Agar CLED pamats, izmantošana un sagatavošana



The CLED agars (Cistīns-laktozes-elektrolīti-trūkums) ir diferencēta cieta kultūras barotne, ko izmanto urīnceļu infekciju diagnosticēšanai. Kultivēšanas barotnes sastāvs ir paredzēts labam urīna patogēnu augšanai un ir ideāls koloniju veidojošo vienību (CFU) kvantitatīvai noteikšanai..

CLED kultūras barotne nav selektīva, jo tajā var augt gramnegatīvie un arī Gram-pozitīvie mikroorganismi. Bet tā nav problēma, jo vairumu urīnceļu infekciju izraisa viens mikroorganisma veids.

Polimikrobiālu infekciju gadījumā var iegūt 2 vai 3 dažādas baktērijas, bet tas ir ļoti reti un lielākoties tas ir piesārņots paraugs..

Gram-negatīvās baktērijas, kas var augt šajā barotnē, ir ģimenes piederīgie Enterobaktērijas un citas zarnās baktērijas, uropatogēni visbiežāk izdalīti urīna paraugos, šādi: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Morganella morganii, Pseudomonas aeruginosa, cita starpā.

Tāpat arī starp grampozitīvajām baktērijām, kas var augt šajā vidē, ir Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus, Enterococcus faecalis, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium sp, Lactobacillus sp. un viņi var pat audzēt raugu, piemēram, kompleksu Candida albicans.

Tomēr barotnes ķīmiskā sastāva dēļ tas neļauj augt dažiem auglīgiem urīnceļu patogēniem, piemēram, Neisseria gonorrhoeae, Gardnerella vaginalis, cita starpā.

Indekss

  • 1 CLED agara izveide
  • 2 CLED agara izveide (Bevis)
  • 3 Lietojumi
    • 3.1. Urīna paraugu sēšana
    • 3.2 Interpretācija
    • 3.3. Identifikācija
  • 4 Sagatavošana
  • 5 Atsauces

CLED agara izveide

CLED kultivēšanas barotnei kā gaļas ekstrakts ir kazeīns, aizkuņģa dziedzera hidrolizāts un želatīna hidrolizāts. Tie nodrošina barības vielas nevēlamu baktēriju attīstībai.

Tas satur arī cistīnu, aminoskābi, kas ļauj koliformu augšanu, kas atšķiras pēc tā mazā izmēra.

Tāpat laktoze satur fermentējamus ogļhidrātus, tādēļ šī barotne ir diferencēta; spēja atšķirt fermentējošās baktērijas no fermentācijas bez laktozes.

Fermentējošās baktērijas pagatavo barotnes pH, veidojot skābes, attīstot dzeltenas kolonijas, bet nefermentējošās baktērijas nerada izmaiņas vidē, tāpēc tās ņem sākotnējā agara krāsu, zaļu krāsu.

Fermentācijas reakciju atklāj, pateicoties pH indikatoram, kas šajā barotnē ir bromtimola zils.

No otras puses, zemā elektrolītu koncentrācija vidē kavē ģints tipisko invazīvo augšanu Proteus, sauc par rīšanas efektu. Tas rada priekšrocības attiecībā uz citiem līdzekļiem, jo ​​tas ļauj skaitīt UFC, tostarp, ja ir Proteus ģints klātbūtne..

Tomēr zemā elektrolītu koncentrācija kavē dažu ģints sugu augšanu Šigella, tas ir trūkums attiecībā uz citiem līdzekļiem.

CLED agara (Bevis) pamats

Šim medijam ir variants vai modifikācija, ko veica Bevis, kas sākotnējā kompozīcijā iekļāva sākotnējo fuksīna skābes sastāvu (Andrade indikators). Tā darbojas kopā ar bromtimola zilu, lai atšķirtu fermentāciju no nefermentējošām baktērijām.

Starpība starp parasto un modificēto vidi ir koloniju pieņemtā krāsa. Laktozes fermentējošo baktēriju gadījumā kolonijas iegūst sarkanīgi oranžu krāsu ar rozā vai sarkanu halo, bet nefermentējošās ir zilgani pelēkas..

Lietojumi

CLED agars tiek izmantots tikai urīna paraugu sēšanai. Šī vide ir īpaši izplatīta Eiropas laboratorijās, bet Amerikā to lieto mazāk.

Parauga savākšanai jāatbilst noteiktiem parametriem, lai iegūtu ticamus rezultātus, tostarp:

  • Pirms parauga lietošanas antibiotikas netiek lietotas.
  • Ieteicams ņemt urīnu no pirmās rīta stundas, jo tas ir koncentrētāks, ja nav iespējams ņemt paraugus ar invazīvām metodēm.
  • Pirms parauga ņemšanas rūpīgi nomazgājiet dzimumorgānus.
  • Izmetiet pirmo urinēšanas plūsmu un pēc tam ievietojiet trauku.
  • Savākt no 25 līdz 30 ml urīna sterilos marķētos traukos.
  • Nekavējoties nogādājiet ledus laboratorijā.
  • Tas jāapstrādā pirms 2 stundām vai vismaz 4 stundas atdzesē 4 ° C temperatūrā.

Urīna paraugu sēšana

Urīna paraugs jāatšķaida 1:50.

Atšķaidīšanai ievietojiet 0,5 ml pacienta urīna un atšķaida ar 24,5 ml sterila fizioloģiskā šķīduma.

Nosakiet 0,1 ml atšķaidītā urīna un sēj uz virsmas ar drigalski lāpstiņu uz CLED barotnes. Šī ir sēšanas metode, kas norādīta koloniju skaitīšanai. Tāpēc to lieto urīna paraugos, jo rezultāti jāizsaka CFU / ml.

Iegūto koloniju kvantitatīvai noteikšanai rīkojieties šādi: saskaitiet plāksnes kolonijas un reiziniet ar 10 un pēc tam ar 50. Šādā veidā jūs iegūstat CFU / ml urīna daudzumu..

Mutiskā tulkošana

Aprēķinot virs 100 000 CFU / ml -Indica urīna infekcijas

Skaitīšana zem 1000 CFU / ml - nav infekcijas

Aprēķinot starp 1000–10 000 CFU / ml -Vienkārša, iespējama piesārņojuma, atkārtotu paraugu ņemšanu.

Identifikācija

Kolonijas, kas audzētas uz CLED agara, jāizgatavo gramā, un atkarībā no mikroorganisma morfotogrāfiskajām īpašībām tiek veikta konkrēta subkultūra..

Piemēram, ja tas ir gramnegatīvs baciluss, tas tiks sēts uz MacConkey agara, kur tiek apstiprināta laktozes fermentācija. Turklāt, lai veiktu oksidāzes testu, ir pievienots barojošs agars.

Gadījumā, ja grams atklāj Gram-pozitīvos kokus, to var subkulturēt sāļā mannīta agārā un barojošā agārā. Pēdējā gadījumā tiek veikts katalāzes tests. Visbeidzot, ja tiek novēroti raugi, tas tiks sēts uz Sabouraud agara.

Daudzas laboratorijas novērš CLED barotnes izmantošanu un dod priekšroku tikai asins agaram, MacConkey un barojošam agaram, lai sētu urīna paraugus..

Sagatavošana

Flakonā ar vienu litru destilēta ūdens izšķīdina 36,2 g pulvera CLED agara. Pēc 5 minūšu miera beigām saskalojiet atkārtoti suspendēto agaru, nepārtraukti sajaucot līdz vārīšanās temperatūrai 1 minūti.

Tad sterilizē 121 ° C temperatūrā 15 minūtes autoklāvā. Kad laiks ir beidzies, tas tiek noņemts no autoklāvas un ļauj atdzist, līdz sasniedz 45 ° C temperatūru. Pēc tam katrā sterilajā Petri trauciņā tika pasniegti no 15 līdz 20 ml.

Lai izvairītos no piesārņojuma, plākšņu apkalpošanas procedūra jāveic laminārā plūsmas pārsegā vai Bunsen degļa priekšā..

Pasniegtajām plāksnēm ir atļauts sacietēt, tās tiek pasūtītas plāksnes turētājā apgrieztā veidā un uzglabātas ledusskapī (2-8 ° C) līdz lietošanai.

Sagatavotās barotnes galīgajam pH jābūt 7,3 ± 0,2.

Atsauces

  1. Ieteikumi urīnceļu infekcijas mikrobioloģiskai diagnostikai. čili infektols.  2001; 18 (1): 57-63. Pieejams: scielo.org.
  2. Panchi J. Mikrobioloģiskā līdzekļa identifikācija, kas izraisa urīnceļu infekcijas iekšējos pacientiem, kuriem tiek veikta urīnpūšļa kateterizācija. 2016.gads. Bakalaura darbs, lai pieteiktos licences ieguvēja klīniskajā laboratorijā nosaukumam. Ambato Tehniskā universitāte. Ekvadora.
  3. Laboratories Britania. Half CLED. Pieejams: britanialab.com.
  4. Renylab Laboratories Lietošanas instrukcija, CLED Agar. 2013 Pieejams: www.renylab.ind.br.
  5. Kultivētas laboratorijas Mikrobioloģijas pamatraksts. Pieejams vietnē: ictsl.net.
  6. Muñoz P, Cercenado E, Rodríguez-Créixems M, Díaz MD, Vicente T, Bouza E. CLED agara opcija urīna kultūras rutīnā. Perspektīvs un salīdzinošs novērtējums. Diagnostiskā Microbiol inficē Dis. 1992; 15 (4): 287-90.
  7. Garsija P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktiskā klīniskā mikrobioloģija. Kadisas Universitāte, 2. izdevums. UCA publikāciju dienests.