Kultūras mediju sagatavošana, ko tā veido, mērķi un soļi

The barotnes sagatavošana Tā ir ikdienas metodika, ko izmanto laboratorijās vēlamo mikroorganismu augšanai. Kultūras barotnes ir cietie, šķidrie vai puscietie preparāti, kuriem piemīt visas mikrobu populācijas attīstībai nepieciešamās barības vielas.

Kopumā līdzekļi mikroorganismu audzēšanai ir bagāti ar olbaltumvielām un aminoskābēm un parasti satur kādu sastāvdaļu, kas veicina organisma, kuru vēlaties mācīties, piemēram, vitamīnu, asins, seruma augšanu..

Nav vispārējas vai universālas barotnes, jo tā sastāvs mainās atkarībā no interesējošā mikroorganisma vajadzībām. Dažas baktērijas var attīstīties jebkurā barotnē, bet citās ir īpašas prasības.

Indekss

• 1 Ko tas veido??
  • 1.1 Agars
  • 1.2 Šķidrumi
  • 1.3. Ekstrakti
  • 1.4. Peptoni
  • 1.5 Amortizatori
• 2 Mērķi
• 3 Plašsaziņas līdzekļu veidi
  • 3.1 Pamatojoties uz tās sastāvu
  • 3.2. Pamatojoties uz mikroorganisma veidu
• 4 soļi
• 5 Atsauces

Ko tas veido??

Mikroorganismus, piemēram, sēnītes un baktērijas, nevar pētīt individuāli to mazā izmēra dēļ. Tāpēc tie ir jāapstrādā mākslīgos līdzekļos, kas ļauj ievērojami palielināt iedzīvotāju skaitu.

Piemēram, ja mēs vēlamies pētīt baktērijas, mums ir jānodrošina viņiem pareizie apstākļi, lai viņi varētu vairoties un veidot koloniju (ko var novērot ar neapbruņotu aci).

Kultūras barotnes sagatavošana ir ļoti atšķirīga atkarībā no mikroorganisma veida, kuru vēlaties audzēt. Pirms tā sagatavošanas ir jāzina darba struktūras pamatprasības.

Tālāk tiks aprakstīti visbiežāk izmantotie kultūras barotnē izmantotie komponenti, lai iegūtu vispārēju priekšstatu par to sagatavošanu:

Agars

To izmanto kultūraugos kā želeju veidojošu vielu un pievieno, meklējot cietu vai daļēji cietu vidi. Pirmais cietinātājs, kas tika izmantots mediju pagatavošanā, bija želatīns, bet 1883.gadā agars tika ieviests bakterioloģijas pasaulē W. Hesse.

Bakterioloģiskajam agaram galvenais komponents ir kompleksu zaru polisaharīds, kas iegūts no aļģēm. Šo savienojumu izmanto kā biezinātāju parastiem pārtikas produktiem, piemēram, saldējumu un ievārījumiem.

Tas ir ļoti vērtīgs mikrobioloģijas elements vairāku iemeslu dēļ. Galvenokārt tāpēc, ka mikroorganismi to nevar noārdīt, sašķidrina temperatūrā 100 ° C un paliek šķidrā stāvoklī, līdz sasniedz 45 ° C vai mazāk.

Ja vēlaties sagatavot cietu vidi, agara koncentrācijai jābūt aptuveni 1,5%, bet daļēji cietām vielām jābūt gatavām no 0,3 līdz 0,5%..

Šķidrumi

Patogēno organismu audzēšanai ir nepieciešami ķermeņa šķidrumi, lai tie varētu attīstīties, kā viņi to dabiskā vidē. Šī iemesla dēļ pievieno veselas vai defibrilētas asinis. Šķidrumu ekstrahē no veselīga dzīvnieka un pēc sterilizēšanas pievieno barotnei.

Izvilkumi

Tos iegūst no dažādām dzīvnieku daļām (piemēram, gaļas vai aknu) vai dārzeņiem (sēklām) un apstrādā, lai iegūtu cietu koncentrātu pastas vai pulvera veidā. Visbiežāk ir raugs, iesals un gaļa.

Peptoni

Šos organiskos savienojumus iegūst dzīvnieku vai augu audu fermentatīvā vai ķīmiskā hidrolīzē. Mērķis ir pievienot saturu, kas bagāts ar aminoskābēm, kas ir proteīnu pamatvienības.

Amortizatori

Buferi vai bufera sistēmas novērš pēkšņas pH izmaiņas un palīdz uzturēt optimālo ķermeņa tolerances diapazonu.

Lielākā daļa organismu var attīstīties pareizi, ja pH ir 7, lai gan dažas baktērijas dod priekšroku sārmainā videi. Tomēr ir baktērijas, kas iztur pret pH svārstībām starp 6 un 9 vērtībām.

Attiecībā uz pH jutīgām sugām bojājumus nerada pārmērīgs ūdeņraža vai hidroksiljonu daudzums, bet gan vāju skābju vai bāzes palielināšanās, kas var iekļūt šūnā..

Tiek pievienoti arī rādītāji, kas norāda uz pH uzraudzību un fermentācijas vai citu procesu izraisītu noviržu novēršanu.

Mērķi

Galvenais mērķis, sagatavojot barotni, ir pievienot visus nepieciešamos komponentus, lai sekmētu organisma, kas vēlas tikt izolēts, veiksmīgu attīstību. Lai sasniegtu vēlamo barotni, jāidentificē visefektīvākā sastāvdaļu un barības vielu kombinācija.

Gan mediju sagatavošana, gan uzglabāšana ir būtiska, lai nodrošinātu veiksmīgu izaugsmi, jo šie soļi ir atkarīgi no vides sastāva un uzturvielu pieejamības..

Jāņem vērā, ka mikroorganismu audzēšana ir uzdevums, ko ietekmē vairāki faktori, kas nav saistīti ar barotni, piemēram, saņemtās gaismas intensitāte, temperatūra un vidējā skābuma vai sārmainības pakāpe. Tādēļ jāņem vērā katrs no šiem mainīgajiem lielumiem.

Plašsaziņas līdzekļu veidi

Pamatojoties uz tās sastāvu

Pamatojoties uz tās sastāvu, ir trīs galvenie kultūraugu veidi: dabiski vai empīriski, daļēji sintētiski un definēti sintētiski vai ķīmiski līdzekļi.

Dabas vide

Dabiskajā vidē precīzs sastāvs nav zināms. Tie ietver sastāvdaļas, piemēram, pienu, atšķaidītas asinis, dārzeņu sulas, gaļas un peptonu ekstraktus un infūzijas. Ekonomisku iemeslu dēļ bieži tiek pievienotas zemu izmaksu sastāvdaļas, piemēram, sojas ekstrakts, sūkalas, melase utt..

Daļēji sintētiskie materiāli

To sauc par daļēji sintētisku vidi, ja tā sastāvs ir daļēji zināms. Jebkura barotne, kas satur agaru, kļūst par pussintētisku vidi.

Starp tiem ir arī papa dekstrozes agars, czapek-dox agars, auzu agars, peptona gaļas agars, cita starpā..

Sintētisks vai ķīmiski definēts vide

Šajā gadījumā vidēja sastāva - oglekļa, slāpekļa, sēra, fosfora un citu augšanas faktoru avotu - ziņā ir pilnībā zināma. Tas ir ļoti noderīgi, ja vēlaties iegūt reproducējamus rezultātus citiem pētniekiem.

Tā sauktajiem "mikroorganismiem ar īpašām augšanas prasībām" nepieciešams pievienot nepieciešamos komponentus. Šāda veida piemērs ir Lactobacillus.

Pamatojoties uz mikroorganisma veidu

Līdzīgi ir arī cita kultūras barotņu klasifikācija, pamatojoties uz mikroorganisma veidu, kas tajā var augt. Saskaņā ar šo principu mums ir šādi vispārēji bagātināšanas, selektīvie un diferencētie līdzekļi. Katrs no tiem ir aprakstīts tālāk:

Vispārīgi līdzekļi

Tie atzīst daudzu mikroorganismu attīstību. Ja jebkuram organismam ir vajadzīgi īpaši augšanas apstākļi, tas nevarēs veiksmīgi attīstīties šāda veida kultūrās.

Bagātināšanas līdzekļi

Bagātināšanas līdzekļi veicina noteiktu mikroorganismu augšanu, bet nav pievienota neviena viela, lai nepieļautu citu mikrobu veidu augšanu tajā..

Selektīvie mediji

Viņi meklē konkrētu mikroorganisma augšanu, to sauc par sēnēm, baktērijām, vienšūņiem. Lai to izdarītu, viņi kavē citu attīstību.

Lai sasniegtu šo mērķi, var pievienot nāvējošus ķīmiskus savienojumus lielai mikroorganismu grupai un nekaitīgai interesējošam organismam vai pievienot enerģijas avotus, kurus var pielīdzināt tikai meklējamam mikrobioloģiskajam organismam..

Izvēloties medikamentus, tiek izmantoti selektīvi mediji, lai audzētu patogēnu mikroorganismu. Šeit ir nepieciešams veicināt patogēna augšanu un kavēt pacienta normālas mikrobioloģiskās floras attīstību.

Bismuta sulfīta agars, piemēram, neļauj augt grampozitīvas baktērijas un liels skaits baktēriju, kas atrodamas kuņģa-zarnu trakta dobumā. Tādēļ to izmanto, lai audzētu gramnegatīvas baktērijas, kas izraisa vēdertīfu, Salmonella typhi fekāliju paraugos.

Diferencēti mediji

Šim tipam tiek izmantota kāda no interesējošā organisma diagnostikas pazīmēm (piemēram, tā metabolisma īpatnībām), lai tās varētu identificēt pret citu sugu, kas aug tajā pašā vidē.

Gan diferenciālie mediji, gan selektīvie mediji ir ļoti noderīgi klīniskās mikrobioloģijas un sabiedrības veselības jomā, jo šīm disciplīnām ir jāatrod specifisku mikroorganismu klātbūtne saistībā ar sliktiem higiēnas apstākļiem vai apstākļiem..

Indikācijas vielas var pievienot kultūrai, kas dod raksturīgo iezīmi vēlamajai kolonijai. Piemēram, agar-eozīna-metilēnzilā (saīsināts EMB) un MacConkey-agars tiek pievienots ar laktozi un pH indikatoru..

Tādējādi, ja šajās vidēs tiek veidota kolonija ar spēju fermentēt laktozi un ražot aldehīdus, tos var novērot īpašā krāsā.

Pakāpieni

Šobrīd barotnes var iegādāties liofilizētā veidā. Tāpēc preparāts tiek atvieglots un tikai produkts tiek rehidratēts. Saturs jānosver (ņemot vērā galīgo daudzumu, ko vēlaties sagatavot) un izšķīdināt destilētā ūdenī, ievērojot visas produkta norādes..

Šķidrās barotnes saturs jāsadala vēlamajos konteineros (Petri trauki, caurules utt.) Turpmākai sterilizācijai. Lai sadalītu cieto vidi, ir nepieciešams to izkausēt, izmantojot mikroviļņu krāsni vai pakļaujot materiālu ūdens vannai. Vielas pH ir jāpielāgo.

Parasti agaru izmanto testu mēģenēs vai Petri trauciņos. Ja agars sacietē slīpā pozīcijā ar atbilstošu leņķi tā, lai gala gala mala būtu diagonāla, šī konstrukcija ir pazīstama kā flautas pīķa vai slīpās caurules. Kad agars cietina pilnīgi vertikālā stāvoklī, to sauc par "dziļu"..

Pēc mediju sterilizēšanas, izmantojot autoklāvu, tiem ļauj atdzist. Tie jārīkojas vidē, kurā nav mikroorganismu, visbiežāk ir strādāt ar apgaismotu šķiltavu, kas nodrošina aseptisku vidi apkārtnē..

Atsauces

1. Celis, J. E. (2006). Šūnu bioloģija: laboratorijas rokasgrāmata (2. sējums). Elsevier.
2. Finegold, S.M., Bailey, W.R., Barons, E.J., Fineglods, S.M., & Scott, E.G.. Bailey Scott: mikrobioloģiskā diagnoze. Pan American Medical.
3. Olivas, E. (2004). Mikrobioloģijas prakses rokasgrāmata I un II un parazitoloģija. Ciudad Juárez autonomā universitāte.
4. Schlegel, H. G., & Zaborosch, C. (1993). Vispārējā mikrobioloģija. Cambridge University Press.
5. Tortora, G. J., Funke, B. R. un Case, C. L. (2007). Ievads mikrobioloģijā. Ed. Panamericana Medical.