Voges-Proskauer testa pamats, sagatavošana un izmantošana



The Voges-Proskauer tests ir bioķīmisks tests, ko izmanto, lai palīdzētu identificēt Enterobacteriaceae ģimenei piederošās baktērijas. Īpaši ir lietderīgi diferencēt Escherichia coli no Klebsiella un Enterobacter, cita starpā.

Tests tiek veikts šķidrā barotnē, ko sauc par metilsarkano-Voges Proskauer, labāk pazīstams ar akronīmu RM / VP. Šo barotni veido buferēts poliponons, glikoze, dikālija fosfāts un destilēts ūdens.

Pašreizējā RM / VP vide ir Clark un Lubs vides modifikācija, kas sākotnēji satur mazāku peptonu un glikozes koncentrāciju. Tāpēc tika saražots mazāk ūdeņraža jonu, kas vajadzīgs pozitīvai Voges-Proskauer reakcijai.

Tests ir balstīta uz spēju mikroorganisma izmantot glikozi, izmantojot butilēnglikola, un veido gala neitrālu produktu sauc acetoīnu klātbūtnē skābekļa un sārmaina pH.

RM / VP vidē papildus tam, lai varētu atklāt Voges-Proskauer testu, var tikt atklāts arī metilsarkanais tests..

Indekss

  • 1 Fonds
    • 1.1. Voges-Proskauer testa pamats
    • 1.2. Pārbaudes un interpretācijas izstrādes pamats
  • 2 Sagatavošana
    • 2.1. Vidējs RM / VP
    • 2.2. Voges A Reaģents
    • 2.3. Voges B reaģents
  • 3 Voges-Proskauer testa procedūra
    • 3.1. Testa izstrāde
  • 4 Lietošana
  • 5 Kvalitātes kontrole
  • 6 Atsauces

Fonds

Voges-Proskauer testa pamats

Vidē esošie pluripeptoni nodrošina baktēriju augšanai nepieciešamās uzturvērtības. Savukārt glikoze ir galvenais savienojums. Daudzām baktērijām ir spēja metabolizēt glikozi un veidot piruvīnskābi.

Pirovīnogskābes ir viduspunktā glikozes vielmaiņu un no turienes katrs mikroorganisms var veikt dažādus ceļus. Daži jaukta forma, piemēram, pienskābes, etiķskābes, skudrskābes un dzintarskābes, un citiem neitrāliem produktiem veidojas kā 2,3-butāndiola.

Voges Proskauer test-The atklāj spēju mikroorganisma, lai veidotu acetilgrupu carbinol metil (acetoīnu), starpprodukts-2,3-butāndiolu aerobos apstākļos.

Acetoīns ir reducēts un veido 2,3-butāndiolu, bet šī reakcija ir atgriezeniska, tādēļ, ja oksidējas 2,3-butāndiols, veidojas acetoīns. Tāpēc skābeklis ir būtisks.

Dikālija fosfāts ir buferis, kas mitrina maisījumu ar pH 6,9 ± 0,2..

Pārbaudes un interpretācijas izstrādes pamats

Lai pierādītu reakciju, jāveic attīstība, izmantojot divus reaģentus (Barrit reaģentus), kas pazīstami kā Voges A un Voges B.

Voges A ir α-naftola 5% šķīdums un Voges B ir 40% kālija hidroksīda preparāts. Ja nav pieejams kālija hidroksīds, to var aizstāt ar 40% nātrija hidroksīdu.

Α-naftols ir katalizators, kas palielinās reakcijas krāsas intensitāti, kas padara testu jutīgāku. Vispirms vispirms jāpievieno a-naftols, maisot maisījumu tā, lai barotne nonāktu saskarē ar skābekli. Šādā veidā esošais acetoīns oksidējas līdz diacetilam, un 2,3-butāndiols oksidējas, veidojot acetoīnu, nododot to diacetilam.

Tādējādi α-naftols pievienoties diacetiltartarskābes, kas, savukārt, ir savienoti ar guanidīna kodols klāt aminoskābes arginīns, pēdējais no pluripeptonas.

Savukārt kālija vai nātrija hidroksīds ir atbildīgs par CO absorbēšanu2 un reaģē ar peptoniem. Šī reakcija izraisa rozā-laša krāsas veidošanos, kas ir skaidri redzama pēc tam, kad ļoti labi sakrata caurule.

Lai krāsa uzreiz parādītos, ir jāsajauc pareizie diacetilgrupas, peptona un α-naftola daudzumi. Ja tas nenotiek, pirms tulkošanas ļaujiet mēģenei palikt 15 minūtes.

Parasti tests ir pozitīvs pēc 2 līdz 5 minūtēm, kad var novērot vāju rozā krāsu. Ja paliek mierā 30 minūtes līdz 1 stundai, krāsas intensitāte būs maksimāla (dziļi sarkana).

Negatīvs tests būs redzams, kad buljons ir dzeltens. Pēc vienas stundas, ja tests ir negatīvs, kālija hidroksīda reakcija uz α-naftolu var veidoties ar vara krāsu..

Sagatavošana

Medium RM / VP

Nosver 17 g dehidrētas barotnes un izšķīdina vienā litrā destilēta ūdens. Ļaujiet nostāvēties 5 minūtes. Karsē līdz vārīšanai, lai pilnībā izšķīdinātu. Pasniedz 3 līdz 4 ml mēģenēs un sterilizē autoklāvā 121 ° C temperatūrā 15 minūtes.

Dehidrētā barotne ir bēša, un sagatavotā barotne ir gaiši dzintara.

Vidēja pH ir 6,9 ± 0,2.

Voges A reaģents

Nosver 5 g α-naftola un izšķīdina 50 ml etilspirta (absolūtā). Pēc tam turpina pievienot etilspirtu, lai uzpildītu līdz 100 ml.

Reaģents Voges B

Nosver 40 g kālija hidroksīda un izšķīdina 50 ml destilēta ūdens vārglāzē. Stikls jānovieto aukstā ūdens vannā, lai kontrolētu temperatūru, jo preparāta izšķīdināšanas laikā strauji palielinās.

Pēc tam, kad šķīdums ir auksts, tas tiek pārnests uz gradēto balonu un līdz 100 ml tiek destilēts ar destilētu ūdeni.

Voges-Proskauer testa procedūra

Lai veiktu Voges-Proskauer testu, RM / VP buljonu inokulē ar pētāmo mikroorganismu no tīras kultūras no 18 līdz 24 stundām..

Inokulātam nevajadzētu būt pārāk blīvam. To inkubē 35-37 ° C temperatūrā 24 līdz 48 stundas, lai gan dažkārt inkubācija ir nepieciešama vairākas dienas. Cowan un Steel uzskata, ka 5 dienas ir minimālais inkubācijas laiks, kas nepieciešams, lai atklātu visas pozitīvās Voges-Proskauer (VP) sugas Enterobacteriaceae ģimenē.

Testa izstrāde

Atdala 1 ml alikvotu par caurulīti un veikt atklāja šādi: vieta 12 pilienus (0.6 mL) Voges A reaģenta un 4 pilienus (0,2 ml) Voges B. Mix un ļauj stāvēt gāzēšanai 5 - 10 minūtes pirms veikšanas. Tomēr, ja tests joprojām ir negatīvs, ļaujiet tai stāvēt un novērot cauruli pēc 30 minūtēm līdz 1 stundai.

Rozā-sarkanās krāsas izskats norāda, ka Voges-Proskauer reakcija ir pozitīva. Ja barotne paliek dzeltena, reakcija ir negatīva.

Izstrādātāju pievienošana norādītajā secībā un daudzumā ir būtiska, lai izvairītos no viltus negatīviem.

Izmantot

Voges-Proskauer tests ir noderīgs, lai nošķirtu E. coli Klebsiella, Enterobacter, Serratia ģints, kas ir VP pozitīvi.

Kvalitātes kontrole

Kontroles celmus var izmantot, lai pārbaudītu sagatavotās vides kvalitāti. Escherichia coli ATCC 25922, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Proteus mirabilis ATCC 43071, Salmonella typhimurium un. \ T Enterobacter cloacae ATCC 13047.

Gaidāmie rezultāti ir tikai pozitīvi Voges-Proskauer reakcijas K. pneumoniae un E. cloacae. Pārējie dod negatīvas reakcijas.

Atsauces

  1. Laboratories Britania. MR-VP Medium. 2015. Pieejams: www.britanialab.com
  2. Microkit Laboratories M-Ident Voges Proskauer. 2014. Pieejams: http://www.medioscultivo.com
  3. Mac Faddin J. (2003). Biochemiskie testi klīniski nozīmīgu baktēriju identificēšanai. 3. ed. Redakcijas Panamericana. Buenosairesa Argentīna.
  4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobioloģiskā diagnoze. 12 ed. Redakcijas Panamericana S.A. Argentīna.
  5. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobioloģiskā diagnoze. 5. izdevums Redakcijas Panamericana S.A. Argentīna.