Agara šokolādes pamats, izmantošana un sagatavošana



The šokolādes agars tā ir cieta, bagātināta, neselektīva un nediferenciāla barotne. To galvenokārt izmanto, lai izolētu mikroorganismus, kas nepieciešami no uztura viedokļa, lai gan tā var augt jebkura veida baktērijas..

Tāpēc tā lietderība palielinās, it īpaši paraugu, kas parasti ir sterili, piemēram, CSF un locītavas šķidruma sēšanai. Lai gan tas ir iekļauts arī polimikrobiālo paraugu sēšanai izvēlētajos līdzekļos, tomēr šajos gadījumos ir nepieciešams pievienot antibiotikas, kas kavē vienlaicīgu floru.

Šai videi ir raksturīga brūna krāsa, kas ir ļoti līdzīga šokolādei, līdz ar to tā nosaukums. Preparāts ir ļoti līdzīgs asins agaram, tikai šajā gadījumā asinis jāuzsilda, lai sarkanās asins šūnas izjauktu.

Tās sagatavošana, tāpat kā asins agars, ir ļoti delikāta, jo tā ir viegli inficējama. Šī iemesla dēļ daudzas laboratorijas izvēlas iegādāties šo mediju, ko jau ir sagatavojušas komerciālās mājas, kas garantē to kvalitāti.

Indekss

  • 1 Fonds
  • 2 Lietojumi
    • 2.1 Šokolādes agars, kas sagatavots ar Kolumbijas agaru
    • 2.2. Šokolādes agars, kas sagatavots ar GC bāzes agaru (gonokokiem)
    • 2.3. Šokolādes agars, kas sagatavots ar Müeller Hinton agaru
    • 2.4 Šokolādes agars, kas sagatavots ar Thayer Martin agaru
  • 3 Sagatavošana
    • 3.1. Aprēķini
    • 3.2. Nosveriet un izšķīdiniet
    • 3.3 Sterilizēt
    • 3.4 Asins apkopošana
    • 3.5 Vēl viens veids, kā sagatavot šokolādes agaru, neizmantojot asinis
  • 4 Kvalitātes kontrole
  • 5 Atsauces

Fonds

Šis barotne sastāv no agara bāzes, kas bagāts ar barības vielām un sildāmām asinīm. Sarkano asins šūnu hemolīze nodrošina X faktoru (hemin) un faktoru V (NAD), kas nepieciešami dažu mikroorganismu, piemēram, ģints, augšanai. Haemophilus. Tas ir ļoti noderīgs arī izolācijai Neisserias sp.

Tāpat kā asins agars, atkarībā no vajadzības, kā bāzes agaru var izmantot arī dažādus materiālus. Izmantoto mediju vidū ir smadzeņu sirds infūzija un triptāzes sojas agars, lai gan visvairāk ieteicams ir Kolumbijas agars, Müeller Hinton, GC agars un Thayer Martin agars..

Dažos šokolādes agara variantos ir komerciāli pieejams bagātināts papildinājums, ko sauc par Isovitalex vai Polivitex.

Šīs piedevas satur B vitamīnu12, L-glutamīns, adenīns, guanīna hidrohlorīds, p-aminobenzoskābe, nikotinamīda adenīna dinukleotīds (NAD), tiamīna pirofosfāts, dzelzs nitrāts, tiamīna hidrohlorīds, cisteīna hidrohlorīds, L-cistīns un glikoze.

Ir svarīgi atzīmēt, ka šokolādes agars ir vairāk bagātināts nekā asins agars, bet neļauj novērot hemolīzes paraugus.

Lietojumi

Šokolādes agars, sagatavots ar Kolumbijas agaru

Šī barotne satur kazeīnu un sirds aizkuņģa dziedzeri, sagremotu gaļas peptīdu, nātrija hlorīdu, agaru, rauga ekstraktu un kukurūzas cieti. Tā ir bagāta ar vitamīniem, minerālvielām un neaizvietojamām aminoskābēm.

Šī bāze ar apsildāmām asinīm ir ideāla Neisseria ģints baktēriju izolācijai. No otras puses, ja barotnei pievieno papildinājumu Brucellai, iepriekšminēto mikroorganismu var izolēt. Rezultāti tiek uzlaboti, izmantojot zirgu asinis.

Šokolādes agars, sagatavots ar GC bāzes agaru (gonokokiem)

Šī barotne satur peptonus, kukurūzas cieti, monobāzes un dinamiska buferus, nātrija hlorīdu un agaru.

Lielākā daļa komerciāli sagatavotu šokolādes agara prezentāciju ir aprīkoti ar šo pamatni un nesatur sakarsētu asinsriti, bet gan sintētisku hemēna maisījumu un ķīmisko papildinājumu augšanas faktoriem, vitamīniem, minerālvielām, aminoskābēm, faktoru V un glikozi..

Šokolādes agars, kas sagatavots ar Müeller Hinton agaru

To lieto, lai veiktu mikroorganismu jutīgu testu, kas veikts ar prasīgiem mikroorganismiem, piemēram, Streptococcus pneumoniae izmantojot 5% sildāmu asins asiņu.

Tas kalpo arī Neisserias un Haemophilus primārajai izolācijai, bet īpašā gadījumā Haemophilus vēlams izmantot zirgu asinis, jo tas ir bagāts faktors X un V.

No otras puses, ja sējamais paraugs nāk no nesterilas teritorijas, ieteicams pievienot antibiotikas, lai inhibētu normālu šīs zonas floru..

Piemērs elpceļu paraugiem, ja ir aizdomas par ģints baktēriju klātbūtni Haemophilus Bacitracīnu lieto, lai inhibētu augšanu Staphylococcus, Micrococcus, Streptococcus un Saprophytic Neisseria.

Ja ir aizdomas par dzimumorgānu paraugiem Haemophilus ducreyi, Sekojošā veidā sagatavots šokolādes agars ir veiksmīgi izmantots: Müeller-Hinton agars ar 5% chocolatized zirgu asinīm, 1% Isovitalex bagātināšana un 3 μg / ml vankomicīns.

Šokolādes agars, kas sagatavots ar Thayer Martin agaru

Šis nesējs ir īpašs, lai izolētu Neisseria gonorrhoeae. Tajā jāiekļauj antibiotikas, lai kavētu pievienoto floru. Tiek lietots jēra asinis.

Sagatavošana

Ir jāaplūko izmantojamās bāzes agara sagatavošanas norādes. Tie atrodas dehidrētas vides paketes aizmugurē. Tie parasti apraksta, cik daudz ir jānosver, lai sagatavotu vienu litru barotnes.

Laboratorijā jūs varat sagatavot precīzu nepieciešamo daudzumu, tas var būt vairāk vai mazāk par vienu litru.

Aprēķini

Tiek pieņemts trīs noteikumu noteikums, lai aprēķinātu, cik daudz būtu jānosver, lai sagatavotu vēlamo tilpumu. Piemērs:

Ja uz 1 litru ir nepieciešams nosvērt 40 gr un laboratorijai ir vajadzīgi 800 ml, ir teikts:

1000 ml -40 gr

800 ml - X

Formula būs šāda:

X = 32 gr (daudzums, kas sver 800 ml).

Nosver un izšķīdina

Mēs turpinām nosvērt nepieciešamo daudzumu un ievietot to ar ūdeni fiolā.

Karsē līdz mērenam karstumam un viegli sajauciet ar rotācijas kustībām, līdz dehidrētā vide ir pilnībā izšķīdusi, atstājot to 1 min..

Sterilizējiet

Fiola tiek ievietota autoklāvā, lai sterilizētu barotni 121 ° C temperatūrā 20 minūtes.

Asins kopums

Atstājot autoklāvu, tas paliek atpūsties, līdz vides temperatūra ir aptuveni no 56 līdz 70 ° C, lai ievietotu asinis un sajauktu, līdz vidē kļūst brūna.

Ja jūs plānojat pievienot papildinājumus, tas ir laiks to darīt. Pēc tam samaisa un katram sterilam Petri trauciņam pasniedz 20 ml.

Visa procedūra jāveic laminārā plūsmas pārsegā vai ap Bunsen degli.

Ļaujiet stāvēt, līdz tie sacietē, un turiet apgrieztu ledusskapī.

Vēl viens veids, kā sagatavot šokolādes agaru, neizmantojot asinis

Bāzes barotne tiek pagatavota, kā aprakstīts iepriekš, komerciāli iegūtais dehidrēts hemoglobīns tiek izšķīdināts un sterilizēts autoklāvā..

Abiem šķīdumiem ļauj atdzist līdz 50 ° C, pievienoties un pievienot papildinājumu. Samaisa aseptiskos apstākļos un pēc tam pasniedz sterilos Petri trauciņos.

Kvalitātes kontrole

Ir svarīgi, lai asinis tiktu ievietotas norādītajā temperatūrā, jo tas ir ideāls sarkano asinsķermenīšu lizei un tajā pašā laikā uzturēt termosensitīvu faktoru V.

Uz agara virsmas nedrīkst būt burbuļu. Lai pārbaudītu tā sterilitāti, katru 100 plākšņu partiju inkubē vienu vai divas plāksnes plīts virsmā 37 ° C temperatūrā 24 stundas..

Lai iegūtu vislabākos rezultātus, šokolādes agars ir jāizlieto neilgi pēc sagatavošanas.

Laboratorijā jāveic kontroles baktēriju celmi, lai novērtētu svaigi pagatavotā barotnes efektivitāti, lai augtu galvenos, nozīmīgos klīniski nozīmīgos mikroorganismus..

Atsauces

  1. Garsija P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktiskā klīniskā mikrobioloģija. Kadisas Universitāte, 2. izdevums. UCA publikāciju dienests.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobioloģiskā diagnoze. 12 ed. Argentīna Panamericana S.A Redaktors.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobioloģiskā diagnoze. (5. izdevums). Argentīna, Redakcijas Panamericana S.A..
  4. Llanes R, Reyes A, Rodríguez C, Guzmán D, Llop A. GC-Biocen Agar bāzes kultūras barotnes izmantošanas iespējamība mikrobioloģijas laboratorijā. Rev Cubana Med Trop,  2004; 56 (3): 237-238. Pieejams: scielo.sld.
  5. Wikipedia dalībnieki. Šokolādes agars. Vikipēdija, brīvā enciklopēdija. 2018. gada 17. decembris, 19:54 UTC. Pieejams: en.wikipedia.org.