Agar BHI pamats, sagatavošana un izmantošana



The BHI agars vai smadzeņu sirds infūzijas agars ir barojoša cieta barotne. Spāņu valodā mēs to saucam par smadzeņu sirds infūzijas agaru. Tā ir neselektīva barotne, kas nozīmē, ka var attīstīties visi Gram-pozitīvo un gramnegatīvo baktēriju veidi, kā arī dažas rauga un pavedienu sēnītes.

Tas sastāv no teļa galvas un sirds infūzijas, dzīvnieku audu peptiskā hidrolizāta, kazeīna aizkuņģa hidrolizāta, nātrija hlorīda, glikozes, dinātrija fosfāta un agara..

Jāatzīmē, ka BHI agars ir viena no visbiežāk sastopamajām barotnēm bakterioloģijas laboratorijās. To var izmantot bez piedevām kā primāro kultūru, citās selektīvās barotnēs iegūto koloniju subkultūru vai celmu uzturēšanu laboratorijā..

No otras puses, tas ir ideāls līdzeklis, ko izmanto kā pamatu bagātinātu barotņu, piemēram, asins agara un šokolādes agara, pagatavošanai. Abi ir ideāli, lai izolētu prasīgos mikroorganismus no uztura viedokļa. Tomēr jāņem vērā, ka, tā kā tas satur glikozi, nav pietiekami novērot hemolīzes paraugus.

Tāpat BHI agaru var izmantot speciālu līdzekļu sagatavošanai patogēno mikroorganismu izolēšanai, kuriem ir grūti augt kopējās barotnēs. Haemophilus sp, Francisella tularensis, Corynebacterium diphtheriae un Histoplasma capsulatum.

Ar antibiotiku piedevu BHI agars kļūst par selektīvu sēnīšu izolācijas vidi.

Indekss

  • 1 Fonds
  • 2 Sagatavošana
    • 2.1 Ķīļi
    • 2.2. Plāksnes
    • 2.3 Asins agara sagatavošana
  • 3 Lietojumi
    • 3.1 Izmantot bez papildinājumiem
    • 3.2. Bāzes agars citu barotņu pagatavošanai
  • 4 Kvalitātes kontrole
  • 5 Atsauces

Fonds

Tā ir barojoša barotne, lai izolētu vidēji prasīgus mikroorganismus, palielinot tā bagātināšanos, pievienojot asinis un citus uztura bagātinātājus..

Tā ir neselektīva barotne, tāpēc tā ļauj augt lielākajā daļā Gram-pozitīvo un gramnegatīvo baktēriju, kā arī dažas sēnītes. Tomēr tas var kļūt selektīvs, pievienojot antibiotikas.

Barotne satur teļa smadzeņu un sirds infūziju, peptīdu hidrolizātu no dzīvnieku audiem un kazeīna aizkuņģa dziedzeru hidrolizātu; visi šie savienojumi darbojas kā vitamīnu, aminoskābju, slāpekļa un oglekļa avots.

Glikoze ir ogļhidrāts, kas nodrošina enerģiju mikroorganismiem, kad tie ir fermentēti. Tā kā nātrija hlorīds un dinātrija fosfāts saglabā osmotisko līdzsvaru un nodrošina pH tuvu neitralitātei. Visbeidzot, agars nodrošina vidē cietu konsistenci.

Sagatavošana

Nosver 52 gramus dehidrētas vides un izšķīdina vienā litrā destilēta ūdens. Sajauciet maisījumu uz siltuma avotu, līdz tas vārās, bieži izšķīdināšanas procesā.

Jūs varat sagatavot ķīļus vai plāksnes no BHI agara bez piedevām.

Ķīļi

Lai sagatavotu ķīļus, sagatavojiet preparātu, līdz piepilda pusi no katras caurules, pārklāj un sterilizē autoklāvā 121 ° C temperatūrā 15 minūtes, kad iziet uz pamatnes, līdz tie sacietē. Pēc tam uzglabāt ledusskapī līdz lietošanai.

Plāksnes

Izšķīdināto maisījumu autoklavē 121 ° C temperatūrā 15 minūtes, kad tas atstāj, tam ļauj atdzist līdz 50 ° C, un 20 ml barotnes tiek pasniegtas sterilos Petri trauciņos. Tām ļauj sacietēt, invertēt un uzglabāt ledusskapī, līdz tās tiek izmantotas. Pirms stādīšanas ļaujiet plāksnēm ņemt istabas temperatūru.

Vidēja pH jābūt 7,4 ± 0,2.

Sagatavotais nesējs ir bēšs un sagatavots gaiši dzintara krāsā.

Asins agara sagatavošana

Pēc barotnes sterilizēšanas atdzesē līdz apmēram 45 līdz 50 ° C temperatūrai, šajā laikā pievieno asinis (50 ml), viegli samaisa, lai homogenizētu un aseptiski katram Petri trauciņam uzklāj 20 ml. Ja uz plāksnes veidojas burbuļi, degļa liesma ir ātri jānovieto caur burbuļiem, lai tos novērstu.

Līdzīgi, īpašus materiālus var pagatavot, pievienojot atbilstošās piedevas, kad maisījums sasniedz temperatūru no 45 līdz 50 ° C.

Vidēja ir ķiršu sarkana.

Lietojumi

Izmantot bez papildinājumiem

BHI agars bez piedevām ir noderīgs kā primārā kultūra un tīru mikroorganismu celmu stādīšanai, kas ir vidēji vai vidēji prasīgi vēlākai identifikācijai..

Tā kā tā ir gaiša krāsa, tā ir ideāli piemērota pigmentu novērošanai, kā arī tāpēc, ka tajā nav traucējošu vielu, to var izmantot, lai veiktu bioķīmiskos testus, piemēram, oksidāzi un katalāzi, vai arī no citiem biokemiskiem testiem no šīm kolonijām. agars.

Līdzīgi BHI agara ķīļi tiek plaši izmantoti celmu uzturēšanai noteiktā laikā laboratorijā (bakterioteka)..

Plātnes vai ķīļus, kas apstādīti uz virsmas ar baktēriju celmiem, inkubē 37 ° C temperatūrā 24 līdz 48 stundas. Kaut gan sēnītēs temperatūra un inkubācijas laiks būs atkarīgi no meklējamās sēnītes veida.

Kā bāzes agars citu barotņu pagatavošanai

Ar šo bāzi var sagatavot bagātinātu un selektīvu materiālu.

Bagātināts

Tās galvenā funkcija ir kalpot par pamatu asins agara sagatavošanai ikdienas lietošanai mikrobioloģijas laboratorijās. Jo īpaši BHI bāze veicina celmu izolāciju Streptococcus sp. Tomēr tā trūkums ir tas, ka tas nav piemērots hemolīzes modeļu novērošanai, jo tas satur glikozi.

To izmanto arī trušu vai zirgu asins agara pagatavošanai, lai izolētu Haemophilus sp. Lai iegūtu labākus rezultātus, varat pievienot bagātināšanas papildinājumu (IsoVitaleX).

Ja paraugi nāk no elpošanas trakta uz agaru, var pievienot bacitracīnu, lai inhibētu pievienoto floru un palielinātu varbūtību, ka var atgūt celmus. Haemophilus sp.

No otras puses, asins agaru (jēra vai cilvēka) var sagatavot ar tellurīta cistīnu, lai izolētu Corynebacterium diphtheriae. Tāpat ir lietderīgi sagatavot trušu asins agaru, pievienojot cistīnu un glikozi. Francisella tularensis.

Asins agara plākšņu sēšana notiek, izsmidzinot un inkubējot 35-37 ° C temperatūrā 24-48 stundas mikroaerofilā (5-10% CO).2).

Selektīvs

Šis līdzeklis ar antibiotiku pievienošanu var aizstāt Sabouraud agaru sēņu izolēšanai.

BHI agara kombinācija ar hloramfenikolu - gentamicīnu vai penicilīnu -, streptomicīnu un zirgu asinīm ir ideāla, lai izolētu Histoplasma capsulatum.

Atkarībā no izolējamā mikroorganisma ieteicams inkubēt aerobiozi 35-37 ° C temperatūrā vai istabas temperatūrā. Dažreiz inkubācija ir nepieciešama abos temperatūras diapazonos, šim nolūkam izmantojot 2 plāksnes.

Dažas sēnes patīk Trichophyton mentagrophytes tos inkubē istabas temperatūrā līdz 7 dienām.

Kvalitātes kontrole

No katras sagatavotās partijas ieteicams inkubēt 1 plāksni vai ķīli 37 ° C temperatūrā 24 stundas un pārbaudīt, vai nav augšanas; Īpaši svarīgi, sagatavojot asins agaru, jo tas ir viegli piesārņots līdzeklis.

No otras puses, barotnes kvalitāti var novērtēt, inokulējot zināmus vai sertificētus standarta celmus un novērojot to attīstību.

Šajā ziņā novērtēt BHI agaru bez piedevām Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923 vai Candida albicans ATCC 10231. Tos inkubē 37 ° C temperatūrā aerobiozi 24 līdz 48 stundas. Visos gadījumos ir sagaidāma apmierinoša izaugsme.

Novērtēt asins agara plāksnes,. \ T  Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 vai Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533.

Baktēriju celmus inkubē 37 ° C temperatūrā microaerophilicus 24 stundas, bet sēnīti inkubē istabas temperatūrā mitrā kamerā līdz 7 dienām. Visos gadījumos ir sagaidāma apmierinoša izaugsme.

Atsauces

  1. Laboratories Britania. Smadzeņu sirds infūzijas agars. 2015. Pieejams: britanialab.com.
  2. BD laboratorijas Smadzeņu sirds infūzijas (BHI) agars. 2013. Pieejams: bd.com.
  3. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories, S.A. Smadzeņu sirds infūzijas agars. 2009. gads.
  4. Neogēnu laboratorija. Smadzeņu sirds infūzijas agars. Pieejams: foodsafety.neogen.com
  5. Gil M. Agara asinis: pamats, izmantošana un sagatavošana. 2018. Pieejams: lifeder.com.
  6. Wikipedia dalībnieki. Smadzeņu sirds infūzija Vikipēdija, brīvā enciklopēdija. 2018. gada 19. septembris, 03:58 UTC. Pieejams vietnē: wikipedia.org. Piekļuve 2019. gada 2. martam.
  7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobioloģiskā diagnoze. 12 ed. Redakcijas Panamericana S.A. Argentīna.