Simmons citrāta agara pamati, sagatavošana un izmantošana



The Simmons citrāta agars Tā ir cieta vide, ko izmanto kā bioķīmisku testu mikroorganismu, jo īpaši gramnegatīvu bacīļu, identificēšanai. Sākotnējo datu nesēju izveidoja Kosers 1923. gadā.

Kosera citrāta barotne sastāvēja no buljona, kas satur nātrija fosfātu, amonija fosfātu, monokālija fosfātu, magnija sulfātu un nātrija citrātu..

Kā redzams, vienīgais oglekļa avots vidē ir citrāts, un slāpeklis ir amonija fosfāts, olbaltumvielas un ogļhidrāti tiek izlaisti kā avots šiem elementiem, tie parasti ir citās barotnēs..

Tāpēc baktērija, kas inokulēta minētajā vidē, var reproducēties tikai tad, ja tā spēj uzņemt citrāta oglekli. Tests bija pozitīvs, ja vidē bija duļķainība, taču tam bija trūkums, ka var rasties nespecifiska duļķainība.

Šī problēma tika atrisināta Simmons, pievienojot agara un bromotimola zilās krāsas uz Kosera sākotnējo formulu. Lai gan šis princips ir vienāds, to interpretē atšķirīgi.

Indekss

  • 1 Fonds
    • 1.1 Sēšanas režīms
    • 1.2 Mutiskā tulkošana
  • 2 Sagatavošana
  • 3 Lietošana
  • 4 Galīgie apsvērumi
    • 4.1. Inokulāts
    • 4.2
    • 4.3 Krāsu intensitāte
  • 5 Atsauces

Fonds

Dažām baktērijām ir spēja izdzīvot, ja nav fermentācijas vai pienskābes ražošanas, kam nepieciešams enerģijas iegūšana, izmantojot citus substrātus. Šajā testā vienīgais piedāvātais oglekļa avots ir citrāts.

Baktērijas, kas spēj izdzīvot šajos apstākļos, ātri izdalās citrāts, izmantojot alternatīvu tradicionālajam ceļam, izmantojot trikarboksilskābes ciklu vai citrāta fermentācijas ciklu..

Citrāta baktēriju katabolisms ietver enzīmu mehānismu bez koenzīma A iejaukšanās. Šis enzīms ir pazīstams kā citrāze (citrāta oksaloacetāta-lāzāze) vai citrāta desmolāze. Reakcijai ir nepieciešama divvērtīga katjona klātbūtne, kas šajā gadījumā tiek piegādāta no magnija.

Reakcija rada oksaloacetātu un piruvātu, kas pēc tam rada organiskās skābes sārmainās pH vidū, kas rodas, izmantojot slāpekļa avotu. Šīs organiskās skābes tiek izmantotas kā oglekļa avots, radot karbonātus un bikarbonātus, vēl vairāk sārmainot vidi.

Sēšanas režīms

Simmons citrāta barotnei jābūt viegli inokulētai zivju asti, izmantojot taisnu cilpu vai adatu, un 24 stundas inkubē 35-37 ° C temperatūrā. Pēc laika beigām tiek novēroti rezultāti.

Sēšana tiek veikta tikai uz agara virsmas. Nelietojiet punkciju.

Mutiskā tulkošana

Ja vide ir sākotnējā krāsā (zaļā krāsā) un nav redzamas augšanas, tests ir negatīvs, bet, ja vidē mainās zils, tas norāda uz sārmu produktu klātbūtni, ko nosaka pH indikators. Šajā gadījumā tests ir pozitīvs.

Tas notiek tāpēc, ka, ja baktērijā tiek izmantots citrāta ogleklis, tas spēj ņemt arī amonija fosfāta slāpekli, ar kuru tas izdala amonjaku, sārmainot vidi..

No otras puses, ja vidē novēro baktēriju augšanu, bet nav mainījusies krāsa, tests arī ir uzskatāms par pozitīvu, jo, ja ir augšana, tas nozīmē, ka baktērijas varēja izmantot citrātu kā oglekļa avotu, lai gan pašlaik nav pH izmaiņu (dažreiz tas var notikt).

Ja rodas šaubas par galīgās krāsas interpretāciju, to var salīdzināt ar bezkrāsaina citrāta cauruli.

Sagatavošana

Vienu litru ūdens nosver 24,2 g dehidrētā vidē. Samaisa un ļaujiet nostāvēties apmēram 5 minūtes. Pabeidziet barotnes izšķīdināšanu, karsējot 1 vai 2 minūtes, bieži maisot.

Pasniedziet 4 ml testa mēģenēs un autoklāvā 121 ° C temperatūrā 15 minūtes. Izejot no autoklāvas, nolieciet ar balsta palīdzību tādā veidā, lai agars sacietētu flautas pīķa veidā ar mazu ķīli vai apakšējo daļu un vairāk slīpumu.

Citrāta vides galīgais pH ir 6,9 (zaļš). Šī barotne ir ļoti jutīga pret pH izmaiņām.

Pie pH 6 vai zemāk, barotne kļūst dzeltena. Šī krāsa nav novērota testā ar baktērijām.

Un pie pH 7,6 vai augstāka, vidējā vērtība mainās uz intensīvu Prūsijas zilo.

Izmantot

Simmons citrāta agars tiek izmantots noteiktu mikroorganismu, īpaši Enterobacteriaceae ģimenei piederīgo bacīļu un citu glikozes nesaturošu bacīļu identifikācijai..

Galīgie apsvērumi

Simmons citrāta barotne ir ļoti delikāts tests, jo, veicot noteiktas kļūdas, var iegūt viltus pozitīvus.

Ir jārūpējas par šādiem jautājumiem:

Inokulāts

Nenovietojiet ļoti biezu vai ielādētu baktēriju inokulātu, jo tas var izraisīt dzeltenās krāsas plankumainību stādīšanas vietā, neietekmējot pārējo barotni, bet tas var novest pie pārliecības par augšanu. Tas pats nenozīmē testa pozitivitāti.

Tāpat biezs inokulāts var radīt viltus pozitīvus rezultātus, jo iepriekš veidoti organiskie savienojumi mirstošo baktēriju šūnu sienās var atbrīvot pietiekami daudz oglekļa un slāpekļa, lai pagrieztu pH indikatoru.

Tāpēc ideāls ir, lai adatu izmantotu platīna roktura vietā, lai izvairītos no liekā materiāla.

Sēta

No otras puses, kad tiek organizēts bioķīmisko testu akumulators, lai identificētu attiecīgo mikroorganismu, ir svarīgi, lai citrāta tests būtu pirmais, kas jāpārbauda, ​​lai izvairītos no olbaltumvielu vai ogļhidrātu vilkšanas no cita barotnes.

Šādos apstākļos ir iespējams iegūt viltus pozitīvus, jo jebkura no šīm vielām, kuras ievada kļūdaini, tiks metabolizēta un izraisīs pH izmaiņas..

Vēl viens veids, kā izvairīties no vielu vilkšanas, ir labi apstrādāt rokturi un veikt jaunu inokulātu starp vienu testu un otru.

Jāievēro piesardzība, pieskaroties kolonijai, lai veiktu inokulātu, jo jāizvairās no agara izvilkšanas no kultūras, no kuras baktērijas nāk, iepriekš izskaidrot..

Šajā ziņā Matsen, Sherris un Branson iesaka inokulātu atšķaidīt fizioloģiskā šķīdumā pirms citrāta testa inokulēšanas, lai izvairītos no citu oglekļa avotu pārnešanas..

Krāsu intensitāte

Jāņem vērā, ka testa pozitīvās krāsas intensitāte var atšķirties atkarībā no komerciālās mājas.

Turklāt ir mikroorganismi, kas 24 stundu laikā pozitīvi pārbauda, ​​bet ir arī citi celmi, kas prasa 48 stundas vai vairāk, lai radītu pH izmaiņas..

Atsauces

  1. Mac Faddin J. (2003). Biochemiskie testi klīniski nozīmīgu baktēriju identificēšanai. 3. ed. Redakcijas Panamericana. Buenosairesa Argentīna.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobioloģiskā diagnoze. 12 ed. Redakcijas Panamericana S.A. Argentīna.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobioloģiskā diagnoze. 5. izdevums Redakcijas Panamericana S.A. Argentīna.
  4. BD laboratorijas BBL Simmons Citrate Agar Slants. 2015. Pieejams: bd.com
  5. Laboratories Britania. Simmons Citrate Agar. 2015. Pieejams: britanialab.com
  6. Valtek diagnostikas laboratorijas. Simmons Citrate Agar. 2016. Pieejams: andinamedica.com.