MIO vidējs pamats, sagatavošana un izmantošana



The puse MIO ir bioķīmisks tests, ko izmanto, lai palīdzētu identificēt Enterobacteriaceae sugas baktēriju sugas. Tas ir diezgan barojošs un sastāv no glikozes, rauga ekstrakta, peptona, tripteīna, L-ornitīna hidrohlorīda, bromkrezola purpura un agara..

Tās akronīma (MIO) nozīme apraksta katru no parametriem, ko var novērot šajā vidē; kustība, indols un ornitīns. Motilitāte ir mikroorganisma spēja pārvietoties ar karogu klātbūtni. Lai šo īpašību ievērotu, barotnes konsistencei jābūt daļēji cietai, tāpēc preparātam ir mazāk agara..

Indola ražošana liecina par triptofanāzes fermenta klātbūtni, kas iedarbojas uz aminoskābju triptofānu, jo nepieciešams izmantot atklātu reaģentu, lai padarītu indola ražošanu redzamu.

Visbeidzot, ornitīns nosaka, vai baktērija spēj dekarboksilēt aminoskābi, ti, ja tai ir orinitīna dekarboksilāzes enzīms.

Indekss

  • 1 Fonds
    • 1.1. Peptons, rauga ekstrakts un tripteīns
    • 1.2. Motilitāte
    • 1.3. Glikoze
    • 1.4 L-ornitīns
    • 1.5 pH indikators
  • 2 Sēšanas un attīstības tehnika
  • 3 Sagatavošana
    • 3.1. MIO Medium
    • 3.2. Kovacs reaģents (Indola testa izstrādātājs)
  • 4 Lietošana
  • 5 Kvalitātes kontrole
  • 6 Atsauces

Fonds

Peptons, rauga ekstrakts un tripteīns

Šie elementi veicina barotnes spēju. Tās kalpo kā barības vielu un būtisku aminoskābju avots baktēriju attīstībai.

Turklāt tripteīns ir triptofāna avots, lai pierādītu fermenta triptofanāzes klātbūtni, kas noārdās triptofānu ar reduktīvu deamināciju, kas atbrīvo indolu, piruvīnskābi, amonjaku un enerģiju..

Indols ir bezkrāsains, tāpēc tās klātbūtni atklāj, pievienojot piecus pilienus Ehrlich vai Kovacs reaģenta, abus ar p-dimetilaminobenzaldehīdu..

Šī savienojuma aldehīda grupa reaģē ar indolu, radot gredzena formas fuksija-sarkanu produktu uz agara virsmas.

Jebkuras krāsas pēdas jāuzskata par pozitīvu pierādījumu. Tests ir jāizlasa nekavējoties, jo pēc kāda laika krāsa pasliktinās.

No otras puses, šis tests jāatklāj pēc ornitīna kustības un dekarboksilēšanas rezultātu reģistrēšanas..

Mutiskā tulkošana

Pozitīvs tests: fuksija sarkana gredzena veidošanās, pievienojot Kovacs reaģentu.

Negatīvs tests: nav gredzena veidošanās.

Motilitāte

Baktēriju pārvietošanās spēja tiks pierādīta, ja tiek novērota duļķaina vide vai ja ir bieza augšanas līnija, kas paplašinās ap sākotnējo inokulāciju..

Negatīva kustības pārbaude tiks pierādīta, vērojot plānas izaugsmes līnijas, un visapkārt būs bez izaugsmes.

Ir svarīgi, lai motors tiktu nolasīts pirms indola atklāšanas, jo reaģenta pievienošana mākoņo visu barotni.

Mobilo, bet lēni augošo baktēriju gadījumā ir grūti pierādīt savu kustību ar šo barotni. Šajā gadījumā ieteicams izmantot citus testus vai metodes, piemēram, kustības vidē vai pilienu kritiena metodi.

Glikoze

Glikoze ir fermentējams ogļhidrāts, kas papildus tam, ka nodrošina enerģiju, paskābina vidi, kas ir vajadzīgs nosacījums aminoskābes ornitīna dekarboksilēšanai..

Glikozes fermentācija vienmēr jānotiek, pamatojoties uz principu, ka visas Enterobacteriaceaee sugas baktērijas fermentē glikozi..

L-ornitīns

Ja baktērija ražo ornitīna dekarboksilāzes fermentu, tā var iedarboties, kad barotne ir paskābināta, fermentējot glikozi..

Ornitīna dekarboksilāzes enzīms iedarbojas uz aminoskābes karboksilgrupu, kas ražo amīnu, ko sauc par putresīnu, kas atkal sārmaina vidi..

Šis tests jālasa pēc 24 stundu inkubācijas, jo, mēģinot izlasīt, pirms jūs varat nepareizi interpretēt testu ar viltus negatīvu.

Jāatceras, ka pirmā reakcija ir glikozes fermentācija, lai barotne sākotnējā fāzē kļūtu dzeltena (pirmās 10 līdz 12 stundas). Ja pēc tam notiek ornitīna dekarboksilēšana, barotne kļūs violeta.

Ir svarīgi interpretēt ornitīna dekarboksilēšanas testu pirms indola atklāšanas, jo Kovacs reaģenta pievienošana maina barotnes krāsu..

Mutiskā tulkošana

Negatīvs tests: vidēji dzeltena vai ar dzeltenu fonu.

Pozitīvs tests: pilnīgi violeta.

PH indikators

Šajā gadījumā tiek izmantots bromkresola purpursarkans; persona, kas ir atbildīga par atklāšanu, kad vidū ir pH izmaiņas. Kad paskābināts, indikators kļūst dzeltens, un, kad sārmainā kļūst violets.

Sēklu un attīstības tehnika

Lai audzētu MIO barotni, tiek izmantota taisna cilpa vai adata, un ar to tiek savākta daļa pētāmās kolonijas..

MIO vidē taisnā līnijā tiek veikta dziļa punkcija. Nav ieteicams veikt dubultu punkciju, jo tas var dot viltus kustības attēlu, ja punkcijas netiek veiktas tajā pašā vietā.

Inkubējiet 24 līdz 48 stundas 37 ° C temperatūrā aerobioze. Ievērojiet rezultātus šādā secībā: kustība, ornitīna dekarboksilēšana un beidzot atklāj indolu.

Ieteicams aseptiski ņemt 2 ml barotnes, pārnest to uz sterilu cauruli un veikt indola testu, lai, ja negatīva, pārējo oriģinālo mēģeni var inkubēt 24 stundas, lai atkal atklātu indolu..

Indola attīstība tiek veikta šādā veidā: MIO vidē pievieno 3 līdz 5 pilienus Kovacs reaģenta un enerģiski maisa. Tas tiek novērots, ja parādās fuksijas sarkans gredzens.

Sagatavošana

Puse MIO

Nosver 31 g MIO barotnes un izšķīdina vienā litrā destilēta ūdens.

Sildiet, līdz maisījums vārās vienu minūti, bieži maisot, līdz agars ir pilnīgi izšķīdis. Izplatiet 4 ml barotnes ar 13/100 mēģenēm ar vates vāku.

Sterilizē autoklāvā 121 ° C temperatūrā 15 minūtes. Noņemiet no autoklāvas un ļaujiet tai stāvēt taisni statīvā tā, lai izveidotos daļēji ciets bloks.

Uzglabāt ledusskapī 2-8 ° C. Pirms baktēriju celmu stādīšanas ļaujiet noskalot.

Dehidrētās vides krāsa ir smilškrāsas un nedaudz sagatavota dzeltenā krāsā.

Sagatavotās barotnes galīgais pH ir 6,5 ± 0,2

Vidēja viela kļūst dzeltena ar skābu pH un ir purpura ar sārmainu pH.

Kovacs reaģents (Indola testa izstrādātājs)

Šo reaģentu sagatavo šādi:

Izmēra 150 ml amila, izoamilgrupas vai butilspirta (jebkura no trim). Tajā izšķīdina 10 g p-dimetilaminobenzaldehīda. Pēc tam lēnām pievieno 50 ml koncentrētas sālsskābes.

Sagatavotais reaģents ir bezkrāsains vai gaiši dzeltens. Tas jāglabā dzintarkrāsas pudelē un jāuzglabā ledusskapī. Tumši brūnā krāsā redzama tās pasliktināšanās.

Arī Kovacs reaģentu var aizstāt ar Ehrlich reaģentu. Pēdējais, kas ir jutīgāks, dod priekšroku, lai atklātu indolu baktērijās, kas to ražo minimālā daudzumā, tāpat kā dažos gramnegatīvos nefermentējošos bacilos un noteiktos anaerobos.

Izmantot

Šis līdzeklis ir tests, kas papildina bioķīmisko testu akumulatoru, lai identificētu Enterobacteriaceae sugas baktērijas..

Ornitīna dekarboksilācijas dati kalpo, lai diferencētu Shigella sonnei, kas dod pozitīvu, no Shigella boydii, Shigella flexneri un S. dysenterieae, kas dod negatīvus.

Tā atšķir arī Klebsiella ģints, kas dod negatīvu Enterobacter ģints, kur lielākā daļa sugas ir pozitīva.

Kvalitātes kontrole

Katru reizi, kad tiek sagatavota MIO barotne, var veikt kontroles testu. Šim nolūkam barotnes uzvedības novērošanai izmanto zināmus vai sertificētus celmi.

Var izmantot celmus, kurus var izmantot Escherichia coli, Morganella morganii, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes un Proteus mirabilis.

Gaidāmie rezultāti ir E. coli un M. morganii. Dan M: +, I: + un O: +.

Klebsiella pneumoniae dod visu negatīvu (M: -, I: -, O :-). Proteus mirabilis un Enterobacter aerogenes dan M: + I: - un O: +.

Atsauces

  1. Mac Faddin J. (2003). Biochemiskie testi klīniski nozīmīgu baktēriju identificēšanai. 3. ed. Redakcijas Panamericana. Buenosairesa Argentīna.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobioloģiskā diagnoze. 12 ed. Redakcijas Panamericana S.A. Argentīna.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobioloģiskā diagnoze. 5. izdevums Redakcijas Panamericana S.A. Argentīna.
  4. Laboratories Britania. MIO Medio 2015. Pieejams: britanialab.com
  5. BD laboratorijas BBL Motility Indole ornitīna (MIO) medijs. 2007. Pieejams: bd.com
  6. Valtek Laboratories Vidējs M.I.O. Motilitāte, Indols, Ornitīns. 2010. Pieejams: andinamedica.com