Baird Parker Agar pamats, sagatavošana un izmantošana

The Baird Parker agars tā ir cieta, selektīva un diferenciāla barotne. Tas tika izveidots 1962. gadā, lai atklātu un koagulētu pozitīvo Staphylococcus skaitīšanu (Staphylococcus aureus).

Tas sastāv no kazeīna aizkuņģa hidrolizāta, gaļas ekstrakta, rauga ekstrakta, litija hlorīda, glicīna, nātrija piruvāta, kālija Tellurīta, agara un olu dzeltenuma emulsijas..

Baird Parker agars ir balstīts uz S. aureus samazinot telurītu un ražojot lecitināzi. Abas īpašības rada koloniju ar specifiskām īpašībām šai sugai. Tāpēc tas nodrošina lielu efektivitāti šī mikroorganisma noteikšanā.

Tipiskās. \ T S. aureus tie ir melni vai tumši pelēki, ar bezkrāsainu robežu un skaidru halo, kas tos ieskauj, atšķiroties no pārējiem mikroorganismiem. Šo patogēnu var atrast klīniskos paraugos, ūdeņos, kosmētikā un neapstrādātos vai vārītos pārtikas produktos.

Tās diagnoze vai noteikšana ir ļoti svarīga, jo tā rada dažādas patoloģijas, piemēram, saindēšanās ar pārtiku, ādas plaušu sindroms, toksiska šoka sindroms, abscesi, meningīts, septicēmija, endokardīts..

Indekss

• 1 Fonds
  • 1.1. Uzturvērtība
  • 1.2. Selektīva
  • 1.3 Diferenciālis
• 2 Sagatavošana
  • 2.1. Olu dzeltenuma emulsija
  • 2.2 Kālija telurīts ar 1% w / v
  • 2.3. Kultūras barotnes sagatavošana
• 3 Lietošana
  • 3.1 Klīniskie paraugi
  • 3.2 Pārtikas paraugi
  • 3.3 Ūdens paraugi
• 4 Kvalitātes kontrole
• 5 ieteikumi
• 6 Atsauces

Fonds

Barojoša jauda

Kazeīna aizkuņģa dziedzera hidrolizāts, gaļas ekstrakts un rauga ekstrakts ir barības vielu, vitamīnu un minerālvielu avoti, kas nepieciešami vispārējai mikrobu attīstībai, savukārt piruvāts un glicīns ir savienojumi, kas veicina specifisku augšanu. Staphylococcus aureus.

Selektīvs

Baird Parker agars ir selektīvs, jo tas satur vielas, kas kavē pievienotās floras augšanu, vienlaikus veicinot augļa attīstību. S. aureus. Inhibitori ir litija hlorīds un kālija tellurs.

Diferenciālis

Tas nozīmē, ka var atšķirt S. aureus no pārējiem koagulāzes negatīvajiem stafilokokiem. S. aureus ir spēja samazināt tellurītu ar melnu metālu brīvu tellūriju, veidojot melnas vai tumši pelēkas kolonijas.

Tāpat olu dzeltenums nodrošina substrātiem pierādījumus par lecitināzes un lipāzes enzīma klātbūtni. S. aureus tā ir pozitīva lecitināze, un tādēļ ap koloniju tiks novērota skaidra halo, kas norāda, ka lecitīns ir hidrolizēts..

Šajā ziņā melnā vai tumšā pelēkā koloniju parādīšanās šajā agarā, kas ir spilgti ap gaismu, norāda uz to klātbūtni S. aureus. 

Ja veidojas nokrišņu zona, ir norāde uz to, ka ir lipāzes aktivitāte. Daži. \ T S. aureus tie ir pozitīvi lipāzes un citi negatīvi.

Gadījumā, ja S. aureus Ja lipāze ir pozitīva, ap melno vai tumšo pelēko koloniju tiks novērota necaurspīdīga zona, un pēc tam lecitināzes iedarbības dēļ - dzidrais halo..

Baktēriju kolonijas, izņemot S. aureus augt šajā vidē, attīstīsies bezkrāsainas vai brūnas kolonijas, bez apkārtējās vides.

Netipiskas melnās kolonijas var novērot arī bez vai bez bezkrāsainas robežas, bet bez skaidras halo. Šīs kolonijas nav jāņem vērā, tās neatbilst S. aureus.

Sagatavošana

Olu dzeltenuma emulsija

Ņem svaigu vistas olu, nomazgājiet to labi un novietojiet 2 līdz 3 stundas 70% alkohola. Tad ola atveras aseptiski un olu baltums ir rūpīgi atdalīts no dzeltenuma. Pēc tam tiek paņemti 50 ml dzeltenuma un sajaukti ar 50 ml sterila fizioloģiskā šķīduma.

Kālija telurīts ar 1% w / v

Dažas komerciālas mājas pārdod 1% kālija tellurītu, kas ir gatavs lietošanai. Tas tiek pievienots barotnei pirms barotnes sacietēšanas.

Lai pagatavotu šo šķīdumu laboratorijā, nosver 1,0 g kālija tellurīta un izšķīdina ūdenī. Pēc tam ūdens daudzums tiek pabeigts līdz 100 ml. Šķīdums jāsterilizē ar filtrēšanas metodi.

Barotnes sagatavošana

Nosver 60 g dehidrētas vides un izšķīdina 940 ml destilēta ūdens. Atstājiet maisījumu apmēram 5 līdz 10 minūtes.

Lai uzlabotu šķīdināšanas procesu, uzklājiet siltumu, bieži maisot. Ļaujiet vārīties vienu minūti. Sterilizē autoklāvā 121 ° C temperatūrā 15 minūtes.

Ļauj nostāvēties līdz 45 ° C temperatūrai un pievieno 50 ml olas dzeltenuma emulsijas un 10 ml 1% telurīta. Labi samaisa un uz steriliem Petri trauciņiem pasniedz 15 līdz 20 ml.

Ļaujiet sacietēt, kārtot apgrieztā kārtā un uzglabāt ledusskapī līdz lietošanai.

Sagatavotās vides galīgajam pH jābūt 6,8 ± 0,2.

Pirms parauga stādīšanas pagaidiet, līdz plāksne ņem apkārtējo temperatūru. Sējiet plāksnes ar stiegrojumu vai sējot uz virsmas ar Drigalski lāpstiņu.

Dehidrētās vides krāsa ir gaiši iedegusi, un sagatavotās vides krāsa ir gaiši dzintara.

Izmantot

Klīniskie paraugi

Klīniskie paraugi tiek sēklas tieši, izvadot daļu no materiāla vienā plāksnes galā, un no tā tas izzūd. Inkubējiet 24 līdz 48 stundas 35-37 ° C temperatūrā.

Pārtikas paraugi

Nosver 10 g pārtikas parauga un homogenizē 90 ml 0,1% peptonēta ūdens, vajadzības gadījumā sagatavo atšķaidījumus. Plātnes inokulē trīs reizes ar 0,3 ml sagatavoto šķīdumu un sēj uz virsmas ar Drigalski lāpstiņu. Inkubējiet 24 līdz 48 stundas 35-37 ° C temperatūrā.

Šī metodika ļauj aprēķināt iegūtās tipiskās kolonijas un ir ideāla, ja ir klātbūtne S. aureus virs 10 CFU uz g / ml parauga.

Ja jums ir aizdomas, ka summa ir S. aureus tas ir mazs vai ir daudz pievienotas floras, ieteicams bagātināt paraugu tripticase sojas buljonā ar 10% NaCl un 1% nātrija piruvātu. Tas veicinās izaugsmi S. aureus un kavēs pievienotās floras attīstību. Mākoņainas caurules tiks sētas uz Baird Parker agara.

Ūdens paraugi

Vakuuma filtrēšanas sistēmā un sterilizē 100 ml ūdens filtrē, tad 0,4 mikronu mikroporaina membrāna tiek noņemta ar sterilu skavu un ievietota Baird Parker plāksnē. Inkubē 24 līdz 48 stundas 35-37 ° C temperatūrā. Šī metode ļauj skaitīt tipiskas kolonijas S. aureus.

Kvalitātes kontrole

Lai novērtētu Baird Parker agara kvalitāti, var izmantot zināmus celmus, piemēram, Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 vai Proteus mirabilis ATCC 43071.

Attiecībā uz. \ T S. aureus Ir zināms, ka ATCC samazina telurītu, un tās ir pozitīvas lipāzes un lecitināzes. Tāpēc ir jābūt apmierinošai attīstībai un izliektām kolonijām ar melnu centru un bezkrāsainu malu, ar necaurspīdīgu halo un citu ārējo skaidrību..

No otras puses, S. epidermidis šajā vidē ir sagaidāma slikta attīstība ar pelēcīgi brūnu vai melnu koloniju, bez skaidras halo.

Uz E. coli un P. mirabilis paredzams, ka tas būs pilnīgi vai daļēji inhibēts. Augšanas gadījumā brūnas kolonijas attīstīsies bez necaurspīdīgas zonas, kā arī nebūs skaidrs halo.

Ieteikumi

-Mediju nedrīkst uzsildīt pēc tam, kad pievienots tellurs un dzeltenums.

-Olu dzeltenuma emulsijas sagatavošana un pievienošana vidē ir ļoti neaizsargāts piesārņojuma posms. Īpaši jārūpējas.

-Ja ir tipiskas. \ T S. aureus jāapstiprina, nostiprinot koagulāzes testu minētajam celmam.

-Ja ar koagulāzi rodas šaubīgi rezultāti, jāapstiprina citi apstiprinošie testi.

-Esiet uzmanīgi, lai nesajauktu tipisko koloniju klātbūtni S. aureus ar netipiskām melnās krāsas kolonijām.

Atsauces

1. Wikipedia dalībnieki. Baird-Parker agars. Vikipēdija, brīvā enciklopēdija. 2017. gada 15. marts, 19:36 UTC. Pieejams: wikipedia.org/ Piekļuve 2019. gada 18. februārim.
2. BD laboratorijas. Baird Parker Agar. 2006. Pieejams: bd.com
3. Laboratories Britania. Baird Parker agara bāze. 2015. Pieejams: britanialab.com
4. Francisco Soria Melguizo Laboratories. 2009. Baird Parker Agar. Pieejams: http://f-soria.es/Inform
5. Laboratories Britania. Kālija tellurs. 2015. Pieejams: britanialab.com
6. Alarcón-Lavín M, Oyarzo C, Escudero C, Cerda-Leal F, Valenzuela F. Staphylococcus aureus A tipa enterotoksigēnās barības nasofaringālās uztriepes. Rev Med Čīle 2017; 145: 1559-1564
7. Venecuēlas standarts Covenin 1292-89. (1989). Pārtika Izolēšana un skaitīšana Staphylococcus aureus. Pieejams:sencamer.gob.ve