Puse SIM pamats, sagatavošana un izmantošana



The puse SIM Tas ir daļēji ciets un diferenciāls agars, kas īpaši izstrādāts, lai palīdzētu noteikt dažas baktērijas, galvenokārt no Enterobacteriaceae ģimenes. Tas sastāv no tripteīna, peptona, dzelzs sulfāta, amonija sulfāta, nātrija tiosulfāta un agara.

Šis materiāls ļauj veikt trīs svarīgus testus: ūdeņraža sulfīda ražošanu (H. \ T2S), indola veidošanās un kustīgums, tādējādi saīsinājums SIM. Pateicoties tās lielajai lietderībai, bakterioloģijas laboratorijā tas nav iespējams.

Atšķirībā no citiem medijiem, tam jābūt daļēji cietam, lai noteiktu noteiktu baktēriju kustības spēju. Šajā ziņā šis tests darbojas ļoti labi Enterobacteriaceae, bet ne gramnegatīvos, nefermentējošos bacillos, kur ieteicams izmantot citas metodes, piemēram, gaidošo kritumu.

SIM nesējs ļauj atšķirt dažas specifiskas īpašības, kas raksturo dažas baktērijas attiecībā pret citiem. Piemēram, Escherichia coli to izceļ ar H2S (-), indols (+) un kustīgums (+), bet Proteus mirabilis tas ir H2S (+), indola (-), kustīgums (+).

Indekss

  • 1 Fonds
    • 1.1. Barošanas avots
    • 1.2. Ūdeņraža sulfīda ražošana
    • 1.3 Indola veidošanās
    • 1.4. Motilitāte
  • 2 Sagatavošana
    • 2.1. Puse SIM
    • 2.2 Kovac reaģents
    • 2.3. Erlich reaģents
  • 3 Lietojumi
    • 3.1
  • 4 Kvalitātes kontrole
  • 5 Ierobežojumi
  • 6 Atsauces

Fonds

Tā ir kultūras barotne, kas tiek uzskatīta par diferenciālu, jo tā izmantošana ļauj atšķirt mikroorganismus, kas spēj ražot sērūdeņradi, no tiem, kas to nedara; izceļ arī tos, kas veido indolu no to triptofāna, kuri to nesagatavo, un visbeidzot atdala kustību no nelokāmām baktērijām..

Barošanas avots

Kā jebkurai barotnei tas satur elementus, kas nodrošina vajadzīgās barības vielas, lai varētu attīstīties nepieprasīti mikroorganismi. Šos elementus pārstāv peptoni un tripteīna.

Mikroorganisma attīstība vidē ir būtiska, lai spētu novērot šajā vidē novērtēto īpašību esamību vai neesamību.

Ūdeņraža sulfīda ražošana

Akronīma SIM burts S attiecas uz ūdeņraža sulfīda ražošanu (H2S). Baktērijas, kas spēj veidot sērūdeņradi, ņems nātrija tiosulfāta sēru.

Kad H ir izveidots2S - bezkrāsainas gāzes - tas reaģē ar vidē esošu dzelzs sāli, veidojot dzelzs sulfīdu, kas ir skaidri redzams (melnas nogulsnes). Baktērijas, kas nav H2S, atstājiet sākotnējās krāsas vidū (bēša).

Melno nogulšņu klātbūtne var kavēt kustības interpretāciju. Tomēr ir zināms, ka lielākā daļa H ražojošo enterobaktēriju2S ir pozitīva kustība, piemēram, Salmonella, Proteus un Citrobacter. Turklāt melnās nogulsnes, kas aptver gandrīz visu barotni, liecina par pozitīvu kustību.

Indola apmācība

Akronīma SIM otrais burts ir "I", kas apzīmē indola veidošanos.

Šajā ziņā tripteína papildus barības vielu avotam ir vēl viena pamatfunkcija. Šis peptons ir bagāts ar aminoskābēm, ko sauc par triptofānu, tādēļ tas var parādīt baktērijas, kas ražo triptofanāzi..

Šis enzīms ir atbildīgs par aminoskābju triptofāna izgriešanu, līdz ar to veidojot indolu (bezkrāsainu vielu), piruvīnskābi un amoniju..

Tāpēc, lai pierādītu šo reakciju, ir nepieciešams pievienot atklātu vielu (Ehrlich reaģents vai Kovac reaģents). Katrs no tiem reaģē ar indolu, veidojot gredzena formas sarkanu fuksija vielu uz agara virsmas. Ja fuksijas gredzens parādās, indola tests tiek interpretēts kā pozitīvs.

Baktērijas, kurām nav šī fermenta, neradīs gredzenu un tiek interpretētas kā negatīvs indola tests.

Ir svarīgi norādīt, ka indola testam jābūt pēdējam, kas jāinterpretē, jo pēc reaģenta pievienošanas vidē kļūst duļķains, un tas apgrūtina kustības vizualizāciju..

Motilitāte

Visbeidzot, vārda "SIM" burts "M" nozīmē kustību. Lai spētu novērtēt kustību, šī vide ir stratēģiski daļēji cieta, jo šī īpašība ir būtiska, lai varētu novērot, vai ir baktēriju kustība. Baktērijas, kurām ir flagella, ir tās, kas nodrošina šo pozitīvo testu.

Pozitīvs tests būs redzams, kad tiek novērota duļķainība gan sākotnējā inokulātā, gan ap to. Lai gan baktērijas, kas nav mobilās, attīstās tikai sākotnējā inokulācijas ceļā.

Sagatavošana

Puse SIM

Nosver 30 g dehidrētas vides un izšķīdina vienā litrā destilēta ūdens. Maisījumu atstāj nostāvēties 5 minūtes un pēc tam uzkarsē līdz vārīšanās temperatūrai, bieži maisot, līdz pilnībā izšķīst..

Sadaliet maisījumu mēģenēs ar vates vāku un autoklāvu 121 ° C temperatūrā 15 minūtes. Noņemiet caurules plaukstu no autoklāvas un ļaujiet tai sacietēt vertikālā stāvoklī, lai vide būtu bloka formā..

Uzglabāšanai to uzglabā ledusskapī, līdz to izmanto. Sagatavotajam vidējam pH jābūt 7,3 ± 0,2.

Barotnes ievietošanas brīdī tam jābūt istabas temperatūrā. Vidēja krāsa ir bēša.

Kovac reaģents

Izmēra 150 ml amila vai izoamila vai butilalkohola. (Izmantojiet vienu no trim minētajiem).

Izšķīdina 10 g p-dimetilaminobenzaldehīda. Pēc tam lēnām pievieno 50 ml koncentrētas sālsskābes.

Lietošanai gatavs reaģents ir bezkrāsains vai gaiši dzeltens. Tas jāglabā dzintarkrāsas pudelē un jāuzglabā ledusskapī. Nelietot, ja tam ir tumši brūna krāsa; kas norāda, ka tas ir bojāts. Šis reaģents ir ieteicams, strādājot ar enterobaktērijām.

Erlich reaģents

Nosver 2 g p-dimetilaminobenzaldehīda un izšķīdina 190 ml absolūtā etilspirta un lēni sajauc ar 40 ml koncentrētas sālsskābes. Kovac reaģentu turiet tādā pašā veidā. Ehrlich reaģentu lieto vairāk par fermentāciju un anaerobām baktērijām.

Lietojumi

SIM vidē tiek izmantotas bakterioloģijas laboratorijas. Tā priekšrocība ir tāda, ka tajā pašā caurulē Enterobacteriaceae identifikācijā var novērot trīs būtiskas īpašības.

Sēta

Pareizais veids, kā sēt šo barotni, ir adata, ar kuru tiek ņemta daļa pētāmās tīrās kolonijas un ievietota vertikāli barotnes centrā. Jāveic viens vilces spēks. Punkcijai nevajadzētu nonākt caurules apakšā, pareizais ir aptvert tikai divas trešdaļas no dziļuma.

Nav ieteicams atkārtot inokulātu, jo tas var izraisīt viltus pozitīvas kustības interpretācijas. Inokulēto barotni inkubē aerobiozi 37 ° C temperatūrā 24 stundas.

Noslēgts laiks, kas tiek novērots, ja bija vai nav bijis H2S un motilitāte tiek nolasīta. Visbeidzot indols tiek atklāts, pievienojot 3 līdz 4 pilienus Ehrlich vai Kovac reaģenta, to maigi sajauc un interpretē.

Kvalitātes kontrole

Kā sterilitātes kontrole vienu vai divas caurules inkubē bez inokulācijas cepeškrāsnī 37 ° C temperatūrā 24 stundas. Paredzams, ka pēc šī laika nebūs krāsas pieauguma vai izmaiņas.

Kā kvalitātes kontroli var izmantot sertificētus zināmus celmus, piemēram: Escherichia coli ATCC 25922, Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella sonnei ATCC 29930, Proteus vulgaris ATCC 13315.

Gaidāmie rezultāti ir: Escherichia coli H2S negatīvs, indols un pozitīvā kustība, Enterobacter aerogenes tikai pozitīva kustība, Salmonella typhimurium H2S un pozitīva kustība ar negatīvu indolu. Proteus vulgaris visi pozitīvi, bet Klebsiella pneumoniae un Shigella sonnei visi negatīvi.

Ierobežojumi

-Daži. \ T Morganella morganii, starp citiem celmiem var radīt brūnganu pigmentu šajā vidē melanīna ražošanas dēļ, to nedrīkst jaukt ar dzelzs sulfīda nogulsnēm. Nepieredzējušiem speciālistiem šī situācija var radīt viltus pozitīvus H testa interpretācijā2S.

-Stingras aerobās baktērijas aug tikai caurules virsmā, kas apgrūtina kustības interpretāciju.

Atsauces

  1. BD laboratorijas BBL SIM medijs. 2008. Pieejams: bd.com
  2. Neogen Laboratories SIM vidējais. Pieejams: foodsafety
  3. Difco Francisco Soria Melguizo. SIM vidējais. 2009. Pieejams: http://f-soria.es
  4. Brizuela-Lab laboratorija SIM vidējais. Pieejams: .brizuela-lab.com
  5. Laboratories Britania. SIM vidējais. 2015. Pieejams: studyres.es/doc
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobioloģiskā diagnoze. 5. izdevums Redakcijas Panamericana S.A. Argentīna.