stundas inkubē 37 ° C temperatūrā aerobioze. Šī laika beigās nedrīkst novērot barotnes augšanas vai krāsas maiņu..

Ierobežojumi

-Neizkausējiet agaru vairāk nekā vienu reizi.

-Sagatavotā barotne var ilgt līdz 3 mēnešiem, kamēr to uzglabā ledusskapī un pasargā no gaismas.

-Šī barotne nav piemērota prasīgiem mikroorganismiem un anaerobiem.

Atsauces

1. Zāļu valsts pārvalde Pārtikas un medicīnas tehnoloģijas (ANMAT). Pārtikas mikrobioloģiskā analīze, oficiālā analītiskā metodika, indikatoru mikroorganismi. 2014. gada 3. sējums. Pieejams: anmat.gov.ar
2. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories, S.A. Plāksnes grāfs Agars. 2009. Pieejams: http://f-soria.es
3. Laboratorijas Conda Pronadisa. Agar standarta metodēm (PCA) saskaņā ar APHA un ISO 4833. Pieejams: condalab.com
4. Laboratories Britania. Skaitīšana uz agara plāksnes. 2015. Pieejams: britanialab.com
5. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B un Velázquez O. 2009. Pārtikas produktu mikrobioloģiskās analīzes metodes. 2nd ed. Ķīmijas fakultāte, UNAM. Meksika Pieejams: depa.fquim.unam