Peptona ūdens pamats, sagatavošana un izmantošana

The peptonada ūdens tas ir neselektīvs šķidruma bagātināšanas līdzeklis, ko galvenokārt izmanto kā pārtikas paraugu vai citu materiālu atšķaidītāju. Tas nozīmē, ka no ķīmiskā viedokļa tas ir ļoti vienkāršs, satur gaļas peptonu, nātrija hlorīdu un ūdeni.

Tam ir noteikta uzturvērtība, kas ļauj bagātināt paraugu. Ja ir bojātas baktērijas, tas nozīmē, ka tam ir tiesības atjaunot dzīvotspēju. Tas ir īpaši noderīgs Enterobacteriaceae sugas baktēriju reģenerācijai.

Salmonellu reģenerācijas gadījumā ieteicams izmantot buferizētu peptonada ūdens variantu; Tas kalpo kā parauga iepriekšējas bagātināšanas līdzeklis, šajā gadījumā tas satur citus elementus, piemēram, dinātrija fosfātu un dikālija fosfātu..

Parasti peptonada ūdeni sagatavo neitrālā pH līmenī, tomēr ir arī citi varianti, kuros pH ir 8,5 ± 0,2 (sārmains), jo izolējamās baktērijas ir alkalofīlas, piemēram, Vibrio cholerae.

No otras puses, šo barotni var izmantot kā bāzes vidi ogļhidrātu fermentācijas testiem.

Indekss

• 1 Fonds
• 2 Sagatavošana
  • 2.1 Mājas sagatavošana (nekomerciāla)
  • 2.2 Sagatavošana, izmantojot komerciālu barotni
  • 2.3 Gatavošanās fermentācijas testiem
  • 2.4 Citi peptonada ūdens varianti
• 3 Lietošana
  • 3.1. Stoļu paraugi
  • 3.2 Pārtikas paraugi
• 4 Kvalitātes kontrole
• 5 Ierobežojumi
• 6 Atsauces

Fonds

Peptoni nodrošina barības vielas, kas nepieciešamas baktēriju attīstībai, jo īpaši slāpekļa un īsās ķēdes aminoskābes, bet nātrija hlorīds uztur osmotisko līdzsvaru.

Turklāt barotne ļauj izkliedēt, homogenizēt un labot baktēriju šūnas, kuras ir bojātas rūpnieciskos procesos..

Kā atšķaidītājs tas ir ideāls, efektīvi aizstājot fizioloģisko šķīdumu (SSF) vai fosfāta buferšķīdumu (PBS)..

Baktēriju augšana ir acīmredzama, novērojot tā duļķainumu.

Sagatavošana

Mājas gatavošana (nekomerciāla)

Nosver 1 g peptona un 8,5 g nātrija hlorīda, izšķīdina 1 litrā destilēta ūdens. PH jākoriģē līdz 7,0. Šim nolūkam var izmantot 1 N nātrija hlorīdu.

Sagatavošana, izmantojot komerciālu barotni

Nosver 15 g dehidratēta vide un izšķīdina vienā litrā destilēta ūdens. Homogenizējiet maisījumu. Ja nepieciešams, maisījumu vāra 1 minūti, lai palīdzētu pilnībā izšķīst. Pasniedziet 100 ml flakonos vai 10 ml mēģenēs pēc vajadzības. Autoklāvs 121 ° C temperatūrā 15 minūtes.

Atdzesējiet un lietojiet vai uzglabājiet ledusskapī. Vidēja pH ir 7,2 ± 0,2.

Dehidrētās vides krāsa ir gaiši bēša un sagatavota gaiši dzintara krāsā.

Sagatavošanās fermentācijas testiem

Iepriekšējā sagatavošanā - pirms sterilizēšanas - ogļhidrāts jāpievieno līdz 1% galīgajai koncentrācijai, kā arī Andrade indikatoram (skābes fuksīns) vai fenola sarkanajam (0,018 g / l). Uz caurulēm jānovieto Durhamas zvans, kas paredzēts gāzes veidošanās novērošanai.

Citi peptonada ūdens varianti

-Peptona ūdens, kas buferēts vai buferēts

Tas satur kazeīnu, fermentu hidrolizātu, nātrija hlorīdu, kālija dihidrogēnfosfātu un nātrija hidrogēnfosfāta dodekahidrātu. Galīgais pH ir 7,0 ± 0,2.

Lai pagatavotu, nosver 20 g dehidrētas vides un izšķīdina 1 litrā destilēta ūdens. Ļaujiet nostāvēties apmēram 5 minūtes. Karsē 1 minūti, līdz tas pilnībā izšķīdis.

Pēc vajadzības ielej piemērotās pudelēs. Sterilizējiet, izmantojot autoklāvu 121 ° C temperatūrā 15 minūtes.

-Sārmains peptonēts ūdens

Nosver 25 g dehidrētas vides un izšķīdina 1 litrā ūdens. Turpināt, kā aprakstīts iepriekš. PH ir no 8,3 līdz 8,7.

Izmantot

Inokulātu veic, novietojot paraugu tieši.

To lieto, lai atšķaidītu paraugus, īpaši, ja ir aizdomas, ka var būt bojātas baktērijas. Parasti atšķaidījumi ir 1:10 un 1: 100.

Inkubējiet 24 stundas aerobiozi 35-37 ° C temperatūrā.

Stoļu paraugi

Attiecībā uz izkārnījumiem, kas meklē salmonellu, ieteicams izmantot buferizētu vai buferētu ūdeni kā bagātināšanas vidi..

Lai to izdarītu, rīkojieties šādi:

Ja izkārnījumi veidojas, ņem 1 g parauga. Ja tie ir šķidrumi, paņemiet 1 ml izkārnījumu un suspendējiet mēģenē ar 10 ml buferēta peptonēta ūdens. Attiecībā uz taisnās zarnas tamponiem iztīriet tamponā esošo materiālu caurulē ar buferētu peptonētu ūdeni.

Visos gadījumos labi samaisa un homogenizē paraugu.

Inkubē 37 ° C temperatūrā 18 līdz 24 stundas. Pēc tam sub-kultivē bagātināšanas buljonā, piemēram, selenīta cistīna buljonā vai tetrationāta buljonā, 37 ° C temperatūrā 18-24 stundas. Visbeidzot, audzē selektīvā barotnē Salmonella, piemēram, SS agaru, XLD agaru, Hektoen agaru, cita starpā.

Pārtikas paraugi

Peptona ūdeni izmanto kā bagātināšanas vidi vai kā vienkāršu atšķaidītāju, bet, ja tiek meklēta Salmonella suga, to izmanto kā iepriekš bagātināšanas vidi, kā jau aprakstīts..

Pārtikas produktos rīkojieties šādi:

Cietiem pārtikas produktiem sver 25 g parauga un šķidriem pārtikas produktiem - 25 ml. Minēto daļu ievieto kolbās, kas satur 225 ml peptonēta ūdens. Samaisa un homogenizē paraugu.

Ja ir aizdomas, ka mikrobu slodze ir augsta, var veikt atšķaidījumus vai decimāldaļas, lai atvieglotu koloniju veidojošo vienību (CFU) skaitīšanu..

Atšķaidījumu skaits būs atkarīgs no parauga veida un analītiskās pieredzes.

Gluži pretēji, ir aizdomas, ka mikrobu slodze ir ļoti zema, atšķaidīšanu nav nepieciešams veikt. Pēc tam subkultivējiet selektīvos plašsaziņas līdzekļos.

Attiecībā uz pārtiku no jūras, piemēram, jūras veltēm, zivis, cita starpā, meklē arī Vibrio cholerae vai citas Vibrio sugas, jāizmanto peptona ūdens, kas noregulēts līdz pH 8,5 (sārmains peptonēts ūdens).

Kvalitātes kontrole

No katras sagatavotās partijas vienu līdz divas mēģenes 24 stundas inkubē aerobiozi 37 ° C temperatūrā. Laika beigās nav jāievēro duļķainība vai krāsas izmaiņas.

Lai novērtētu to efektivitāti, var izmantot arī labi zināmus kontroles celmus:

Šim nolūkam var izmantot šādus baktēriju celmus: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 8927, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 1428, Salmonella enteritidis ATCC 13076.

Visos gadījumos ir sagaidāma apmierinoša mikrobu attīstība, ko novēro barotnes duļķainums.

Ierobežojumi

-Dehidrēta vide ir ļoti higroskopiska, tāpēc tā ir jānovieto no mitruma.

-Barotni nedrīkst lietot, ja tiek novērota kāda veida pasliktināšanās.

-Dehidrētā barotne jāglabā no 10 līdz 35 ° C

-Sagatavotā barotne jāuzglabā ledusskapī (2-8 ° C)..

Atsauces

1. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B un Velázquez O. Pārtikas produktu mikrobioloģiskās analīzes metodes. 2009, 2. izdev. Ķīmijas fakultāte, UNAM. Meksika UNAM 1. ķīmijas fakultātes rokasgrāmatu un dokumentu administratora (AMyD) versija. Pieejams: http://depa.fquim.unam.mx
2. Laboratories Britania. Buferēts peptonada ūdens. 2015. Pieejams: britanialab.com
3. Neogen Laboratories Peptona ūdens. Pieejams: foodsafety.neogen.com
4. Laboratories Britania. Peptona ūdens. 2015. Pieejams: britanialab.com
5. Merck Laboratories Buferēts peptona ūdens. Pieejams vietnē: merckmillipore.com
6. Laboratorijas Conda Pronadisa. Sārmains peptonēts ūdens. Pieejams: condalab.com
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobioloģiskā diagnoze. 12 ed. Redakcijas Panamericana S.A. Argentīna.